Implica on de la clusterine dans la survie des cellules l’apoptose

Université de Liège Faculté de Médecine
Biochimie, Laboratoire d'Endocrinologie
Thèse présentée en vue de l’obtenon de grade de
docteur en Sciences (Biochimie, Biologie moléculaire et
cellulaire, bioinformaque et modélisaon)
Hayet Ammar
2013-2014
Implicaon de la clusterine
dans la survie des cellules
prostaques lors de
l’apoptose

Remerciements
Autermedecettelongueaventure,c’estunejoiepourmoideremerciertouteslespersonnesqui
m’ontaidéeetquiontcontribuédeprèsoudeloinàlaréalisationdecetravail.
Toutd’abordjetiensàexprimertoutemagratitudeauProfesseurGeorgesHennendem’avoir
accueilliedanssonlaboratoire.JeremercieégalementleprofesseurJean‐OlivierDefraignede
m’avoirpermisdecontinuermathèseauseindesonlaboratoire.
MesplusvifsremerciementsvontauDocteurJeanClossetsansquijen’auraispaspuréaliser
monrêved’intégrerlemondescientifique.Avecquij’aidéveloppélesenscritiqueetlacuriosité
scientifique.Jetiensàleremercierpoursapatience(toutaulongdecesannées)etsa
disponibilitémêmeenétantpensionné.Jeremercieégalementsonépousepoursa
compréhension.«Toutesmesexcusesdevousavoirautantdérangés».
JetiensàremerciertoutparticulièrementleDocteurAhmedIgoutpoursonsoutienetsonécoute
toutaulongdecesannées.J’aieulachancedebénéficierdesonexpériencescientifiqueetdeses
conseilsjudicieux.Mercid’avoiracceptédefairepartiedemoncomitédethèseetdujuryde
défensedecelle‐ci.
JeprésentetoutemareconnaissanceauProfesseurYvesCombarnousdel’UniversitédeTours,au
ProfesseurMartineRaesdel’UniversitéCatholiquedeNamur,auProfesseurBernardJorisetau
ProfesseurDavidWaltregnypouravoiracceptéd’examinermadissertationdoctoraleetdefaire
partiedemonjurydethèse.
ToutemagratitudevaégalementauProfesseurJacquesPiette,d’avoiracceptédeprésiderlejury
decettethèse.Mesremerciementsvontégalementauxmembresdemoncomitédethèsele
ProfesseurMariePauleMerville,leDocteurAhmedIgoutetleDocteurJeanClossetpourm’avoir
faitl’honneurdeparticiperaujurydedéfensedecelle‐ci.
Jesouhaiteremercierlesmembresd’équipedulaboratoired’endocrinologie(audébutdema
thèse)JaquesFréson,AnneDemille,VietHaNguen,AnneCornet,LaurenceMelen,lessécrétaires
AnetteetAnnie,surtoutledocteurMichaelMcNamarapoursonécouteetsonencouragement
ainsiqueCatherineD’Andreapoursonaidetechniqueetsonsoutienmoraldanslesmoments
difficiles,etsonaccompagnementlorsdestroisdéménagementsdulaboratoireaprèsledépart
duprofesseurGeorgesHenen.
MesremerciementsvontauxmembresdulaboratoiredecardiologieduprofesseurJeanOlivier
Defraigne,Annie,Jean‐PauletMarieEvequiontparticipéàmonintégrationdansleur
laboratoire.JenedoispasoublierderemercierMarie(lasecrétairedeProfesseurLahaye)pour
lesphotocopies.

JetiensàremercierleDocteurNicolasSmargiassoetleDocteurGabrielMazzucchellidansle
laboratoiredespectrométriedemasseduprofesseurDePawpourleurcollaboration.
JevoudraiségalementtémoignermareconnaissanceauxmembresduLaboratoired’Oncologie
moléculaireduDocteurRositaWinklerpourleuraidetechniqueetleursoutien.MerciàLaurence,
Dominique,toutparticulièrementàGuillaumemonsauveurpourlescanettouslesquoiquesen
informatiqueetàJeanChristophepoursalecturedumanuscrit(en2010).
JetiensàremercierleDocteurMustaphaZeddouetleDocteurRolandCreimersdulaboratoirede
Pathologieetdestissusconjonctifs,pourleuraidepourl’analyseauFACS.
JesouhaiteremercierLeProfesseurAkeilaBelahcène,leProfesseurFrédéricVanDenBrule,les
deuxtechniciennesPascaleWelle‐HenauxetNaimaMaloujahmoumetleDocteurStéphane
CalificeduLaboratoiredesrecherchessurlesMétastasespourleuraidetechnique(pourleFACS
etlaculturecellulaire)pendantlesdeuxpremièresannéesdemontravail.Jetienségalementà
remercierPierreMineurdulaboratoiredebiologieetdestissusconjonctifspourlemicroscopeà
fluorescenceainsiqueleProfesseurPatrickMottedulaboratoiredelaGénomiquefonctionnelle
etl’imageriemoléculairevégétale,pourlamicroscopieconfocale.
Jevoudraiségalementtémoignermareconnaissanceàtousmesamisquim’ontsoutenue
pendantlesmomentslesplusdifficilesdelavieetquimesoutiennenttoujours(jenecitepasde
nomscarlalisteestlongue),«Ungrandmerciàtoutesetàtous,jevousaime».Jetiensà
remerciertoutparticulièrementZakiaBelaid,BenIssaElmoualijetNorEddineSounniquim’ont
toujourssoutenueetencouragéeàclôturercettethèse.
Jenepeuxpasm’empêcherderemerciermesex‐collègueschezDyax,RicardaFinnern,Han,Henk
etRobpourleurencouragement.JeremercieégalementMadameFabienneCrahayaucentre
Corail(Forem),poursonaideprécieusepourlamiseenpageduprésentmanuscrit.
JetermineenremercianttoutemafamilleenTunisie,toutparticulièrementmesparents,qui
m’onttoujoursencouragéeàpoursuivremesétudesetàallerplusloin.
Enfin,maprofondegratitudevaàmapetitefamilleicienBelgique.AtoiHamadi,quiaétélà
pourmesoutenir,quiapartagéavecmoilesmomentsdejoiesetdedéceptions,toutaulongde
cetteépreuve.AmagrandeSelmaquim’atoujourssoutenuemêmeenétantloindemoi.Amon
grandMaherquiatoujoursmisdel’ambianceavecsonhumouretsonénergiedébordante.A
monpetittrésorNoraquimecombled’amouretmedonnedel’énergie.Sij’aitenuaussi
longtempspourachevercettethèsec’estgrâceàvousetc’estpourvous.Jevousdédiecetravail.

1
TABLEDESMATIÈRES
ABRÉVIATIONS............................................................................................................................................5
I.Introduction........................................................................................................................................9
Chapitre1.LaProstate.........................................................................................................................11
1.Laprostatenormale..........................................................................................................................11
1.1.Anatomie...................................................................................................................................11
1.2.Histologieprostatique...............................................................................................................12
1.2.1.Lecompartimentépithélial...............................................................................................12
1.2.2.Lecompartimentstromal..................................................................................................13
1.3.Lafonctionprostatique.............................................................................................................14
1.4.Lecontrôledudéveloppementetdelafonctionprostatique..................................................14
1.4.1.Lesandrogènes..................................................................................................................15
1.4.2.Interactionsépithélium‐stroma........................................................................................22
1.4.3.Lesœstrogènes..................................................................................................................23
2.Lecancerdelaprostate....................................................................................................................25
2.1.Modèledelatumorigenèsedelaprostate...............................................................................25
2.2.Mécanismesderésistanceàlacastration.................................................................................27
2.2.1.MécanismesdépendantduRA..........................................................................................28
2.2.2.MécanismesindépendantduRA.......................................................................................30
Chapitre2.L’Apoptose.........................................................................................................................33
1.Introduction......................................................................................................................................33
2.L’apoptoseetlanécrose...................................................................................................................33
3.Séquencesignalitiquedel’apoptose................................................................................................34
4.Lesvoiesd’inductiondel’apoptose..................................................................................................35
4.1.Lavoiemitochondrialeoulavoieintrinsèque..........................................................................37
4.2.Lavoieextrinsèqueouvoieinduiteparlesrécepteursdemort...............................................38
4.2.1.TNFetlavoiedesignalisationTNF....................................................................................39
5.Lafamilledescaspases.....................................................................................................................40
5.1.Activationdescaspases.............................................................................................................41
6.Régulationdel’apoptose..................................................................................................................42
7.L’apoptoseprostatique.....................................................................................................................45
Chapitre3.LaClusterine......................................................................................................................49
1.Introduction......................................................................................................................................49
2.Fonctionsdelaclusterine.................................................................................................................50
2.1.Laclusterineestunechaperonneextracellulaire.....................................................................50

2
2.2.Lareproduction.........................................................................................................................52
2.3.L’inhibitionducomplexed’attaquedusystèmeducomplément.............................................52
2.4.Letransportdeslipides.............................................................................................................53
2.5.Laclusterineentreapoptoseetsurvie......................................................................................53
3.Legènedelaclusterine:orgnisation,promoteuretrégulation......................................................55
3.1.Promoteuretrégulation............................................................................................................57
4.Clusterine:Laprotéineouformesprotéiques.................................................................................59
4.1.Laformesecrétée(sCLU)...........................................................................................................60
4.2.Formesintracellulaires:formenucléaireetformecytoplasmique..........................................61
5.Laclusterinedanslaprostate...........................................................................................................63
5.1.Laclusterinedansl’apoptoseprostatique................................................................................63
5.2.Laclusterineetlecancerprostatique.......................................................................................65
5.2.1.Expressiondelaclusterinedanslecancerprostatique....................................................65
5.2.2.Laclusterinedanslarésistanceducancerprostatique....................................................67
5.2.3.Laclusterineestuneciblethérapeutique:LecustirsenOGX‐011unanti‐sens
contrelaclusterine..........................................................................................................................67
II.Objectifetstratégiesdutravail........................................................................................................69
III.Résultats............................................................................................................................................71
1.Partie1:EtablissementdelignéesstablesexprimantdemanièreinductiblelasClu.....................72
1.1.Etablissementdelignéesstablesexprimantdemanièreinductiblelaclusterine....................72
1.1.1.EtablissementdelalignéeMLL‐TetOn.............................................................................73
1.1.2.DéveloppementdesdoubleslignéesstablespTet‐onpTRE.............................................75
2.Partie2:Caractérisationdelalignéestableetinductiblepourl’expressiondelasCLU.................76
2.1.EtudedelarégulationdesCluenfonctiondelaconcentrationdeladoxycycline...................77
2.2.LocalisationdelasCludanslescellulesMLLTet‐sCluparmicroscopieconfocale....................77
2.3.EtudedelaproliférationdesclonesMLLTet‐sClu.....................................................................78
2.4.Purificationdelaclusterine.......................................................................................................78
3.Partie3:EtudedeseffetsdesurviedelasurexpressiondelasCludanslescellules
cancéreusesprostatiquesandrogéno‐indépendantesetciblagedesonmécanismed’action.......79
4.Partie4:AnalyseprotéomiquedelalignéeMLLTet‐sCluetidentificationdesnouveaux
partenairesdesClu...........................................................................................................................81
IV.Discussionetperspectives................................................................................................................85
1.LaClusterineactivelasurvieviaunmécanismeextracellulaire.......................................................86
2.Implicationdelamégalinedanslemoded’actiondelasCLU..........................................................87
3.LasCLUactivelavoiedesurvieAkt..................................................................................................88
4.LasCLUn’activepaslavoiedesurvieNFkappaB............................................................................90
5.LasCLUactivelasurvieviad’autresvoiesdesignalisation..............................................................91