Dénombrement d’Escherichia Coli par culture :
Notre culture possède une microflore bactérienne qu’on va essayer de dénombrer, et
cela en réalisant des dilutions en cascade en prélevant 1 mL de notre solution et qu’on dépose
dans 9 mL de sérum physiologique (10-1), puis on prélève 1 mL aussi de ce tube qu’on transfère
dans un 2eme tube pour la dilution (10-2), et ainsi de suite jusqu'à la dilution (10-8).
Par la suite on prend les tubes de dilutions de -5 à -8, on prélève 100 µL qu’on étale sur
des boites de pétri, en double boite par dilution, et l’étalement se fait à l’aide d’un râteau pour
bien étaler la suspension sur la gélose. Ensuite on va incuber nos boites pendant 24h à 37°C et
le couvercle en bas.
- Dénombrement sur boite de Pétri :
Le lendemain on procède au comptage des colonies sur chaque boite de pétri.
Dénombrement des colonies sur les boites :
Les résultats obtenus dans notre expérience ne sont pas significative car on n’a pas assez
de colonies qui ont poussées après incubation, et probablement cela est dû à une erreur de
dilution ou bien on n’a pas pris assez de bactérie lors de l’ensemencement.
Pour cela on a pris les résultats du groupe DZ qui sont les suivants :
Sachant que nous avions mis 100µL, il a fallu mettre les résultats en mL en suivant la formule
donnée pour la boite de dilution -5 :
N = nombre de colonies * Facteur de dilution = 60 * 105 * 10 = 6 * 107 UFC/mL.
- Dénombrement par spectrophotométrie :
On fait une extraction totale d’ADN des 2 mL d’Escherichia Coli, puis on mesure la densité
optique à 600 nm à des temps différents. Les résultats sont les suivant :