PAS-A Acide périodique Schiff 04 - 130803 IVD Dispositif médical de diagnostic in vitro | Code CND : W01030799 nombre de tests exécutables ...... 100 temps de réalisation .................... 60 minutes validité du produit ........................ 1 année température de stockage ............. 2 - 8 °C équipement complémentaire ....... aucun But prévu Produit pour la préparation d'échantillons cyto-histologiques à examiner en microscopie optique. Application La digestion sur une coupe histologique avec une solution d'amylase, suivie par la réaction PAS, est indiquée lorsqu'on souhaite éliminer le glycogène pour observer uniquement les mucines neutres épithéliales. La réaction PAS-amylase est une méthode préférentielle pour évaluer la présence de glycogène dans le tissu hépatique sur des coupes fixées dans la formaline et incluses dans de la paraffine et dans le tissu musculaire sur des coupes cryostatiques. Dans les deux cas, l'examen de coupes adjacentes, dont une est traitée à l'amylase, permet une évaluation qualitative de la présence de glycogène. Principe 1 – activité amylase L'activité de l'enzyme amylase (α amylase de Bacillus Subtilis) lors de la rupture des liaisons β-1,4 glycosidiques est supérieure à celle de la diastase et elle se produit à température ambiante au cours de 10 minutes seulement d'incubation. L'enzyme est fournie en solution stabilisée et tamponnée ; correctement conservée, elle maintient inaltérée son activité pendant la période de validité du produit. 2 – réaction PAS La spécificité de la réaction PAS se fonde sur l'oxydation élective par un acide périodique, des groupes : 1,2-glycolique ; aminé primaire (ou 1-hydroxy-2-amino) ; aminé secondaire (ou 1-hydroxy-2-alkylamino) et 1-hydroxy-2-cétone ; (il y a en outre oxydation de certains dérivés méthoxylés et alpha-cétones qui cependant ne sont pas transformés en aldéhydes). Pendant cette oxydation, la liaison entre les atomes de carbone situés en position 1,2 se rompt, ce qui provoque la formation de groupes aldéhydes. Au cours de la réaction suivante, les deux groupes aldéhydes étroitement contigus sont transformés par la fuchsine sulfureuse de réactif de Schiff en composé coloré insoluble. Les conditions nécessaires pour que ces réactions puissent se produire sont les suivantes : - les groupes hydroxyles doivent être libres - les composés qui se forment après oxydation ne doivent pas pouvoir se diffuser dans le tissu - les groupes aldéhydes de ces composés doivent être suffisants pour pouvoir être décelés au plan histologique et chimique. On peut donc constater que seules les macromolécules telles que les polysaccarides et les mucines correspondent à ces exigences. Le choix de l'acide périodique en tant qu'oxydant est dû au fait qu'il bloque la réaction d'oxydation à l'état aldéhyde. Les mucopolysaccharides acides, exception faite de l'héparine monosulfurique, ne réagissent pas, car la présence du groupe -SO3H bloque les groupes glycol réactifs. Page 1 sur 2 Fabricant : Bio-Optica Milano s.p.a. Bio Optica Milano s.p.a. via San Faustino 58 • I - 20134 Milan tél. +39 02212713.1 • fax +39 022153000 www.bio-optica.it Méthode 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) 11) 12) 13) 14) Amener la lame à l'eau distillée. Amener le réactif A à température ambiante. Verser 10 goutes de réactif A : laisser agir pendant 10 minutes à température ambiante. Laver la lamelle plusieurs fois dans de l'eau distillée. Verser 10 gouttes de réactif B sur la coupe : laisser agir pendant 10 minutes. Laver dans de l'eau distillée. Verser 10 gouttes de réactif C sur la coupe : laisser agir pendant 20 minutes. Laver dans de l'eau distillée. Verser 10 gouttes de solution D sur la coupe : laisser agir pendant 2 minutes. Égoutter la lamelle et, sans la laver, verser sur la coupe 10 gouttes de réactif E ; laisser agir pendant 2 minutes. Laver dans de l'eau distillée. Verser sur la coupe 10 gouttes de réactif F : laisser agir pendant 3 minutes. Faire virer dans de l'eau de source courante pendant 5 minutes. Déshydrater dans la série ascendante des alcools, xylène et baume. Résultats Substances PAS-positives ................................................................................................ rouge magenta Noyaux .............................................................................................................................................. bleu Réactifs A) B) C) D) E) F) Avertissements et précautions Le produit doit être utilisé par du personnel technique spécialisé. Le produit est classé comme dangereux. Lire attentivement les informations figurant sur l'étiquette (symboles de danger, phrases de risque et de sécurité), et consulter toujours la fiche de sécurité contenant les informations relatives aux risques présentés par la préparation, les mesures de précaution à adopter pendant l'utilisation et les premiers soins, ainsi que les mesures en cas de dispersion accidentelle. Ne pas utiliser si le récipient primaire a été endommagé. Conservation Conserver la préparation à 2 - 8 °C. Maintenir les flacons biens fermés et dans l'obscurité. Stabilité Une fois ouvert, le réactif est valable jusqu'à la date d'expiration indiquée, pourvu qu'il ait été conservé correctement. Élimination Déchet dangereux ; confier à des entreprises spécialisées et agréées, selon les lois en vigueur. Bibliographie • • • α amylase de Bacillus Subtilis en solution stabilisée ............................................................... 30 ml Acide périodique en solution .................................................................................................... 30 ml Réactif de Schiff ...................................................................................................................... 30 ml Métabisulfite de potassium en solution..................................................................................... 30 ml Solution fixatrice ...................................................................................................................... 30 ml Hémalun de Mayer .................................................................................................................. 30 ml Cook HC. Human tissue mucins. Lab. Aid Series - Baker Editor London Hotchkiss RD. A microchemical reaction resulting in the standing of polysaccaride structures in fixed tissue preparations. Arch Bioch 1948 ; 16 :131.c Manus JFA Periodic acid routine applied to kidney Amer J Path 1948 ; 24 :643. ° Date d'émission : Novembre 2015 Page 2 sur 2 Fabricant : Bio-Optica Milano s.p.a. Bio Optica Milano s.p.a. via San Faustino 58 • I - 20134 Milan tél. +39 02212713.1 • fax +39 022153000 www.bio-optica.it