Université Mohammed Ier Faculté des Sciences Oujda Département

Université Mohammed Ier
Faculté des Sciences
Oujda
Département de Biologie
TD de Méthodes de séparation et d’analyse biochimique
Série N° 3
Exercice 1
On a réalisé une analyse qualitative d’un médicament par chromatographie sur couche
mince.
Le chromatogramme obtenu est représenté ci-après.
1. Rappeler
le
principe
de
la
chromatographie et décrire les
opérations à réaliser pour obtenir un tel
chromatogramme.
2. Que peut-on dire de la composition de
ce médicament ?
3. Déterminer alors le rapport frontal des
constituants mis en évidence dans ce
médicament.
4. Un autre médicament contient de
l’acide salicylique, du paracétamol et
de la caféine.
Pour un déplacement d’éluant, depuis
la ligne de dépôt, égal à 5,0 cm,
représenter le chromatogramme obtenu
avec le même éluant et une plaque
identique.
Exercice 2
On veut séparer 3 acides-aminés : l'acide L-glutamique, la L-leucine et la L-lysine par
chromatographie sur une résine polystyrénique substituée par des groupements
sulfonate (-SO3-). Les pH isoélectriques de l'acide L-glutamique, de la L-leucine et de
la L-lysine sont respectivement : 3,22 ; 5,98 ; 9,74, à 25 °C.
On dépose ces 3 acides aminés sur la colonne, à pH 2, puis on élue en amenant
progressivement le pH à 7.
Quels acides aminés sont élués et dans quel ordre ? (On considérera que les
interactions acide aminé-résine sont uniquement d'ordre électrostatiques).
Exercice 3
La diéthylaminoéthylcellulose (DEAE-cellulose) est un support échangeur d'anions,
obtenu en substituant la cellulose par des groupements diéthylaminoéthyls :
CH2-CH3
-CH2-CH2-NH+
CH2-CH3
Quelle est la proportion de radicaux-DEAE chargés positivement aux pH suivants : 2 ;
7 ; 9,4 ; 12 ? (On considérera que le pK de l'amine tertiaire du groupement DEAE est
9,4).
Parmi les protéines suivantes : Sérumalbumine (pHi = 4,9), Uréase (pHi = 5),
Chymotrypsinogène (pHi = 9,5), quelles sont celles qui, à pH 7, sont retenues par la
DEAE-cellulose ? (On considérera que les interactions protéine-DEAE-cellulose sont
uniquement de type électrostatiques).
Exercice 4
On veut réaliser la séparation de 5 acides aminés (Glu, Met, Tyr, Lys, Ser). On utilise
pour cela 5 g de résine sèche de polystyrène sulfoné que l'on dispose dans une colonne
ouverte. La résine est lavée par une solution d'HCl (1 M) en excès. Après ce
traitement, la résine est lavée à l'eau distillée. On fait alors passer une solution de NaCl
(2 M) en excès. Le filtrat correspondant est recueilli dans sa totalité et est dosé par
11,5 ml de NaOH (1 M).
1 - Commenter les opérations effectuées (écrire sommairement les équations mises en
jeu) et en déduire la capacité de rétention de la résine.
2 - Les 5 acides aminés à séparer sont solubilisés dans un tampon à pH = 3,8. A ce pH,
quels sont les composés qui seront retenus sur la résine ?
3 - Après avoir chargé la colonne par les 5 acides aminés préalablement solubilisés
dans le tampon à pH 3,8, l'élution est réalisée en gradient de pH, en augmentant le pH.
Dans quel ordre les acides aminés vont-ils être élués ?
On se servira des données ci-après :
Acide aminé : pK - COOH
pK - NH2
pK - R
Glu
2,19
9,67
4,25
Met
2,28
9,21
-
Tyr
2,20
9,11
10,07
Lys
2,18
8,95
10,53
Ser
2,21
9,15
-