Bases techniques en histologie Du prélèvement à la

Bases techniques en histologie
Du prélèvement à la lame blanche
Le but final de la technique est de faire une étude complète des prélèvements.
Cette étude sera réalisée sur des coupes minces et régulières dans lesquelles les éléments
des tissus sont maintenus intacts dans leur morphologie et dans leur rapport.
Pour y parvenir, il faut incorporer au tissu une substance neutre et solidifiable : la
paraffine
carbure d’hydrogène saturé solide à la température ambiante, liquide à une
température > 56°C.
insoluble dans l’eau et l’alcool,
soluble dans les hydrocarbures (toluène, xylène, chloroforme, essences…).
Déshydratation, clarification, imprégnation
Procédé de substitution
La propriété de miscibilité des solvants entre eux est utilisée pour la substitution de l’eau
des tissus par la paraffine. Ce procédé est adapté à des pièces de moins de 1 cm
d’épaisseur, quelles que soient leurs surfaces
Il y a plusieurs étapes :
Déshydratation progressive dans des bains d’alcool éthylique de degrés
croissants jusqu’à l’alcool absolu.
Clarification ou éclaircissement1 par remplacement de l’alcool absolu par du
xylène miscible à l’alcool absolu et à la paraffine.
Imprégnation, dernière étape qui aboutit à la substitution du xylène par la
paraffine liquide.
Technique basée sur le principe d’échange de liquide :
A la fin de chaque temps d’incubation dans un bain, la teneur en solvant ou paraffine doit
être la même dans le bac et dans le prélèvement.
Les conditions de traitement optimales sont atteintes :
en multipliant les bacs de solvant propre
en agitant les prélèvements dans les bains
en adaptant les temps d’incubation à la taille des prélèvements.
Les techniciens sont responsables de l’entretien des appareils et du contrôle de leur
bon fonctionnement.
Inclusion
Les prélèvements imprégnés sont enrobés dans la paraffine.
La prise en masse de la paraffine se fait dans un récipient permettant le démoulage du
bloc.
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à la fin de cette étape, les prélèvements sont « translucides ».
Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007
Bases techniques en histologie
Du prélèvement à la lame blanche
La coupe sera facilitée si :
la pièce est centrée dans le moule
la cassette est solidement fixée dans la paraffine
Toutes les structures composant le prélèvement pourront être observées si :
la pièce est bien orientée en fonction de l’organe
la face du prélèvement à couper est bien aplanie
Coupe
Les coupes en paraffine se font selon le principe du « rabotage » :
les copeaux épais s’enroulent et se craquèlent
les copeaux minces viennent intacts, à peine incurvés voire plans.
Deux faces latérales du bloc sont parallèles au fil du rasoir. Le bord supérieur de la coupe
(n) reste sur le tranchant du rasoir, la coupe (n+1) au fur et à mesure qu’elle se forme
entraîne la coupe (n). Le ruban se forme ainsi. La face du ruban directement en contact
avec le rasoir est brillante : elle sera posée sur la lame porte objet.
Dégrossir un bloc, c’est éliminer le « mur » de paraffine qui recouvre la pièce.
Les techniciens sont responsables de l’entretien des microtomes et du contrôle de leur
bon fonctionnement.
Etalement
L’étalement consiste à coller les images sélectionnées sur la lame porte objet. Afin de
faciliter l’adhérence du prélèvement sur la lame, il faut :
Aplanir le ruban en ramollissant la paraffine sans la faire fondre
Utiliser une solution filtrée d’albumine glycérinée à 1%
Egoutter suffisamment l’excès d’eau albumineuse
Sécher les lames
Le déplissage peut être complété en tirant sur la paraffine et non sur le prélèvement.
Séchage
Seule une lame bien égouttée pourra être séchée dans de bonnes conditions
Une lame est sèche lorsque la coupe est transparente sans d’effet « miroir » entre la
coupe et la lame.
Fiches techniques Bioimage His-Image – Auteur : Danielle MARTEL (IFTAB - PARIS) - Mise à jour AVRIL 2007