Le polymorphisme de l`IL28B (RS12979860) détermine l
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Le polymorphisme de l’IL28B (rs12979860) détermine l’activité lymphocytaire T intra-hépatique. JP Zarski , E Jouvin-Marche, E Fugier, MA Thélu, H Marche, N Van Campenhout, XS Hoang, A Marlu, V Leroy, N Sturm, PN Marche Hépato-gastroentérologie, U-823 INSERM, Anatomo- pathologie- GRENOBLE AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Conflits d’intérêt: laboratoires BMS Gilead Janssen MSD Roche Siemens Rappels Le polymorphisme de l’IL28B (CC) est corrélé à la réponse virologique soutenue (RVS) chez les patients ayant une hépatite chronique virale C traitée en bi- et en trithérapie. Asahina, Hepatology 2012; Honda, Gastroenterology,2010; Morrow, Mol Ther 2010 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Rappels Le polymorphisme de l’IL28B (CC) est corrélé à la réponse virologique soutenue (RVS) chez les patients ayant une hépatite chronique virale C traitée en bi- et en trithérapie. L’effet de ce polymorphisme sur les fonctions immunitaires du foie et le mécanisme de la Réponse Virale Soutenue (RVS) restent encore mal connus. Asahina, Hepatology 2012; Honda, Gastroenterology,2010; Morrow, Mol Ther 2010 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Rappels Le polymorphisme de l’IL28B (CC) est corrélé à la réponse virologique soutenue (RVS) chez les patients ayant une hépatite chronique virale C traitée en bi- et même en trithérapie. L’effet de ce polymorphisme sur les fonctions immunitaires du foie et le mécanisme de la Réponse Virale Soutenue (RVS) restent encore mal connus. L’infection par le VHC entraine une stimulation des gènes induits par l’interféron (ISGs) et il a été rapporté que les taux d’expression d’ISGs étaient peu élevés en cas de SVR et chez les patients porteurs des allèles CC. Asahina, Hepatology 2012; Honda, Gastroenterology,2010; Morrow, Mol Ther 2010 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 But de l’Etude Rechercher s’il existait une relation entre le polymorphisme de l’IL28B et les fonctions des cellules immunitaires du foie chez les patients ayant une hépatite chronique virale C, avant traitement. AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Patients 52 patients anti-VHC (+) ARN VHC (+) Biopsie hépatique: hépatite chronique Critères d’exclusion: VIH, VHB Alcool: OMS Absence d’auto-immunité, hémochromatose, Wilson Présence d’une cirrhose AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Méthodes Biopsie hépatique: Séparée en 2 fragments Examen anatomo-pathologique et immuno-histochimie Analyse sur prélèvements frais: Collectés dans du RPMI-1640 supplémenté Broyés mécaniquement (potterisation) Lymphocytes re-suspendus en milieu complet Génotypage IL28B (rs 12979860)(kit Roche) Analyses Statistiques: Mann & Whitney U test – Wilcoxon -t test Consentement éclairé préalable (CPP) AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Méthodes: Analyse des lymphocytes intra-hépatiques Cytométrie de flux: Leucocytes (expression de CD45) Puis cellules NK, NKT, T (expression des CD56, CD3) Dégranulation (expression de CD107a) Immuno-histochimie: Quantification des cellules: CD8+, CD4+FoxP3+ (Treg) Nombre total de cellules CD8, FoxP3 comptées Nombre au contact des CD8 Localisation (nécrose lobulaire et péri-portale, distribution dans le tissu fibreux et dans le parenchyme) RT-PCR: Quantification de l’expression de l’IL-10 (ARNm) des cellules immunitaires AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Patients Cytométrie de flux (n=52) RT/PCR (n=21) Histochimie (n=19) 29 (56%) 14 (67%) 14 (74%) Age 50,7 43,6 45,3 Virémie log UI/ml) 5,9 6,0 5,9 ALAT (UI/ml) 65,0 65,5 72,1 Fibrose (Métavir) 0 1 2 3 0 26 (50%) 18 (35%) 8 (15%) 5 4 (19%) 6 (29%) 5 (24%) 1 (5%) 5 (26%) 7 (37%) 4 (21%) Génotype 1 Autres 42 (81%) 10 (19%) 12 (57%) 9 (43%) 8 (42%) 11 (58%) IL28B CC CT TT 17 (33%) 28 (54%) 7 (13%) 12 (57%) 9 (43%) 0 11 (58%) 7 (37%) 1 (5%) Homme AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Fréquence de dégranulation des cellules immunitaires en fonction du polymorphisme IL28B p=0.002 P<0.001 p=0.002 p=0.015 25 12 10 20 10 8 Degranulation des cellules NK (%) 12 Degranulation des lymphocytes NKT (%) Degranulation des lymphocytes T (%) p=0.011 p=0.002 p=0.001 15 6 10 4 2 0 5 0 CC CT TT TT CC CT+TT CTTT CT n=17 n=35 n=28 n=7 8 6 4 2 0 CC CT TT CC CT+TT CTTT CT TT n=17 n=35 n=28 n=7 CC CTTT CT+TT CT CT TT TT CC n=17 n=35 n=28 n=7 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Fréquence de dégranulation des cellules immunitaires en fonction du polymorphisme IL28B chez des patients de génotype viral 1 p=0.001 n=14 n=27 CC n=14 CT+TT n=27 p=0.002 n=14 CC n=14 n=27 CT+TT n=27 NS n=14 n=27 CC n=14 CT+TT n=27 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Analyse du nombre FoxP3 et de l’expression de l’IL10 en fonction du polymorphisme IL28B Augmentation du nombre de FoxP3+ (1), et de l’expression de IL10 (2) chez les patients de génotype IL28B CC. Le double marquage immunohistochimique permet la distinction entre les lymphocytes CD4+/FoxP3+ (Tregs) et CD8+ Cellules FoxP3+ au contact des CD8+ L Tregs en marron - CD8 en bleu p=0.004 2 p=0.023 1.5 8 Expression de l’IL-10 LN Nombre de cellules CD4+FoxP3+ 1 6 4 2 1.0 0.5 0.0 0 CC n=11 CT n=8 CC n=11 CT n=8 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Relation entre la dégranulation des lymphocytes T, le polymorphisme de IL28B et la SVR (Analyse en Composante Principale). 0.5 NR SVR 0.4 GENOTYPE (3A) GENOTYPE (2C) 0.3 0.2 CHARGE VIRALE 0.1 GENOTYPE (1) % 107 among T 0.0 IL28B (T) IL28B (CT) GENOTYPE (4) GENOTYPE (1b) CD107 among NK IL28B (C) CD107 among NKT -0.1 -0.2 GENOTYPE (1a) -0.3 -0.4 0.0 -0.4 -0.3 -0.2 -0.1 0.1 0.2 0.3 0.4 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 SYNTHESE Ces résultats montrent que le polymorphisme IL28B CC est associé à: Une dégranulation spontanée plus importante des lymphocytes T et NKT, en particulier chez les patients porteurs du génotype 1. Un nombre important de Lymphocytes Tregs Un taux d’expression d’IL-10 plus élevé. AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Hypothèse: Polymorphisme de IL28B et effecteurs de la réponse immunitaire L’infection par le VHC entraine une stimulation des gènes induits par l’interféron (ISGs). Les taux d’expression d’ISGs sont plus faibles en cas de SVR et chez les patients porteurs des allèles CC* les cellules dont le taux d’expression des ISGs est faible sont plus réactives ** Avant Traitement Génotype IL28B CC T or ISGs Faible NKT ISGs élevé Médiateur cytolytique Hepatocytes T or NKT Génotype IL28B CT Médiateur cytolytique altéré Hepatocytes Ainsi les patients porteurs du génotype IL28B CC, auraient un nombre plus important de lymphocytes T et NKT engagés dans un processus de dégranulation que les patients porteurs d’un allèle T. Cependant… *Honda et al, Gastroenterology 2010, ** Thomas et al, Gastroenterology 2012 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Hypothèse: Polymorphisme de IL28B et effecteurs de la réponse immunitaire Avant Traitement Génotype IL28B CC Génotype IL28B CT Pas d’Eradication du Virus C Tolérance du foie Treg ISGs Faible ISGs trop élevés ISGs élevé IL10 IL10 T or ISGs Faible NKT ISGs élevé Médiateur cytolytique Hepatocytes Treg T or NKT Médiateur cytolytique altéré Hepatocytes Cependant… ce processus de dégranulation est limité par les cellules T régulatrices (Tregs) chez les porteurs des allèles IL28B CC. *Sturm at al, J Hepatol, 2010 17 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Hypothèse: Polymorphisme de IL28B et effecteurs de la réponse immunitaire Sous Traitement Génotype IL28B CC Génotype IL28B CT Tolérance du foie levée Treg IL10 ISGs Faible T or ISGs Faible NKT Eradication Virale plus efficace ISGs élevé IL10 ISGs élevé Médiateur cytolytique Hepatocytes ISGs trop élevés Traitement (Peg-IFN-α /Ribavirin) +… Treg T or NKT Médiateur cytolytique altéré Hepatocytes Eradication Virale? La Ribavirine inhiberait les fonctions des Tregs* (production d’IL10) et augmenterait ainsi l’efficacité de la réponse anti-virale chez les patients CC. *Langhans et al, PLoS ONE 2012 18 AFEF Montpellier 3-6 Octobre 2012 Remerciements Centre de Recherche U823 INSERM-UniversitéGrenoble Immunologie Patrice N Marche, Evelyne Jouvin-marche Marie-Ange Thelu, Emilie Fugier, Hélène Marche Alice Marlu Nicolas Vancampenhout, Xuan Su Hoang Statistiques Philippe Arvers (CRSSA) Cluster no 10 « Infectiologie » HépatoGastroEntérologie Hôpital-Grenoble Jean-Pierre Zarski Vincent Leroy MN Hilleret Anatomo-Pathologie Hôpital-Grenoble Nathalie Sturm
