Bases techniques en histologie
Du prélèvement à la lame blanche
Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007
Le but final de la technique est de faire une étude complète des prélèvements.
Cette étude sera réalisée sur des coupes minces et régulières dans lesquelles les éléments
des tissus sont maintenus intacts dans leur morphologie et dans leur rapport.
Pour y parvenir, il faut incorporer au tissu une substance neutre et solidifiable : la
paraffine
carbure d’hydrogène saturé solide à la température ambiante, liquide à une
température > 56°C.
insoluble dans l’eau et l’alcool,
soluble dans les hydrocarbures (toluène, xylène, chloroforme, essences…).
Déshydratation, clarification, imprégnation
Procédé de substitution
La propriété de miscibilité des solvants entre eux est utilisée pour la substitution de l’eau
des tissus par la paraffine. Ce procédé est adapté à des pièces de moins de 1 cm
d’épaisseur, quelles que soient leurs surfaces
Il y a plusieurs étapes :
Déshydratation progressive dans des bains d’alcool éthylique de degrés
croissants jusqu’à l’alcool absolu.
Clarification ou éclaircissement
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par remplacement de l’alcool absolu par du
xylène miscible à l’alcool absolu et à la paraffine.
Imprégnation, dernière étape qui aboutit à la substitution du xylène par la
paraffine liquide.
Technique
basée sur le principe d’échange de liquide :
A la fin de chaque temps d’incubation dans un bain, la teneur en solvant ou paraffine doit
être la même dans le bac et dans le prélèvement.
Les conditions de traitement optimales sont atteintes :
en multipliant les bacs de solvant propre
en agitant les prélèvements dans les bains
en adaptant les temps d’incubation à la taille des prélèvements.
Les techniciens sont responsables de l’entretien des appareils et du contrôle de leur
bon fonctionnement.
Inclusion
Les prélèvements imprégnés sont enrobés dans la paraffine.
La prise en masse de la paraffine se fait dans un récipient permettant le démoulage du
bloc.
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à la fin de cette étape, les prélèvements sont « translucides ».