Compte rendu de TP : Mesure de la masse sanguine chez le

TPdePhysiologieanimale ChateignerAurélien
Physiolog onctionsieanimale:lesgrandesf
CompterendudeTP:
MesuredelamassesanguinechezleRat.
But:DansceTP,notrebutserademesurerlevolumedesang(déduitduvolumeplasmatiqueetde
l’hématocrite)circulantchezleratpourendéduirelamassesanguineparrapportàlamasse
corporelle.
I. Introduction:lecompartimentsanguin
A. Composition
Lesangestuntissuconjonctif:ilsecomposed’élémentssolides,appelésélémentsfigurés,quisont
dispersésdansunfluide,leplasma.Ilestrelativementvisqueux(5foislaviscositédel’eau)et
possèdeunedensitéde1,05.
1. Leplasma
C’estdel’eauà90%.Lacompositionensubstancesminéralesestlamêmequecelledesmilieux
extracellulaires:onytrouveprincipalementdusodium(Na)etduchlore(Cl)(d’oùl’utilisationde
sérumphysiologique(à0,9%NaCl),quipréservel’osmolaritédumilieusanguin)maisilyaégalement
dufer,ducuivre,duzincetdesiodures.Onytrouvedessubstancesorganiquestellesqueles
protéinesplasmatiques(albumineetglobulines).Dessubstancesazotéescommel’urée(produitde
dégradationdesprotéines),desacidesaminés,del’acideurique(produitdedégradationdes
nucléotides),delabilirubine(produitdedégradationdel’hémoglobine)ouencoredel’ammoniaque,
sontprésentes.Ilsecomposeégalementdeglucose(glycémie=1g/L)etdelipidesvariés
(triglycérides,phospholipides,cholestérol…).
2. Systèmetampon
LepHdel’organismeoscilleautourde7,4.Pourmaintenircetéquilibrelesangpossèdedifférentes
façonderétablirl’équilibreacido‐basiqueencasdevariations.
3. Lesélémentsfigurés
Onpeutlesregrouperendifférentesfamilledecellules:lesérythrocytes,lesleucocytes
(polynucléaires,monocytes,lymphocytes)etlesthrombocytes.Ilsonttouspouroriginelescellules
souchesdelamoelleosseuse.Cesontlesleucocytesquisontimpliquésdanslesdéfenses
immunitairesdel’organisme.Laproportiondesdifférentstypedeglobulesblancs(leucocytes)défini
laformulesanguine:chezlerat,onparledeformulesanguineinversée,c’estàdirequ’ilyaplusde
lymphocytesquedepolynucléaires.Lesérythrocytessontchargésdutransportdel’oxygènedans
toutl’organisme;pourcefaireilscontiennentuneprotéine,l’hémoglobine,contenantunatomede
ferquidonnesacouleurrougeausang,quifixel’oxygèneafindelatransporter.Lesthrombocytes
(plaquettes)sontchargésdedébuterlephénomènedecoagulation.
1

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B. Rôledusangetsystèmevasculaire
Lesangestpropulséparlecœuràtraverslesystèmevasculaire.C’estunsystèmedeliquideenvase
clossansciterne.Cependantlesystèmeveineuxjoueindirectementcerôle;eneffetcelui‐ci
renferme60à70%duvolumesanguin.Onretrouve10%desangdanslesartères,environ5%dans
lescapillaires,10%danslespoumonsetmoinsde10%danslecœur.Lesangestmaintenusous
pressiondanscesystème,cequipermetsondéplacementdanslesvaisseaux.Cesystèmepermetau
sangd’accomplirsonrôlequiestd’apporterlesnutrimentsetl’oxygèneàtouslestissusde
l’organisme,etd’enévacuerlesdéchets(dumétabolismeparexemple).
II. Principedesmanipulations
Onutiliseradestechniquesopératoires:lecathétérismedelaveinejugulaireetdel’artèrecarotide.
Aprèslaposedescathéters,oninjecteunesolutiond’héparineà1%(anticoagulant)parlajugulaire
pour,d’unepartéviterlaformationdecaillots,etd’autrepartpourl’analysedusang:eneffetilest
nécessairequelesangnecoagulepaspourréaliserlesmesures.
Sanghépariné:Silesangn’estpashépariné,ilcoagule:cequifaitapparaitre2phases,l’uneétant
lesérumetl’autreétantle«coagulum».Lorsdelacoagulation,uneprotéineplasmatiqueestmise
enjeu,lefibrinogènequi,unefoisconvertieenfibrineparlathrombine(uneautreprotéine),forme
unemaillequiemprisonnelesélémentsfigurés(érythrocytes,thrombocyteetleucocytes).Lesérum
estdoncleplasmasanslefibrinogène.L’héparinebloquecephénomèneenempêchantlaformation
dethrombine.Onpeutséparerleplasmadesélémentsfigurésd’unsanghéparinéenle
centrifugeant.
A. Cathétérismedelajugulaire
LeCathéterposéauniveaudelajugulairenouspermettrad’injecteruncolorant,leBleuEvans,qui
vadiffuseretêtrediluédanslevolumesanguin.OninjecteunequantitédéterminéeQd’une
solutionducolorantà2g/L.L’injectiondanslajugulairepermetunpassagerapideparlecœuret
doncunediffusionrapidedanstoutlesystèmevasculaire.
Avantagesdel’utilisationduBleud’Evans:c’estuncomposénontoxique.Ildemeuredanslesang
dufaitdesaliaisonauxprotéinesplasmatiques(aumoinsletempsdenotreexpérience):ilseraalors
mesurabledansleplasmaaprèscentrifugation.Iln’estpasmétabolisé(pasdurantl’expérience).Il
estmesurablefacilementenutilisantunspectrophotocolorimètre(à580nm)
B. Cathétérismedelacarotide
Onpourraensuiterécupérerdusang,parlecathéterdelacarotide(Leprélèvementsefaitàpartir
del’artèreCarotidecaronaundébitsanguinplusimportant,celle‐ciarrivantdirectementdela
crosseaortique,situéeàlasortieduventriculegauche,quipropulselesangoxygénédanstout
l’organisme),afindedéterminerlaconcentrationCenBleuEvansetalorsdéterminerladilution
effectiveetendéduirelevolumeplasmatiqueVp.Enfait,oncentrifugelesang:onaura2phases,le
surnageantétantleplasmaquicontientlecolorant.OndéterminealorslaconcentrationCenbleu
d’Evansdansleplasmagrâceàunegammeétalonréaliséeaupréalable.Ondoitaussiréaliserun
HématocriteHt(mesuredupourcentagedesérythrocytes=volumeglobulaireVg)pourpouvoir
ensuitedéterminerlevolumesanguinVs.
2

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Vp=Q/C
Vp(en%)=100%‐Vglobulaire(en%):Vs=Vpx(100/(100‐Ht))
III. Expérienceetrésultats
OnainjectéunvolumedeBleud’Evans,à2g/l,enfonctiondupoidsdel’animal:0,5ml/kg
NotreRatpesait340grammes:0,5x0,340=0,17ml;oninjectealors170µlducolorantauniveau
delaveinejugulaire,cequireprésente340µg.
Onrécupère,auboutde5minutesaprèslafindel’injection,dusangparleCathéterdelacarotide
et,aprèscentrifugation,onrécupèrelesurnageantpourlirel’absorbanceà580nm.
A. Problème:lecturedirecteimpossible
Onestenprésenced’unesolutiontropconcentréepourunelecturefiableduspectrophotomètre:
eneffetlamesured’absorbancedoitêtrecompriseentre0,05et1,2.Orlaconcentrationesttelle
quelamesured’absorbanceestplusgrandeque1,2.Onréalisealorsunedilutiondelasolutionpour
quesaconcentrationsoittellequelavaleurd’absorbancesoitcompriseentre0,05et1,2.Ondiluela
solutionau1/6ème:ontrouveunevaleurd’absorbanceAégaleà0,612.
B. Courbed’étalonnage
Pourfaireunecourbeétalon,onréalisedesdilutionsàpartirdelasolutiondedépartpourobtenir
desvaleursd’absorbancescomprisesdansl’intervallefiable(entre0,05et1,2).Lasolutiondedépart
està2g/L.
DilutionparrapportàlasolutionmèreConcentration(eng/L)Absorption
1/1601,25E‐021,176
1/3206,25E‐030,622
1/6403,13E‐030,330
1/9602,08E‐030,221
1/12801,56E‐030,193
1/17201,16E‐030,130
1/25607,81E‐040,095
Onpeutalorspositionnerlespointssurlegraphiqueci‐dessous.
Ontraceunedroitederégressionlinéaire:onconstatequ’ellepassepar0etquelecoefficientde
déterminationR2esttrèsprochede1.Ladroiteestdoncrelativementfidèleauxpoints
expérimentaux.
3
Onutiliseensuitel’équationdeladroite,y=96,37x,pourdéterminerlaconcentrationenBleuEvans.
(ycorrespondàl’absorbanceetxàlaconcentration)
Concentrationplasmatique=Cp=(A/96,37)x6(dilutionau6ème)=3,81.10‐2g.L‐1

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Ondoitcalculerlevolumetotaldenotreproduit,commevuprécédemment:Vp=Q/C.Ondoit
déterminerQ.Notresolutionestà0,2%,onadoncQ=170x0,2=0,34µgdeproduitinjecté.
Vp=0,34(µg)/3,81.10‐2(µg/ml)=8,92ml
y=96,37x
R²=0,994
0,000
0,200
0,400
0,600
0,800
1,000
1,200
1,400
0,00E+00 2,00E‐03 4,00E‐03 6,00E‐03 8,00E‐03 1,00E‐02 1,20E‐02 1,40E‐02
Absorbance
ConcentrationenBleud'Evanseng/l
Courbeétalon:Absorbanceenfonctiondela
concentrationenBleuEvans
L’hématocritenousapermisdemesurerlaproportionenélémentsfigurés:Ilyenaenviron47%
danslesang.Onendéduitalorslevolumesanguintotal.
C. Volumeetmassesanguine
Vs=Vpx(100/(100‐Ht))
Ici, Vp=8,92mL
Ht=47%  DoncVs=8,92x(100/(100‐47))=16,21mL
Onendéduitlamassesanguine:ensupposantunemassespécifiquedusangà1g/mL,onobtient
unemassesanguinede16,21g.
Onpeutendéduireenpourcentage,lerapportmassesanguine/massecorporelle:
(16,21/340)x100=4,8%
4
Onremarquequecerapportestassezbas.Ceciestdûàquelquesproblèmesrencontréslorsdes
manipulations.

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IV. Interprétationdesrésultatsetanalysedeserreurscumulées
Commenousl’avonssignaléprécédemment,nousavonsrencontréuncertainnombrede
mésaventurespendantnosmanipulations.
Eneffet,nousavonsprovoquédespertesdesang,aucoursdelaposedescathéters.Endégageant
lescouchesdemusclespouraccéderàlacarotide,nousavonsprovoquéunehémorragie,
possiblementdueàlalésiondelajugulaire.
Deplus,Unecarotideaétésectionnée,àcaused’uneerreurlorsdel’introductionducathéter,
provoquantdecefaitunefortehémorragie,limitéetantbienquemalparlaposed’unepinceclamp.
Unedernièrehémorragie,d’origineplusprofondeetinconnue,estsurvenuelorsdela2èmetentative
deposedecathétercarotidien(quifutaufinalunsuccès).
Toutescesmaladressesontfaitperdreànotreratunefortequantitédesang,levolumesanguin
mesuréparl’expérienceestdoncfaussé,nosrésultatsétantinférieursàceuxattendus.Onaurait
théoriquementdutrouverunvolumedesangd’environ30mL.Ilauraitfalluévaluerlaquantitéde
sangperdulorsdeshémorragiespours’approcherdelavaleurréelle.
Nosrésultatsnousconduisentàunvolumesanguinrestreint(16,21mL),onsupposedoncquel’ona
perduentre10mLet20mLdesang,aucoursdenotreexpérience.
Deserreurspeuventégalementsurvenirlorsdel’injectionducolorant.Eneffet,oninjecteunvolume
trèsfaible,cequiaugmentelepourcentaged’erreurspossible,enrelationaveclaprécisiondu
matérielutilisé.Cependant,enmanipulantavecprécision,onpeutrendrecequasimentnul.
Onpeutégalementimputerdeserreursàl’établissementdelagammeétalon,lesdilutionsayantété
faitesencascade,silapremièreétaitfaussée(erreurdepipetageparexemple),touteslesautres
l’étaientaussi.Lematérielutilisé(micropipette)étantprécis,ilpermet,àconditionsdemanipuler
correctement,d’êtreconfiantparrapportàlaprécisiondesdilutionseffectuées.Onconstateune
bonnequalitédelagammeétalon,lecoefficientdedéterminationR2(miseenévidencedutaux
d’erreur)étantquasimentégalà1(voircourbeétalon).
V. Conclusion
CeTPnousapermisdedéterminerlevolumesanguinrestantaprèsleshémorragies.Onadoncpu
déterminerlamassesanguinecorrespondante,malheureusement,onnepeutpasdéterminerla
masseréelle,àcausedesdifférentsproblèmesrencontrés.
Pourconcluresurlaméthodeemployée,onpeutdirequ’ellepeuts’avérertrèsintéressanteet
précise,danslecasd’unemanipulationparfaite(sanshémorragies).Onnepourraitpasobtenirdesi
bonsrésultatsen«saignant»l’animal,carunepartiedusangresteraitdanslesvaisseauxsanguins.
Eneffet,leproduitdiffusantdanstoutlesystèmevasculaire,onpeutendéduireavecprécisionle
volumetotaldesang,grâceàladilutioneffective.Letempsdediffusionétantassezcourt,onlimite
égalementl’éliminationrénale,quipourraitfausserlesrésultatsdanslecasd’unediffusionplus
longue.
5