Assignment #1

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Biologie Moléculaire-2014
Devoir No4
Exercices 4-5
Analyse de restriction
1. Soumettre des figures des gels d’agarose utilisés pour les digestions doubles de votre
insertion d'ADN. Assurez-vous d’inclure une légende appropriée avec chacune.
2. Soumettre un tableau qui présente les données suivantes : Enzyme utilisée, Nombre
de coupures et Taille des fragments.
3. Soumettre une carte de restriction de votre insertion d'ADN générée
expérimentalement. Votre carte doit indiquer l'orientation de l'insertion relativement
au site de clonage multiple.
Exercices 6
Empreintes d'ADN génomique
4. Soumettre une figure du gel d'agarose représentant l'analyse du gène ApoC2. Inclure
une légende appropriée qui indique les tailles observées.
5. Soumettre une figure du gel d'agarose représentant l'analyse du gène ApoB. Inclure
une légende appropriée qui indique les tailles observées.
6. Fournir une analyse des empreintes génétiques générées par la classe. Votre analyse
doit inclure les informations suivantes:
a. Nombre de différents allèles observés
b. Fréquence à laquelle chaque allèle est observé dans la classe
c. Nombre d'individus homozygote et hétérozygotes pour chacune des allèles
PCR
7. Vous faites un PCR sur la molécule d'ADN double brin suivante:
5’ AAATTGGGCCATCATTTCGAGTATTCGACTCCCTAGATCC... 3’
3’ TTTAACCCGGTAGTAAAGCTCATAAGCTGAGGGATCTAGG... 5’
en présence d'une des deux amorces suivantes:
A. 5'GGGAGTCGAATACTC 3' et B. 5'GGGAAATTGGGCCATC3'.
Écrire la séquence complète du nouveau brin d'ADN (incluant la séquence de l'amorce)
qui sera synthétisée dans ces réactions. Assurez vous d'étiqueter les extrémités 5’ et 3’ de
ces séquences.
8. Un fragment de 500pb cloné dans un vecteur de 3Kpb est amplifié par PCR en
utilisant 49ng du plasmide recombinant. Quel sera le facteur d'amplification
(combien de fois plus) et combien de ng du fragment amplifié 500pb est ce qu'il y
aura après dix rondes d'amplification?
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Biologie Moléculaire-2014
Bio-informatique 3
9.
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Conception d'amorces
Indiquer de quel organisme chacun des numéros d'accession provient
Soumettre les séquences de vos amorces
Indiquer quelle amorce est "Forward" et quelle est "Reverse"
Indiquer sur les séquences de vos amorces les sites de restriction ajoutés
Indiquer dans quels sites de restriction du SCM de pUC19 votre amplicon serait cloné
Indiquer la taille prédite de l'amplicon pour chaque organisme
Indiquer quelles enzymes de restriction seraient utilisées pour faire la discrimination
entre les trois amplicons
 Indiquer quelles différences sont attendues après la digestion des amplicons avec les
enzymes choisies
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