des vésicules permettant l’augmentation des stérols plasmalemmiques, la responsabilité du recyclage cellulaire sera
testée en ajoutant des inhibiteurs de la polymérisation des filaments d’actine et des microtubules et d’en observer les
conséquences sur la structuration du plasmalemme induite en réponse à la cryptogéine. En parallèle, les membranes
cellulaires seront chargées en stérols fluorescents et leur (re)localisation en réponse à la cryptogéine sera suivie en
microscopie haute résolution couplée à de la microscopie électronique (microscopie corrélative, plateforme
DIMACell). Des approches de co-localisation utilisant des marqueurs des compartiments cellulaires, dont par exemple
les protéines de type R-SNARE, VAMP 721/722 associées aux vésicules spécifiquement engagées dans la réponse
immunitaire (Kwon et al. 2008 Nature 451:835-40) détermineront les voies de trafic membranaire engagées. Complétées par
la cartographie des domaines ordonnés, les sites plasmalemmiques de l’arrivée de ces vésicules devraient pouvoir
être identifiés.
Ce projet est basé sur un modèle original soutenu par la bibliographie récente, il est supporté par des techniques
novatrices et, pour partie, maitrisées au laboratoire. Enfin, bien que porteur d’avancées inédites et intéressantes, le
projet reste fondé sur des expériences préliminaires qui minimisent notre analyse du risque. Cependant, un deuxième
modèle sera rapidement considéré si nos premières données réfutent notre hypothèse de travail. La formation de
domaines ordonnés directement sur le plasmalemme pourrait permettre d’en modifier l’organisation latérale. Nous
avons montré que l’augmentation de l’abondance des domaines ordonnés induite par l’élicitation était dépendante
d’une production de FAOs (Sandor et al. Soumis J Exp Bot). Le fait que la NADPH oxidase responsable de cette activité
oxydante soit précisément localisée dans des domaines spécifiques (Morel et al. 2006 Mol Cell Proteomics 5:1396-1411) permet
de proposer que les FAOs produits puissent oxyder les molécules à proximité, modifier leurs propriétés structurantes,
et étendre ainsi la taille des domaines ordonnés les portant. Cet autre modèle sera, entre autres, exploré en suivant
sur cellules de tabac traitées par la cryptogéine l’apparition et la diffusion de(s) forme(s) efficace(s) de FAO, grâce à
des sondes fluorescentes spécifiques. Ces cinétiques spatialisées seront comparées à celle des domaines ordonnés,
révélées par la di-4-ANEPPDHQ, et de l’oxydation de la membrane plasmique, observée à l’aide du bodipyC11 (Coll.
L. Beney), de manière à corréler ces différents événements.
- Connaissances et compétences requises
Bases de biologie cellulaire et moléculaire, biochimie et biophysique, microscopie, physiologie végétale. Une
connaissance des interactions plante-microorganisme et des notions sur les techniques d’étude des membranes
seraient un avantage.
2) Publications des 3 dernières années (publications référencées ISI, avec indication du quartile de sa
catégorie ISI pour chaque journal).
Gerbeau-Pissot P., Der C., Grebe M., Stanislas T. (2016) Ratiometric fluorescence live imaging analysis of
membrane lipid order in Arabidopsis mitotic cells using a lipid order-sensitive probe Methods Mol. Biol. (Q3
Genetics, Q4 Molecular Biology) 1370:227-39.
Cacas J.L., Buré C., Grosjean K., Gerbeau-Pissot P., Lherminier J., Rombouts J., Maes E., Bossard C., Gronnier J.,
Furt F., Fouillen L., Germain V., Bayer E., Cluzet S., Robert F., Schmitter J.M., Deleu M., Lins L., Simon-Plas F.,
Mongrand S. (2016) Re-visiting plant plasma membrane lipids in tobacco : A focus on sphingolipids Plant
Physiol.(Q1 Physiology, Q1 Plant Science, Q1 Genetics) 170(1):367-84.
Grosjean K., Mongrand S., Beney L., Simon-Plas F., Gerbeau-Pissot P. (2015) Differential effect of plant lipids on
membrane organization: specificities of phytosphingolipids and phytosterols J Biol Chem. (Q1 Biochemistry, Q1
Cell Biology, Q1 Molecular Biology) 290(9):5810-25.
Kulik A., Noirot E., Grandperret V., Bourque S., Fromentin J., Salloignon P., Truntzer C, Dobrowolska G., Simon-Plas
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Plant Cell Environ. (Q1 Physiology, Q1 Plant Science) 38(2):331-48.
Coursol S., Fromentin J., Noirot E., Brière C., Robert F., Morel J., Liang Y.K., Lherminier J., Simon-Plas F. (2015)
Long-chain bases and their phosphorylated derivatives differentially regulate cryptogein-induced production of
reactive oxygen species in tobacco (Nicotiana tabacum) BY-2 cells. New Phytol. (Q1 Physiology, Q1 Plant
Science) 205(3):1239-49.
Gerbeau-Pissot P., Der C., Thomas D., Anca I.A., Grosjean K., Roche Y., Perrier-CornetJ.M., MongrandS., Simon-
Plas F. (2014) Modification of plasma membrane organization in tobacco cells elicited by cryptogein Plant
Physiol.(Q1 Physiology, Q1 Plant Science, Q1 Genetics) 164(1):273-86.
Noirot E., Der C., Lherminier J., Robert F., Moricova P., Kiêu K., Leborgne-Castel N., Simon-Plas F., Bouhidel K.
(2014) Dynamic changes in the subcellular distribution of the tobacco ROS-producing enzyme RBOHD in
response to the oomycete elicitor cryptogein. J Exp Bot. (Q1 Physiology, Q1 Plant Science) 65(17):5011-22
Guillier C., Cacas J.L., Recorbet G., Deprêtre N., Mounier A., Mongrand S., Simon-Plas F., Wipf D., Dumas-Gaudot
E. (2014) Direct purification of detergent-insoluble membranes from Medicago truncatula root microsomes:
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Anca I.A., Fromentin J., Bui Q.T., Mhiri C., Grandbastien M.A., Simon-Plas F. (2014) Different tobacco
retrotransposons are specifically modulated by the elicitor cryptogein and reactive oxygen species. J Plant
Physiol. (Q1 Agronomy and Crop Science, Q2 Physiology, Q1 Plant Science) 171(16):1533-40.
Les candidatures doivent être transmises à l’ED ES
avant le 19 mai 2016 – midi