Gélose glucosée à l`oxytétracycline (base OGA)
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Gélose glucosée à l’oxytétracycline (base OGA) DOMAINE D’UTILISATION La gélose glucosée à l’oxytétracycline est utilisée pour la recherche et le dénombrement des levures et des moisissures dans les produits alimentaires et les produits cosmétiques. HISTORIQUE En 1965, Buttiaux et Catsaras ont recommandé l’emploi de ce milieu pour la recherche des levures et moisissures dans les bières, puis Sainclivier et Roblot pour l’analyse du beurre. Mossel a également démontré que sur plusieurs types d’aliments, un milieu à pH neutre permettrait d’obtenir une meilleure récupération qu’un milieu à bas pH (le pH étant le seul mécanisme de sélection contre la croissance des bactéries). PRINCIPES - La croissance des levures et des moisissures est favorisée en présence de glucose et d’extrait de levure. - L’addition extemporanée d’oxytétracycline ou de chloramphénicol ou de chloramphénicol + gentamicine ou d’oxytétracycline + gentamicine permet d’inhiber les bactéries, y compris les lactobacilles (microorganismes acidophiles qui sont susceptibles de représenter la flore dominante de certains produits alimentaires). PREPARATION - Mettre en suspension 40,0 g de milieu de base déshydraté (BK053) dans 1,1 litre d’eau distillée ou déminéralisée. - Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution. - Répartir en flacons, à raison de 110 mL par flacon. - Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes. 1/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr MODE D’EMPLOI - Avec le milieu de base prêt-à-liquéfier BM022 (ou bien si le milieu est préparé à l’avance à partir du milieu de base déshydraté), faire fondre la gélose pendant le minimum de temps nécessaire à sa reliquéfaction totale. - Refroidir et maintenir à 47°C. - Ajouter stérilement 1,0 mL de supplément sélectif Oxytétracycline 50 mg reconstitué (BS008) à 110 mL de milieu de base. - Transférer 1 mL du produit à analyser et de ses dilutions décimales successives dans des boîtes de Petri stériles. - Couler 10 à 15 mL de milieu. - Homogénéiser parfaitement. - Laisser solidifier sur une surface froide. - Incuber à 20 ou à 25°C pendant 3 à 5 jours, suivant le mode opératoire employé. NOTA 1 : L’ensemencement de l’échantillon en surface de boîtes préalablement coulées peut également être réalisé. NOTA 2 : L’oxytétracycline (BS008) peut être remplacée par le chloramphénicol (BS021) ou par l’association chloramphénicol + gentamicine (BS021 + BS009) ou être complétée par de la gentamicine (BS009). Consulter les monographies correspondantes et les protocoles à respecter pour les produits à analyser. LECTURE Après l’incubation, dénombrer séparément les levures et les moisissures. Faire un test rapide de confirmation au microscope sur chaque type de colonies rencontré. FORMULE - TYPE du milieu complet (avec oxytétracycline) (pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales) Pour 1,1 litre de milieu : - Extrait autolytique de levure.............................................................5,0 g - Glucose ..........................................................................................20,0 g - Oxytétracycline.................................................................................0,1 g - Agar agar bactériologique ..............................................................15,0 g pH du milieu prêt à l’emploi à 25°C : 6,6 ± 0,2. 2/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr CONTRÔLE QUALITE - Milieu de base déshydraté : poudre beige, fluide et homogène. - Milieu préparé (complet) : gélose ambrée. - Réponse culturale typique sur le milieu complet avec oxytétracycline, après 72 heures d’incubation à 25°C : Croissance (Rapport de productivité : PR) Microorganismes Saccharomyces cerevisiae Candida albicans Aspergillus brasiliensis Escherichia coli Bacillus subtilis PR ≥ 50% PR ≥ 50% PR ≥ 50% inhibée inhibée ATCC® 9763 ATCC 10231 DSM 1988 ATCC 25922 ATCC 6633 STOCKAGE / CONSERVATION Milieu de base déshydraté : 2-30°C. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. - Milieu de base préparé en flacons : 6 mois à 2-8°C (à titre indicatif). - Milieu complet préparé en boîtes, avec supplément : 15 jours à 2-8°C (à titre indicatif). Milieu de base prêt-à-liquéfier en flacons, Supplément sélectif Oxytétracycline 50 mg, Supplément sélectif Gentamicine 25 mg, Supplément sélectif Chloramphénicol 50 mg : - Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière. - Les dates de péremption sont mentionnées sur les étiquettes. PRESENTATION Code Milieu prêt-à-liquéfier (base sans oxytétracycline) en flacons : - Coffret de 10 flacons de 110 mL BM02208 Milieu de base déshydraté (sans oxytétracycline) : - Flacon de 500 g - Fût de 5 kg BK053HA BK053GC Supplément sélectif Oxytétracycline 50 mg : - Coffret de 10 flacons BS00808 Supplément sélectif Gentamicine 25 mg : - Coffret de 10 flacons BS00908 Supplément sélectif Chloramphénicol 50 mg : - Coffret de 10 flacons BS02108 3/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr SUPPORT PHOTO Référence produit : [BK053HA, GC + BS00808], [BM02208 + BS00808] Utilisation : La recherche et le dénombrement des levures et des moisissures dans les produits alimentaires et les produits cosmétiques. Aspergillus niger Gélose glucosée à l’oxytétracycline (base OGA) Réf : BM02208 + BS00808 Incubation : 3 jours / 25°C Caractéristiques : Bonne croissance des levures et moisissures avec ou sans formation des spores. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES Mossel, D.A.A., Visser, M., and Mengerink, W.H.J. 1962. A comparison of media for the enumeration of moulds and yeasts in foods and beverages. Lab. Pract., 11: 109-112. Buttiaux, R., et Catsaras, M. 1965. L’analyse bactériologique des bières. Ann. Inst. Pasteur, 16: 167. Sainclivier, M., et Roblot, A.M. 1966. Choix d’un milieu de culture pour le dénombrement des levures et moisissures dans le beurre. Ann. Inst. Pasteur, 17: 181. Journal Officiel du 8 août 1972. Dénombrement des levures et des moisissures dans les produits cosmétiques. 8553-8554. NF V 03-454. Décembre 1981. Epices et aromates. Dénombrement des levures et des moisissures. NF ISO 7954 (V 08-022). Août 1988. Microbiologie. Directives générales pour le dénombrement des levures et moisissures. Technique par comptage des colonies à 25 °C. NF ISO 7698 (V 03-763). Août 1991. Céréales, légumineuses et produits dérivés. Dénombrement des bactéries, levures et moisissures. NF ISO 13681 (V 04-507). Avril 1996. Viandes et produits à base de viande. Dénombrement des levures et moisissures. Technique par comptage des colonies. NF V 08-059. Novembre 2002 (3ème tirage d’Août 2003). Microbiologie des aliments. Dénombrement des levures et moisissures par comptage des colonies à 25 °C. Méthode de routine. 4/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture. ISO 6611 / FIL 94. Octobre 2004. Lait et produits laitiers. Dénombrement des unités formant colonie de levures et/ou moisissures. Comptage des colonies à 25 °C. Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document. Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2010-10-12. Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis. Code document : BK053/F/2003-06 : 5. 5/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
