Diagnostic indirect en microbiologie

L3 médecine AMIENS 2012/2013 – S5 UE1 – Dr C FRANCOIS - Diagnostic indirect
Diagnostic indirect en microbiologie
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Deux possibilités pour poser un diagnostic en microbiologie :
o Soit mise en évidence, observation directe du microorganisme = Diagnostic
direct
 Bactériologie +++ (ECBU, EPS…)
o Soit mise en évidence indirecte du microorganisme par détection des
mécanismes immunitaires induits par le pathogène = Diagnostic indirect
 Virologie +++
1 Intérêt du diagnostic
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Preuve de l'origine de l'infection
Suivi de l'évolution biologique de l'infection
Évaluation du statut immunitaire d'un patient
Appréciation de la réponse vaccinale
Éviter la transmission d'un pathogène au cours de don d'organes (Toxoplasme +++)
Étude du pathogène en cause et de ses variants.
2 Étapes du diagnostic
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Prélèvement → phase pré-analytique (jusqu'à ce que le tube soit « techniqué ») →
phase analytique → validation technique → validation biologique → édition du
résultat
Phase pré-analytique :
o prescripteur OBLIGATOIRE
o patient : nom/prénom/Sexe/Age..
o Renseignements complémentaires +++
 Nature des principales manifestations pathologiques : date
d'apparition, localisation des lésions infectieuses, état
d'immunodépression, prise d'antiviraux, d'ATB, femme enceinte/date
début de grossesse
 Voyages récents
 Vaccination datée
 Transfusion
 But de l'analyse
Phase analytique : méthodes utilisées :
o diagnostic direct
o diagnostic indirect
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3 Diagnostic indirect
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Principalement par mise en évidence d’Ag dans le sérum +++
De moins en moins pratiqué pour la recherche d’Ag dans le LCS maintenant
technique de bio mol et diagnostic direct +++
Recherche :
o Séroconversion (apparition d’Ac)
o ↗ IgG
o Présence d’IgM
o Avidité des IgG (permet de dater l’infection) mesurée par ELISA +++ :
 Faible : infection récente
 Forte : infection ancienne
Cinétique d’apparition des Ac :
o Lorsqu'on introduit un Ag dans l'organisme, le premier type d'Ac produit sont
les IgM, il y a ensuite un pic d'IgG (= réponse primaire).
o Réintroduction de l’Ag => réponse secondaire avec production d’IgG
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4 Techniques utilisées pour le diagnostic indirect
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Ac avec propriétés définies = neutralisation, hémagglutination
Ac sans propriétés définies = ELISA, immunofluorescence indirecte, Western Blot
Échantillon
Technique
Principe
Avantages
Pathologies
concernées
Application
Transport des
échantillons
Inconvénients
Anticorps sans propriétés
Anticorps avec propriétés
définies
définies
Sérum principalement (sérologie)
ELISA +++
Séroneutralisation
Immunofluorescence indirecte
Inhibition de l’hémagglutination
Western blot
Fixation du complément
ème
Mise en évidence d’un 2
Ac
Utilisation d’une propriété
marqué dirigé contre un isotype
fonctionnelle particulière d’une sous
donné pour révéler le complexe
population d’Ac
Ag-Ac
Distinction possible entre une
Valeur protectrice des Ac
infection récente (IgM) et ancienne
neutralisants ou inhibant
l’hémagglutination
Très large
Limitée à certaines familles de virus
Évaluation de l’efficacité d’une
vaccination
Diagnostic d’infection : ↗ du titre
d’Ac entre 2 sérums
Pas de conditions particulières
Nombreuses, infections récentes et
anciennes
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Fenêtre sérologique (HCV production d’Ac qu’après 70jours, etc.)
Impossibilité d’exclure une étiologie
Réactions faussement positives (réactions croisées, etc.)
Situations compliquant l’interprétation :
o Administration passive d’IgG
o Hémodilution
o États dysimmunitaires
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Western blot = immuno blot = examen de certification quand une sérologie faite par
ELISA est positive.
Le Western Blot Toxoplasmose permet de savoir si les Ac sont d'origine maternelle
ou non et donc s'il y a eu transmission. → seules les IgG maternelles passent le
placenta. Si par exemple on retrouve des IgM c'est que le bébé en a produit et cela
permet de diagnostiquer une infection in utero.
Dans certains cas le dg indirect est inutile puisque certain Ac sont présent chez 8090% des gens (ex : Ac anti HSV).
Avidité des IgG :
o utilise l'existence d'une maturation de la réponse immunitaire humorale :
augmentation de l'affinité intrinsèque paratope/épitope
o plus l'infection est ancienne, plus les IgG présentent une avidité élevée,
o Intérêt dans les infections materno-foetales.
o La détermination de l'avidité : affinité fonctionnelle des IgG permet de
distinguer primo infection et infection ancienne → CMZ, rubéole,
toxoplasmose
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5 Conclusion
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Quand c'est possible il faut prescrire le diagnostic direct +++ (PCR)
o Mais attention à ne pas prescrire inutilement des PCR car cout +++
Conditions de prélèvement +++
Renseignements cliniques
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