TP1 : Recherche des salmonelles Introduction : Découverte en 1880 par Eberthÿ, les Salmonella sont des entérobactéries mésophiles mobiles Gram - dont les caractères essentiels sont de ne pas fermenter le lactose et de ne pas produire d'uréase. Les Salmonella sont des parasites de l'homme, des mammifères (rongeurs), des oiseaux (volailles) et des animaux à sang froid (reptiles). Elles sont responsables, après pénétration par voie orale, de nombreuses infections (salmonelloses), notamment des fièvres typhoïde et paratyphoïdes, des gastro-entérites et des toxi-infections alimentaires collectives (TIAC). Le but de ce TP est d’effectuer une recherche de salmonella dans des prélèvements réalisés sur le cloaque du poulet de chair. La recherche de salmonelle se réalise en trois étapes : � Un enrichissement du milieu permettant la croissance sélective de salmonella, � Un isolement sur milieu spécifique permettant de mettre en évidence les caractères cataboliques de Salmonella. � Une identification par une galerie de tests biochimiques. Description des étapes : I. Enrichissement : Elle comporte I.1 PRÉ-ENRICHISSEMENT Cette étape est réalisée en Eau Peptonée Tamponnée (EPT) : c’est un milieu liquide, non sélectif, qui permet la croissance des bactéries sans exigences nutritives particulières, ce qui est le cas des Salmonella. Un pré-enrichissement permet : --une revivification des micro-organismes présents dans l’échantillon et ayant été stressés par des traitements au froid, à la chaleur, par une exposition à des biocides ou par la dessiccation ; --une augmentation non spécifique du nombre de tous les micro-organismes présents dans la masse (volume) de produit analysé (si cette étape dure suffisamment longtemps pour permettre la multiplication). I.2 ENRICHISSEMENT SÉLECTIF Cette étape est réalisée en transférant une aliquote du bouillon de pré-enrichissement dans un bouillon sélectif : bouillon au sélénite, bouillon de Rappaport-Vassiliadis ou bouillon de MüllerKauffman au tétrathionate. L’objectif de l’étape d’enrichissement sélectif est de favoriser la croissance des bactéries du genre Salmonella tout en inhibant la croissance des autres bactéries. Après incubation (24 h à 37 °C), les Salmonella (si elles sont présentes dans l’aliment) se retrouvent alors majoritaires dans le bouillon utilisé. Un enrichissement sélectif permet une augmentation significative et spécifique du nombre de micro organismes recherchés. II. ISOLEMENT SÉLECTIF SUR MILIEU GÉLOSÉ SÉLECTIF ET DISCRIMINATIF Nous allons donc ensemencer les milieux SS et hektoën à partir des bouillons d’enrichissement. � L’ensemencement se fait d’après la méthode des cadrans. � L’incubation des milieux sélectifs se fait à 37°C pendant 48h. Ces milieux sont donc tous : --sélectifs de bactéries d’origine intestinale dont font partie les Salmonella ; --discriminatifs (mise en évidence de caractères biochimiques spécifiques aux Salmonella comme la dégradation ou non de tel ou tel glucide, la réduction du thiosulfate et la production d’H2S). Après 24 heures d’incubation à 37 °C en aérobiose, on peut y observer des colonies suspectes.
