L`ensemencement se fait par les techniques habituelles.

BOUILLON ET GELOSE NUTRITIVE
Ces milieux permettent la culture des bactéries peu exigeantes.
Composition
Formule en g/L d'eau distillée :
Peptone pancréatique d’organe
10 g
Extrait de viande
10 g
Chlorure de sodium
5 g
Agar
20 g
pH = 7.5
Rôles des composants
- peptone : protéine plus ou moins dégradée par action enzymatique avec des peptides et des acides aminés
source d’azote organique
- extrait de viande : protéines peu dégradées source d’azote organique
glucides source de carbone organique et d’énergie
sels minéraux
vitamines hydrosolubles
-NaCl à 5 g/l :

MILIEU DE CHAPMAN
Le milieu de Chapman est un milieu sélectif, surtout utilisé en
microbiologie médicale, permettant la croissance des germes
halophiles. Parmi ces germes figurent au premier rang les bactéries du
genre Staphylococcus, mais aussi les Micrococcus, lesEnterococcus,
les Bacillus, et de rares bactéries à Gram négatif.
Composition
Sa composition, en grammes par litre d'eau distillée, est la suivante :
Peptones
11,0 g
Extrait de viande
1,0 g
Chlorure de sodium
75 g
Mannitol
10,0 g
Rouge de phénol
0,025 g
Agar
15 g
Eau distillée (qsp)
1000 mL
Rouge de phénol
Principe
Ce milieu contient un inhibiteur : fortes concentrations en chlorure de sodium (75 g.L-1), ce qui permet
un isolement sélectif de Staphylococcus tolérant les fortes concentrations en NaCl.
On peut étudier la fermentation du mannitol par virage au jaune de l’indicateur coloré, le rouge de
phénol, autour des colonies.
Technique
L'ensemencement doit être massif, en stries serrées ou par inondation.
Ne pas sécher le milieu à l’étuve avant l’ensemencement : la déssication du milieu pourrait entraîner
une augmentation de la concentration en NaCl et rendre le milieu trop inhibiteur.
Lecture
L'utilisation du mannitol se traduira par une acidification du
milieu, provoquant le virage au jaune de l'indicateur de pH.
Les colonies mannitol + sont entourées d’une auréole
jaune. L'utilisation du mannitol est un caractère discriminatif
important dans le genreStaphylococcus, Staphylococcus aureus étant
mannitol +.
Ne pas confondre la pigmentation des colonies et le virage de l’indicateur coloré.
Ainsi des colonies pigmentées en jaunes et mannitol + : forte suspicion de S. aureus
Remarque : le milieu de Chapman permet la sélection des Staphylococcus et une orientation pour
l’identification de l’espèce S. aureus.Mais il ne s’agit que d’un test de présomption et une confirmation par des
tests plus spécifiques (coagulase. ADNase…) reste obligatoire.

.GELOSE HEKTOEN
La gélose Hektoen est un milieu d'isolement des Salmonelles et
des Shigelles, bien que de nombreuses bactéries à Gram négatif puissent
se développer sur ce milieu. L'identification d'entérobactéries pathogènes
repose sur la non utilisation des glucides présents dans le milieu.
Composition
En g par litre d'eau distillée
Protéose peptone
12g
Extrait de levure
3g
Chlorure de sodium
5g
Thiosulfate de sodium
5g
Sels biliaires
9g
Citrate de fer III et d'ammonium
1,5g
Salicine
2g
Lactose
12g
Saccharose
12g
Fuschine acide
0,1g
Bleu de bromothymol
0,065g
Agar
14g
Eau distillée (qsp)
1000mL
Bleu de bromothymol
Principe
Ce milieu contient trois types de glucides : la salicine (qui est un hétéroside), le saccharose et le
lactose. L'orientation de l'identification des colonies isolées est fondée sur l'attaque de ces trois glucides, les
salmonelles et les shigelles n'attaquant aucun de ces glucides.
Un autre caractère biochimique que l'on peut suivre sur ce milieu est la production d'H2S à partir de
thiosulfate. Elle se traduit par l'obtention de colonies à centre noir, coloration due à la formation de sulfure de
fer. Ce caractère est important car il permet de différencier les Salmonella (H2S +) des Shigella (H2S -).
Deux indicateurs sont présents dans le milieu :
- le bleu de bromothymol (indicateur de pH)
- la fuschine acide (qui se colore en présence d'aldéhyde. On observe alors une teinte
saumonée si la souche utilise un ou plusieurs des glucides présents).
Technique
L'ensemencement se fait par les techniques habituelles.
Résultats
Colonies saumon
Colonies saumon à
centre noir
Colonies bleu-vert
à centre noir
Colonies bleu-vert
ou vertes
Escherichia, Levinea,
Citrobacter diversus,
Klebsiella,
Enterobacter, Serratia,
Yersinia
Citrobacter
freundii, Proteus
vulgaris,
Suspicion
deSalmonella, à
différencier
deProteus
mirabilis
Suspicion
deShigella ou
deSalmonella

GELOSE SS
Gélose Salmonella-Shigella.
Milieu sélectif permettant l’isolement d'entérobactéries
pathogènes.
Il est très utilisé pour la recherche de Salmonella dans
les selles et les denrées alimentaires peu pour les Shigella car trop
sélectif.
Composition
Formule en g/L d'eau distillée :
Extrait de viande de bœuf
Bio-polytone
Sels biliares
Lactose
Citrate de sodium
Thiosulfate de sodium
Citrate ferrique
Vert brillant
Rouge neutre
Agar
pH = 7,0
5
5
8,5
10
8,5
8,5
1
0,330 mg
0,025
13,5
Rouge neutre
Principe
Le milieu contient 3 inhibiteurs : sels biliaires, vert brillant et forte concentration en citrate de sodium.
Ceux-ci empêchent la pousse de toutes bactéries Gram+, et rendent difficile la croissance des bactéries Gram-
autres que Salmonella et Shigella.
Le milieu contient du lactose dont la fermentation est révélée par le virage de l’indicateur coloré, le
rouge neutre, à sa teinte acide.
Si la bactérie ensemencée fermente le lactose, le milieu devient rouge, par virage du rouge neutre,
du fait de l’acidification du milieu.
Le milieu contient du thiosulfate à partir duquel les bactéries qui en sont capables peuvent produire H2S,
qui sera révélé par le citrate ferrique.
Si la bactérie ensemencée produit H2S, en présence du fer III, un précipité noir se forme au centre
de la colonie.
Ensemencement
Isolement par la méthode des cadrans.
Incuber 18 à 24 h à 37°C.
Lecture
 colonies rouges : lactose +
 colonies incolores : lactose –
 colonies à centre noir : H2S +

MILIEU MAC CONKEY
Milieu sélectif pour l'isolement des bacilles Gram-
Salmonella et Shigella ainsi que des bactéries coliformes dans les eaux, les
produits alimentaires, les produits pharmaceutiques et biologiques .
Composition
Formule en g/L d'eau distillée :
Peptone
20
Lactose
10
Sels biliaires
1.5
Cristal violet
0.001
Rouge neutre
0.05
Chlorure de sodium
5
Agar
15
pH = 7,1
Rouge neutre
Principe
 Ce milieu contient deux inhibiteurs de la flore Gram+, les sels biliaires et le cristal violet.
 Le milieu contient un critère de différenciation, le lactose dont l’utilisation est révélée par
l’indicateur coloré du milieu, le rouge neutre.
Il vire au rouge en milieu acide.
 si la bactérie ensemencée fermente le lactose, le milieu devient rouge, par virage du rouge neutre, du
fait de l’acidification du milieu.
Ensemencement
Isolement par la méthode des cadrans.
Incuber 18 à 24 h à 37 °C.
Lecture
Colonies rouges entourées d’un hâlo opaque de la même couleur du à la précipitation des sels biliaires:
lactose+
Colonies jaunes ou incolores : lactose-