Staphylococcus et micrococcus
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Staphylococcus et micrococcus GELOSE CHAPMAN Milieu d’isolement sélectif pour les bactéries du genre Staphylococcus COMPOSITION : Peptones Chlorure de sodium Mannitol Rouge de phénol Agar LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Milieu jaune autour des colonies et colonies jaunes Acidification du milieu La bactérie dégrade le mannitol. Il peut s’agir de l’espèce : Staphylococcus aureus Milieu rouge autour des colonies Absence d’acidification du milieu La bactérie ne dégrade pas le mannitol : il ne s’agit pas de l’espèce : Staphylococcus aureus Staphylococcus et micrococcus RECHERCHE DU RECEPTEUR DU FIBRINOGENE ET DE LA PROTEINE A TECHNIQUE : Déposer sur une lame parfaitement propre ou sur une carte à usage, dans 2 cercles : - 1 goutte de réactif test constitué de particules sensibilisées - 1 goutte de réactif témoin constitué de particules non sensibilisées Identifier les dépôts. Prélever à l’oese 1 à 2 colonies à identifier, les mettre soigneusement en suspension dans chacune des 2 gouttes. Donner à la lame un léger mouvement de rotation pendant 30sec. Observer l’apparition d’agglutinats. LECTURE : Observation Conclusion Agglutination des particules témoins La souche est auto-agglutinable, les résultats ne sont pas interprétables. Pas d’agglutination des particules témoins. Agglutination des particules tests Les résultats sont interprétables : la souche possède la protéine A et/ou le récepteur de fibrinogène -> Identification de Staphylococcus aureus Pas d’agglutination des particules témoins. Pas d’agglutination des particules tests Les résultats sont interprétables : la souche ne possède pas la protéine A et le récepteur du fibrinogène Staphylococcus et micrococcus RECHERCHE DE LA DNASE REACTIF : Bleu de toluidine ou HCl LECTURE : BT HCl BT HCl Apparition d’une teinte rose autour de la strie centrale Absence de précipité autour de la strie centrale Le milieu est resté bleu autour de la strie centrale Présence d’un précipité autour de la strie centrale Le milieu rose montre l’absence d’ADN donc il a été hydrolysé par la DNAse L’absence de précipité montre l’absence d’ADN donc il a été hydrolysé par la DNAse Le milieu bleu montre la présence d’ADN donc il n’a pas été hydrolysé La présence de précipité montre la présence d’ADN donc il n’a pas été hydrolysé La souche possède une DNAse DNAse + La souche ne possède pas de DNAse DNAse – Staphylococcus et micrococcus TEST DE LA THERMONUCLEASE MILIEUX UTILISES : Culture de 24h en bouillon cœur cervelle du staphylocoque étudié Culture de 24h en bouillon cœur cervelle d’un staphylocoque thermonucléase + (témoin +) Culture de 24 h en bouillon cœur cervelle d’un staphylocoque thermonucléase – (témoin –) Bouillon cœur cervelle stérile (témoin bouillon cœur cervelle) Gélose à l’ADN et au bleu de toluidine (couleur bleue) LECTURE : Un halo rose autour du puits traduit la présence de composés d’hydrolyse de l’ADN. 1. Lecture des témoins Pour valider le test, on doit observer : - Un halo rose pour le témoin positif - L’absence de halo rose pour le témoin négatif et le bouillon cœur cervelle stérile Staphylococcus et micrococcus 2. Lecture du test Observation Interprétation Conclusion Apparition d’un halo rose autour du puits Présence de composés d’hydrolyse de l’ADN : l’ADN a été hydrolysé Le staphylocoque étudié possède une ADNase thermorésistante : Staphylocoque thermonucléase + Absence d’halo rose autour du puits Absence de composés d’hydrolyse de l’ADN : l’ADN n’a pas été hydrolysé Le staphylocoque étudié ne possède pas une ADNase thermorésistante : Staphylocoque thermonucléase – Staphylococcus et micrococcus TEST DE LA STAPHYLOCOAGULASE (OU COAGULASE LIBRE) MILIEU ET REACTIF : Culture de 24h en bouillon cœur cervelle ou bouillon pour coagulase Plasma de lapin oxalaté TECHNIQUE : Dans un tube à hémolyse stérile, placer 0,5mL de plasma oxalaté de lapin. Ajouter 0,3mL de culture de 24h en bouillon spécial (bouillon cœur cervelle pour coagulase). Incuber 37°C. Observer toutes les 30min durant 2h à 24h. REMARQUE : Si le test est réalisé sur un autre bouillon que le bouillon spécial : faire un témoin bouillon stérile + plasma afin de vérifier que ce bouillon ne coagule pas lui-même le plasma oxalaté. Staphylococcus et micrococcus LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Prise en masse du contenu du tube Coagulation du plasma La bactérie possède une coagulase libre : Coagulase + Identification de Staphylococcus aureus Le contenu du tube reste liquide Pas de coagulation du plasma La bactérie ne possède pas une coagulase libre : Coagulase – Staphylococcus et micrococcus Tableau de différenciation des genres Micrococcus et Staphylococcus Morphologie Catalase Type respiratoire Voie d’attaque du glucose Genre Staphylococcus Coques ronds, Gram+ en amas irréguliers + AAF Glucose fermenté Genre Micrococcus Coques ronds, Gram+ en tétrade + AS Oxydation du glucose Staphylococcus et micrococcus Démarche d’identification des Coques Gram + Catalase + Coques Gram + Catalase + Genre Staphylococcus ou Micrococcus Ensemencer : 2 HL 1VF 1 Chapman ou Baird Parker 1 Bouillon cœur cervelle 1 Gélose nutritive AAF Fermentatif vis-à-vis du glucose Pousse sur Chapman AS Oxydatif ou inerte vis-à-vis du glucose Pas de pousse en 24h sur Chapman Genre Micrococcus Genre Staphylococcus S.aureus S.saprophyticus S.epidermidis S.haemolyticus Mannitol + + - + Coagulase libre + - - - DNAse thermostable + - - - RF/Protéine A + - - - Staphylococcus et micrococcus
