Gélose à l’extrait de levure DOMAINE D’UTILISATION La gélose à l’extrait de levure est utilisée en bactériologie des eaux pour le dénombrement des microorganismes revivifiables par comptage des colonies à 36 et 22°C. La méthode vise à mesurer l’efficacité de fonctionnement du traitement des eaux potables et plus généralement de tous les types d’eaux. Elle est particulièrement adaptée à l’analyse des eaux destinées à la consommation humaine, y compris les eaux embouteillées et les eaux minérales naturelles. HISTORIQUE La gélose pour dénombrement est dérivée de la gélose pour dénombrement (PCA). Elle ne contient pas de glucose. PRINCIPES Les substances nutritives apportées par la Tryptone et les facteurs vitaminiques de l’extrait de levure favorisent la croissance de la plupart des bactéries à dénombrer. PREPARATION - Mettre en suspension 19,0 g de milieu déshydraté (BK153) dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée. - Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution. - Répartir en tubes ou en flacons. - Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes. NOTA : Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la consistance du gel du milieu solidifié, après stérilisation et refroidissement. 1/4 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr MODE D’EMPLOI - Avec le milieu prêt-à-l’emploi (BM068) ou bien si le milieu est préparé à l’avance à partir du milieu déshydraté, faire fondre la gélose pendant le minimum de temps nécessaire à sa reliquéfaction totale. - Refroidir et maintenir à 44-47°C. - Transférer 1 mL du produit à analyser et de ses dilutions décimales successives dans des boîtes de Petri stériles. - Couler 10 à 15 mL de milieu. - Homogénéiser parfaitement. - Laisser solidifier sur une surface froide. - Incuber : un jeu de boîtes à (36 ± 2)°C pendant (44 ± 4) heures, et un autre à (22 ± 2)°C pendant (68 ± 4) heures. LECTURE Procéder au comptage des colonies pour chaque boîte contenant 300 colonies au maximum. FORMULE - TYPE (pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu : - Tryptone ...........................................................................................6,0 g - Extrait autolytique de levure.............................................................3,0 g - Agar agar bactériologique ..............................................................10,0 g pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,2 ± 0,2. CONTRÔLE QUALITE - Milieu déshydraté : poudre crème, fluide et homogène. - Milieu préparé : gélose ambre clair. - Réponse culturale typique après 44 heures d’incubation à 36°C : Croissance (Rapport de productivité) Microorganismes (1) Escherichia coli Staphylococcus aureus (2) Pseudomonas aeruginosa RIVM WR1 CIP 53.154 CIP 82.118 (2) (1) (2) 66% ≤ R2 ≤150% PR ≥ 70% PR ≥ 70% Rapport de productivité R2 selon NF T90-461 Rapport de productivité PR selon XP CEN ISO/TS 11133-2 2/4 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr STOCKAGE / CONSERVATION Milieu déshydraté : 2-30°C. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. - Milieu préparé en tubes ou en flacons : 6 mois à 2-8°C (à tire indicatif). - Milieu préparé en boîtes : 1 mois à 2-8°C (à titre indicatif). Milieu prêt-à-liquéfier en flacons : - Stocker entre 2 et 25°C, à l’abri de la lumière. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. PRESENTATION Code Milieu déshydraté : - Flacon de 500 g BK153HA Milieu prêt-à-l’emploi en flacons : - Pack de 10 flacons de 200 mL BM06808 SUPPORT PHOTO Référence produit : BK153HA, BM06808 Utilisation : Le dénombrement des microorganismes revivifiables par comptage des colonies. Dénombrement dans la masse Gélose à l’extrait de levure Réf : BM06808 Incubation : 48 heures / 37°C Caractéristiques : Excellente croissance des bactéries aérobies mésophiles. 3/4 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr REFERENCE BIBLIOGRAPHIQUE NF EN ISO 6222 (T 90-401). Juillet 1999. Qualité de l’eau. Dénombrement des micro-organismes revivifiables. Comptage des colonies par ensemencement dans un milieu de culture nutritif gélosé. XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture. NF T 90-461. Juillet 2001 et NF T 90-461/A1. Juin 2005. Qualité de l’eau. Microbiologie. Contrôle qualité des milieux de culture. Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document. Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-10. Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis. Code document : BK153/F/2003-01 : 4. 4/4 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr