
Master 2 « Génétique et Physiologie Recherche »
Proposition de stage pour l’année universitaire 2014-15
Titre du stage : Différenciation des cellules souches de l'embryon: étude de nouveaux facteurs
impliqués pendant la préimplantation murine.
Résumé : Au troisième jour de développement, l'embryon de souris est constitué de trois types
cellulaires distincts: les cellules souches du trophectoderme, de l'épiblaste et de l'endoderme
primitif (EPr). Notre équipe analyse les mécanismes moléculaires de la différenciation des
cellules en épiblaste ou en EPr. Nous avons montré que cette différenciation dépend des
interactions antagonistes de deux facteurs de transcription, Nanog et Gata6 ainsi que de la voie
de signalisation Fgf. En effet, sans Nanog ou sous l'action du Fgf, toutes les cellules deviennent
de l'EPr et à l'inverse sans Gata6 ou en inhibant la voie de signalisation Fgf toutes les cellules
deviennent de l'épiblaste.
Au cours de cribles, nous avons découvert de nouveaux facteurs qui seraient potentiellement
impliqués dans la differenciation de l'épiblaste ou de l'EPr. L'étudiant(e) caractérisera
l'expression de ces nouveaux facteurs par différentes techniques d'immunofluorescence et
d'hybridation in situ. Des analyses fonctionnelles seront ensuite effectuées dans l'embryon ou
dans des modèles in vitro de différenciation tels que les cellules souches embryonnaires ES.
Directeur de stage : Claire Chazaud
Tel : 04 73 17 83 80
Laboratoire d’accueil : GReD, UMR CNRS 6293,INSERM U1103, Clermont Université
Directeur du laboratoire : Chantal Vaury
Adresse : UFR médecine, 28 place Dunant BP38
63001 Clermont-Fd cedex
Méthodologies envisagées (mots-clés) : culture cellulaire, culture et electroporation d'embryons,
transgenèse, analyse expression de gènes (RTqPCR, hybridation in situ, western,
immunofluorescence), microscopie confocale, clonage.
Publications du laboratoire sur le thème proposé (3 max.). Les membres de l'équipe sont
soulignés
- Gasnier, M., Dennis, C., Vaurs-Barrière, C. and C. Chazaud. Fluorescent mRNA labeling via
cytoplasmic FISH. Nature Protocols, 8: 2538-47. (IF: 8)
- Lavial F., Bessonnard S, Ohnishi Y, Tsumura A, Chandrashekran A, Fenwick M, Hardy K,
Chambers I, Hiiragi T, Chazaud C and Azuara V. (2012). Bmi1 facilitates primitive endoderm
formation by stabilizing Gata6 in the early embryo. Genes and Development, 26: 1445-58 (IF:
13)
- Frankenberg, S, Gerbe F, Bessonnard S., Belville C., Pouchin P., Bardot O. et Chazaud C.
(2011) Primitive endoderm differentiates via a three-step mechanism involving Nanog and RTK
signalling. Developmental Cell, 21: 1005, 1013. (IF: 14)
- Gerbe F., Cox B., Rossant J. and Chazaud C (2008): Dynamic expression of LRP2 pathway
members reveals progressive epithelial differentiation of Primitive Endoderm in mouse
blastocyst. Developmental Biology 313, 594-602. (IF: 4)