Le milieu Kligler Hajna
I. Principe
C’est un milieu complexe, il permet la lecture des caractères suivants :
Utilisation du glucose avec ou sans production de gaz
Utilisation du lactose
Production d’H2S (hydrogène sulfureux)
Recherche de la β-galactosidase
Ce milieu est intéressant pour l’indentification rapide des bacilles Gram -.
II. Composition et rôle des constituants
Pour 1L d’eau distillée :
Extrait de viande de bœuf : 3 g, apportent des facteurs de croissance.
Extrait de levure : 3 g, apportent des facteurs de croissance.
Peptone : 20 g, nutriments essentiels, source de N, C…
NaCl : 5 g, participe au maintien de la pression osmotique.
Système de lecture de production d’H2S :
Thiosulfate de sodium : 0.3 g, source de sulfate qui seront ou pas réduit par la bactérie.
Citrate ferrique: 0.3 g, source d’ions Fer III qui réagiront avec la forme réduite des sulfates si
ceux-ci sont réduits.
Système de lecture des caractères glucose et lactose :
Lactose : 10 g, source de carbone et d’énergie.
Glucose : 1 g, source de carbone et d’énergie.
Rouge de phénol : 25 mg, indicateur coloré de pH.
Agar : 12 g, permet au milieu de lui donner son aspect solide.
pH : 7.4
III. Mode opératoire
Le milieu est habituellement présenté en pente, sinon le fondre et le solidifier avec une pente et un
culote d’environ 3 cm.
Ensemencer d’abord la pente en stries serrées, puis le culot pas piqûre centrale avec la même
pipette, la pente doit être largement ensemencé, contrairement au culot.
Dévisser en partie le bouchon du tube pour permettre une incubation en aérobiose.
Incuber a 37°C entre 18 à 24 heures.