Examen BIO232 L2 Sujet de Génétique microbienne (12 points) proposé par Dominique Schneider Janvier 2016 Vous répondrez aux différentes questions directement sur le sujet, dans les cadres prévus à cet effet. Soyez brefs et concis. Exercice 1 (3,5 points): La souche MA30 d’Escherichia coli possède le génotype suivant : metA malT thr bio ∆manXYZ glpK avec : metA : gène impliqué dans la biosynthèse de méthionine, malT : gène impliqué dans la dégradation de maltose, thr : gène impliqué dans la biosynthèse de thréonine, bio : gène impliqué dans la biosynthèse de biotine, manXYZ : gènes impliqués dans la dégradation de mannose, glpK : gène impliqué dans le transport du glycérol. 1/ Indiquez un milieu minimum permettant la croissance de MA30 (0,5 point). 2/ Pour chacun des 6 caractères génotypiques pris indépendamment, indiquez les milieux de culture à utiliser pour confirmer le phénotype conféré par le génotype de MA30 et indiquer si MA30 pousse ou non sur chacun des milieux (0,5 point par caractère, 3 points au total). Exercice 2 (6 points): Pour connaître la position des gènes sur le chromosome d'Escherichia coli, une expérience de conjugaison interrompue a été réalisée, avec une souche F- dont le phénotype est le suivant : F- : Gal- His- Trp- Phe- Lys- StrR Lac- Cys-. 1/ Quel est le phénotype de la souche Hfr qui doit être utilisée ? Pourquoi ? (0,5 point) 2/ Les résultats de la conjugaison sont obtenus en prélevant des échantillons toutes les minutes et en les étalant sur les milieux sélectifs suivants : A : milieu minimum+glucose+tryptophane+phénylalanine+lysine+cystéine+streptomycine. B : milieu minimum+glucose+tryptophane+phénylalanine+histidine+cystéine+streptomycine. C: milieu minimum+galactose+tryptophane+phénylalanine+lysine+histidine+cystéine+ streptomycine. D : milieu minimum+glucose+histidine+phénylalanine+lysine+cystéine+streptomycine. E : milieu minimum+glucose+tryptophane+histidine+lysine+cystéine+streptomycine. F : milieu minimum+lactose+histidine+tryptophane+phénylalanine+lysine+cystéine+ streptomycine. G : milieu minimum+glucose+tryptophane+phénylalanine+lysine+histidine+streptomycine. Des colonies recombinantes sont observées sur le milieu F au bout de 10 min, sur le milieu C au bout de 18 min, sur D au bout de 25 min, sur A de 36 min, sur E de 48 min, sur G de 68 min et sur B de 55 min. Quel(s) recombinant(s) chaque milieu permet-il de sélectionner (1,75 points) ? Dessiner une carte avec la position des gènes sur le chromosome (0,25 point). 3/ Quelle expérience feriez-vous pour calculer les distances génétiques entre les trois gènes gal, trp et his ? (1 point) Donner le protocole expérimental en précisant les étapes, les milieux de culture utilisés et les recombinants sélectionnés. (2,5 points) Exercice 3 (2,5 points): Une culture d'Escherichia coli, sensible à la streptomycine, est diluée jusqu’à un facteur 10-7 dont 0,1 mL est alors étalé sur un milieu LB. Après incubation d’une nuit à 37°C, 10 colonies sont comptées sur la boîte. A partir de la culture initiale non diluée, 0,1 mL est étalé sur un milieu LB additionné d'un antibiotique, la streptomycine. Après incubation d’une nuit à 37°C, 4 colonies sont comptées sur la boîte. 1/ Que sont ces colonies ? (0,5 point) 2/ Quelle est leur fréquence d’apparition ? (1 point) 3/ Quelle est la différence entre une fréquence et un taux et que faut-il connaître pour calculer le taux d’apparition de ces colonies ? (1 point)