Ostéites du pied diabétique aspects fondamentaux. - Infectio
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Ostéites du pied diabétique aspects fondamentaux. Dr F. Baudoux, Diabétologie, CHRU Lille Microbiologie de l’ostéite Domination constante S.aureus Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae et Proteus spp. Pseudomonas aeruginosa. Anaérobies: 5% des patients Finegoldia magna Peptococcus anaérobies. Staphylocoques coagulase négative et Corynebacterium sp. ont été décrites comme pathogènes Retrouvés dans 50% des cas Wheat, L.J. et al. Diabetic foot infections. Bacteriologic analysis. Arch. Intern. Med 146, 1935-1940 (1986) Armstrong, D.G., Lanthier, J., Lelievre, P. & Edelson, G.W. Methicillin-resistant coagulase-negative staphylococcal osteomyelitis and its relationship to broad-spectrum oral antibiosis in a predominantly diabetic population. J Foot Ankle Surg 34, 563-566 (1995). Senneville, E. et al. Culture of percutaneous bone biopsy specimens for diagnosis of diabetic foot osteomyelitis: concordance with ulcer swab cultures. Clin. Infect. Dis 42, 57-62 (2006). Lavery, L.A., Sariaya, M., Ashry, H. & Harkless, L.B. Microbiology of osteomyelitis in diabetic foot infections. J Foot Ankle Surg 34, 61-64 (1995). Newman, L.G. et al. Unsuspected osteomyelitis in diabetic foot ulcers. Diagnosis and monitoring by leukocyte scanning with indium in 111 oxyquinoline. JAMA 266, 1246-1251 (1991). Technique de prélèvements corrélation entre prélèvement superficiel, ponction à l’aiguille fine et biopsie osseuse est faible. Biopsie osseuse 81% succès vs 50% après identification des bactéries situées en superficie. Armstrong, D.G., Lanthier, J., Lelievre, P. & Edelson, G.W. Methicillin-resistant coagulase-negative staphylococcal osteomyelitis and its relationship to broad-spectrum oral antibiosis in a predominantly diabetic population. J Foot Ankle Surg 34, 563-566 (1995). Senneville, E. et al. Outcome of diabetic foot osteomyelitis treated nonsurgically: a retrospective cohort study. Diabetes Care 31, 637-642 (2008). Recommandations Plaie cliniquement infectée OUI Plaie superficielle Nettoyage serum physiologique Curetage/ecouvillonnage Absence de collection Prélèvement et conditionnement Labo de Bactériologie NON Plaie profonde Pas de prélèvement Collection Contact osseux Aspiration aiguille fine Débridement local Serum stérile Os liquéfié Os solide BO possible Société de pathologie Infectieuse de langue française. Recommandations pour la pratique clinique. Prise en charge du pied diabétique infecté. Med Mal Infect 2077;37:26-50 BO impossible Biofilms Organisation bactérienne Métabolisme ralenti Adhérence Résistance aux antibiotiques Facteur d’échec thérapeutique Objectifs de l’étude Caractériser la microbiologie de l’ostéite du pied diabétique Quantité Qualité Caractériser l’organisation des bactéries dans l’os Caractériser les staphylocoques Capacité d’adhérence Capacité à créer un biofilm Matériel et méthode Etude prospective réalisée entre février 2010 à mai 2011. Tout patient diabétique présentant une ostéite du pied nécessitant une biopsie osseuse et/ou une amputation. Ostéite prouvée par clinique + radio ou IRM Hôpital Claude Huriez, CHRU Lille Centre hospitalier de Tourcoing 2 à 3 biopsies osseuses 1 à 2 biopsies Quantitatif , qualitatif 1 biopsie MEB Laboratoire de bacteriologie clinique, Faculté de Pharmacie U995 Université Lille 1 Biopsie osseuse par voie saine: 1 à 2 prélèvements placés dans un tube taré 1 prélèvement placé dans du glutaraldéhyde pour fixation en vue de la microscopie électronique à balayage 1 prélèvement envoyé au laboratoire de bactériologie de l’hôpital. Lieu DN Date biopsie Geste Diabète date type IR neuro arterio ATB fenetre ATB T1 T 28/12/1951 07/02/2009 amp P1 Dt 1994 II 2004 oui Nd Zyvoxid > 3 semaines T2 T 23/11/1940 11/02/2010 amp 2è rayon G Dec 2009 IIR oui Nd non > 3 semaines T3 T 14/2/1955 16/03/2010 Biopsie P2 2ème orteil G 2007 II non oui non non > 3 semaines T4 T 19/5/1945 16/03/2010 Biopsie tête 3ème meta G Nd II oui oui oui non > 3 semaines 16-sept T5 T 14/10/1960 24/09/2010 Biopsie 1er rayon Dt 2000 II oui oui Nd Amox augmentin T6 T 18/12/1950 28/09/2010 amp transmetaphal 1er G 2008 II oui oui non non J-17 T7 T 19/5/1945 10/12/2010 biopsie hallux Nd II oui oui Nd non > 3 semaines T8 T 22/11/1952 14/10/10 Biospie P1 G Nd II oui oui nd non > 3 semaines T9 T 02/03/1947 15/10/10 Biopsie P1 2ème ortiel G Nd II non oui non non > 3 semaines T10 T 30/06/1944 04/01/2011 biopsie 5ème meta 1987 II oui oui non tazo/targo 07/12/2010 T11 T 15/09/1936 21/01/2011 biopsie 1er meta 1986 II non oui oui tazo/targo 14/12/2010 T12 L 09/11/1949 24/01/2011 amp 3ème orteil 1997 II 2006 oui oui augmentin + pyostacine non T13 L 24/07/1946 26/01/2011 amp 2ème rayon Dt 1995 II non non oui tazo/targo non T14 L 05/09/1952 23/12/2010 amp 1 er rayon 2000 II 2010 oui non tazo/targo non T15 T 18/12/1950 01/02/2011 Biopsie 2ème méta G 2008 II oui oui non non > 3 semaines T16 L 02/03/1948 09/02/2011 Biospie 5ème meta Nd II oui oui oui augmentin non T17 T 13/09/1959 17/02/2011 Biopsie 1,3,4 meta Dt 2000 II non oui oui non > 3 semaines T18 T 19/09/1959 17/02/2011 Biospie 4,5 meta G 2000 II non oui oui non > 3 semaines T19 L 09/02/1941 17/02/2011 amp 5ème rayon G 1990 II oui oui oui tazo/targo non T20 L 18/03/1942 18/03/2011 amp hallux 1996 II oui oui oui tazo/zyvoxid non T21 L 27/05/1941 18/02/2011 amp 4ème orteil D Nd II oui non oui tazo non T22 L 01/10/1951 21/02/2011 amp 2ème orteil 1978 I oui non tazo/vanco non T23 L 15/08/1946 03/03/2011 amputation 2/3ème orteil 1992 II oui non T24 L 21/02/1942 03/03/2011 reprise 1er meta 2007 II oui non oui non oui fortum/ ciflox/vanco non 09-févr T25 T 19/02/1922 09/03/2011 biopsie hallux G Nd II non oui oui Vibramycine /clamoxyl T26 L 28/02/1960 11/03/2011 amputation 3ème orteil G 2005 II oui oui non augmentin non T27 T 26/04/1935 15/03/2011 Biopsie 5ème rayon gauche Nd II non oui non pyostacine 15 jours T28 T 09/02/1947 15/03/2011 biopsie 5ème rayon droit 1975 I oui oui non Targocid invanz 21/02/2011 T29 L 27/12/1925 17/03/2011 amputation hallux droit Nd II oui oui oui tazo/targo non T30 T 15/12/1939 30/03/2011 Biopsie calcaneum G 1989 II non oui oui bristopen clamoxyl 18-févr T31 L 29/06/1943 04/06/2011 biopsie transmeta D 1995 II oui oui oui non > 3 semaines 20/10/1962 04/07/2011 7 mars/16 mars biopsie 1er meta 2001 II oui oui oui Tazo/targo amputation 1er rayon 1996 II oui oui oui Zyvoxid non 19/04/2011 biopsie tarse 2005 IIr non oui oui Tavanic / dalacine 05/04/11 31/01/1949 20/04/2011 resection 1ere phalange 1er rayon gauche 1995 II non oui oui Tazo/vanco non L 16/11/1931 05/04/2011 amputation 2ème G 2011 II non oui oui Tazo non L 21/02/1953 05/04/2011 amputation 5ème orteil Nd II non oui oui tazo/targo non T32 T T33 L T34 T 21/06/1951 T35 L T36 T37 14/08/1922 04/07/2011 n= 38 prélèvements ; 35 patients 65,8% d’hommes 89.4% diabétiques de type II âge moyen 65 ans. 55% chirurgie orthopédique du CH de Tourcoing 33% étaient conclus stériles (n=7) par le laboratoire de routine. 45% chirurgie vasculaire du CHRU de Lille. 23% était conclus stériles (n=4). Effet de la sonication Souches non soniqué soniqué Staphylococcus aureus 3 2 Staphylococcus coagulase négative 8 6 Corynebacterium 4 2 Serratia liquefaciens 1 0 Enterobacter cloacae 1 1 Escherichia coli 2 1 Enterococcus faecalis 1 1 Citrobacter diversus 1 1 Providencia rettgeri 1 0 Total 22 14 Effet de la sonication diversité réduite bactéricidie surtout pour les bactéries Gram négatif. Taux identiques entre les deux prélèvements: Répartition identique au sein de l’os Bactérie identifiée dans l’ostéite Cocci Gram+ Bacille Gram+ nb Staphylococcus aureus 12 Staphylococcus capitis 2 Staphylococcus caprae 2 Staphylococcus epidermidis 9 Staphylococcus lugdunensis 2 Staphylococcus pettenkoferi 2 Staphylococcus sciuri 1 Staphylococcus simulans 1 Staphylococcus warneri 2 Staphylococcus sp 1 Micrococcus luteus 1 Micrococcus sp 1 Streptococcus agalactiae 1 Enterococcus faecalis 5 Enterococcus faecium 1 Corynebacterium 10 Dermabacter hominis 2 Citrobacter diversus 1 Enterobacter cloacae 3 Escherichia coli 2 Serratia liquefaciens 1 Serratia marcescens 2 Proteus mirabilis 3 Providencia rettgeri 1 Morganella morganii 1 Autres BGN Pseudomonas aeruginosa 1 Anaérobie Anaerococcus prevotii 1 Finegoldia magna 2 Propionibacterium acnes 2 Veillonella 2 Bacille Gram Entérobactérie 77 souches identifiées: 28% staphylocoques coagulase négative 15,3% Staphyloccus aureus 12,8% Corynebacterium Microbiologie ostéite 1,76 bactéries/ plvt 15.4% des souches sont des anaérobies 28,6% des plvts: présence d’anaérobies. Cocci Gram+ Bacille Gram+ Staphylococcus aureus 12 Staphylococcus capitis 2 Staphylococcus caprae 2 Staphylococcus epidermidis 9 Staphylococcus lugdunensis 2 Staphylococcus pettenkoferi 2 Staphylococcus sciuri 1 Staphylococcus simulans 1 Staphylococcus warneri 2 Staphylococcus sp 1 Micrococcus luteus 1 Micrococcus sp 1 Streptococcus agalactiae 1 Enterococcus faecalis 5 Enterococcus faecium 1 Corynebacterium 5 Dermabacter hominis 2 F. Lecuire et al. Infections à Staphylocoque lugdunensis sur prothèses articulaires. Revue de chirurgie orthopédique 2007,93,88-92 Loïez, C. et al. First case of osteomyelitis caused by "Staphylococcus pettenkoferi". J. Clin. Microbiol 45, 1069-1071 (2007). Van Bosterhaut, B., Boucquey, P., Janssens, M., Wauters, G. & Delmée, M. Chronic osteomyelitis due to Actinomyces neuii subspecies neuii and Dermabacter hominis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis 21, 486-487 (2002). Caractéristiques des staphylocoques Résistance des S. aureus? 2 SARM/ 12 Caractéristiques des staphylocoques Gélatinase Exprimée par 58% des staphylocoques 11/12 des S.aureus 8/22 des staphylocoques coagulase négative Caractéristiques des staphylocoques Test au Rouge congo capacité à produire un exopolysaccharide Podbielska, A., Galkowska, H., Stelmach, E., Mlynarczyk, G. & Olszewski, W.L. Slime production by Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis strains isolated from patients with diabetic foot ulcers. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.) 58, 321-324 (2010). Arciola, C.R., Baldassarri, L. & Montanaro, L. Presence of icaA and icaD genes and slime production in a collection of staphylococcal strains from catheter-associated infections . J. Clin. Microbiol 39, 2151-2156 (2001). 65% de positivité 70% des Staphylococcus aureus Sur plaie chronique 55 souches de S. aureus: 69% + 20 souches S. epidermidis 73% + Podbielska, A., Galkowska, H., Stelmach, E., Mlynarczyk, G. & Olszewski, W.L. Slime production by Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis strains isolated from patients with diabetic foot ulcers. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.) 58, 321-324 (2010) Nasopharynx 146 Staphylococcus epidermidis 58,9% + Los, R. et al. A comparative analysis of phenotypic and genotypic methods for the determination of the biofilm-forming abilities of Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol. Lett 310, 97-103 (2010) Test au crystal violet Capacité d’adhérence de la bactérie à une surface inerte. La positivité est définie par une densité optique à 570 nm >0,2 Los, R. et al. A comparative analysis of phenotypic and genotypic methods for the determination of the biofilm-forming abilities of Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol. Lett 310, 97-103 (2010). Stepanović, S. et al. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. APMIS 115, 891-899 (2007). Test au crystal violet Conditions du test Incubation 24/48h Resolubilisation éthanol Concordance entre méthodes phénotypiques RCA + RCA- total Crystal violet + 17 6 23 Crystal violet - 1 6 7 18 12 30 Total Adhérence sur disque biocéramique 6 disques ont été testés. 2,50E+04 Evaluation de l’adhérence d’une souche RCA positive bactéries non adhérentes UFC/g UFC/g Evaluation de l’adhérence d’une souche RCA négative bactéries adhérentes 1,20E+04 bactéries non adhérentes bactéries adhérentes 9,99E+03 2,00E+04 7,99E+03 1,50E+04 5,99E+03 9,99E+03 3,99E+03 4,99E+03 1,99E+03 -1,00E+01 -1,00E+01 Pastille 1 Pastille 2 Pastille 4 Pastille 1 Zamora, N. et al. In-vitro evaluation of the adhesion to polypropylene sutures of non-pigmented, rapidly growing mycobacteria. Clin. Microbiol. Infect 13, 902-907 (2007). Pastille 2 Pastille 4 PCR icaA et icaD Aucun résultat n’a été mis en évidence. Manipulation avec ADN extrait en cours. MEB Structure osseuse en MEB MEB Alternance de zones couvertes de biofilm et de zones nues. Disparition du biofilm après épuisement du substrat énergétique? Risque de négativité des biopsies osseuses? Conclusion (1) 1ère évaluation quantitative de la charge bactérienne dans l’ostéite aigue ou chronique du pied diabétique: 5000 bactéries/g d’os Quantité identique sur deux prélèvements non contigus: argument pour la réalisation de la biopsie osseuse Conclusion (2) Identification de 77 souches bactériennes Prédominance des staphylocoques Nombreux staphylocoques coagulase négative souvent négligés bien que connus pathogènes dans la littérature Présence de BGN ( ostéite aiguë) Bactéries anaérobies fréquentes dans l’ostéite chronique Pas d’intérêt à la sonication Conclusion (3) Gélatinase présente dans 58% des cas Capacité à produire des exopolysaccharides dans 65% des cas Capacité d’adhésion à une surface inerte dans 76.6% des cas. Concordance des deux méthodes phénotypiques: 76.6% Nécessité d’optimisation de la méthode moléculaire
