Réaction en chaîne de la polymérase (RCP)

BIOTECHNOLOGIE
Réaction en chaîne de la
polymérase (RCP)
DOCUMENTATION
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RÉACTION EN CHAÎNE DE LA POLYMÉRASE (RCP)
Si vous vouliez copier une page d'un livre, vous utiliseriez un photocopieur, mais si vous vouliez copier
une séquence d'ADN, que feriez-vous?
Vous utiliseriez la technique nommée réaction en chaîne de la polymérase (RCP) qui a été inventée à
cette fin. Faire des copies d'ADN est utile pour de nombreuses raisons comme créer une empreinte
génétique (pour les tests de paternité ou les enquêtes de médecine légale), faire des protéines
recombinantes (comme l'insuline), identifier des organismes inconnus (à l'aide du code-barres
génétique), etc.
Surtout, la RCP est à la fois rapide et précise. « Précise » veut dire que vous pouvez faire des copies
d'une certaine séquence d'ADN même si les autres séquences sont présentes. Par exemple, si vous
imaginez l'ADN complet présent dans un échantillon comme un livre, la RCP vous permettrait de ne
« photocopier » qu'un seul paragraphe précis.
La RCP comprend trois étapes (Figure 1) :
1. La dénaturation
2. La renaturation
3. L'extension
Figure 1 : RCP.
Image de Wikimedia Commons (http://en.wikipedia.org/wiki/File:Polymerase_chain_reaction.svg )
À l'étape de dénaturation, l'échantillon d'ADN est chauffé à 94-96 C. Cela fait en sorte que les deux brins
de la molécule d'ADN se séparent l'un de l'autre, ce qui est nécessaire pour pouvoir les copier.
La seconde étape (renaturation) consiste à préciser quel « paragraphe » d'ADN vous voulez copier, en
ajoutant de courts brins d'ADN appelés amorces dans la RCP. Quand la température de la réaction
revient entre 50 et 65 C, ces amorces se joindront à la séquence complémentaire présente dans
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l'échantillon d'ADN, grâce au jumelage des paires de nucléotides adénine (A)-thymine (T) et guanine
(G)-cytosine (C).
Dans la troisième étape (extension), la copie d'ADN est enfin faite. Un enzyme appelé ADN polymérase
ajoute les nucléotides (A, C, T, G) à la fin de l'amorce, constituant un brin qui complète celui qui est
présent dans l'échantillon. La RCP utilise un ADN polymérase particulier à chaleur stable, qui n'est pas
détruit quand l'échantillon est chauffé.
C'est simple! En répétant ces trois étapes encore et encore, vous pouvez accroître de façon
exponentielle le nombre de copies de séquences d'ADN.
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