Expériences et interprétations

TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Physiologie animale : les grandes fonctions
Compte rendu de TP :
Mesure de la masse sanguine chez le Rat.
But : Dans ce TP, notre but sera de mesurer le volume de sang (déduit du volume plasmatique et de
l’hématocrite) circulant chez le rat pour en déduire la masse sanguine par rapport à la masse
corporelle.
I.
Introduction : le compartiment sanguin
A.
Composition
Le sang est un tissu conjonctif : il se compose d’éléments solides, appelés éléments figurés, qui sont
dispersés dans un fluide, le plasma. Il est relativement visqueux (5 fois la viscosité de l’eau) et
possède une densité de 1,05.
1.
Le plasma
C’est de l’eau à 90%. La composition en substances minérales est la même que celle des milieux
extracellulaires : on y trouve principalement du sodium (Na) et du chlore(Cl) (d’où l’utilisation de
sérum physiologique (à 0,9% NaCl), qui préserve l’osmolarité du milieu sanguin) mais il y a également
du fer, du cuivre, du zinc et des iodures. On y trouve des substances organiques telles que les
protéines plasmatiques (albumine et globulines). Des substances azotées comme l’urée (produit de
dégradation des protéines), des acides aminés, de l’acide urique (produit de dégradation des
nucléotides), de la bilirubine (produit de dégradation de l’hémoglobine) ou encore de l’ammoniaque,
sont présentes. Il se compose également de glucose (glycémie = 1g/L) et de lipides variés
(triglycérides, phospholipides, cholestérol…).
2.
Système tampon
Le pH de l’organisme oscille autour de 7,4. Pour maintenir cet équilibre le sang possède différentes
façon de rétablir l’équilibre acido-basique en cas de variations.
3.
Les éléments figurés
On peut les regrouper en différentes famille de cellules : les érythrocytes, les leucocytes
(polynucléaires, monocytes, lymphocytes) et les thrombocytes. Ils ont tous pour origine les cellules
souches de la moelle osseuse. Ce sont les leucocytes qui sont impliqués dans les défenses
immunitaires de l’organisme. La proportion des différents type de globules blancs (leucocytes) défini
la formule sanguine : chez le rat, on parle de formule sanguine inversée, c’est à dire qu’il y a plus de
lymphocytes que de polynucléaires. Les érythrocytes sont chargés du transport de l’oxygène dans
tout l’organisme ; pour ce faire ils contiennent une protéine, l’hémoglobine, contenant un atome de
fer qui donne sa couleur rouge au sang, qui fixe l’oxygène afin de la transporter. Les thrombocytes
(plaquettes) sont chargés de débuter le phénomène de coagulation.
1
TP de Physiologie animale
B.
Chateigner Aurélien
Rôle du sang et système vasculaire
Le sang est propulsé par le cœur à travers le système vasculaire. C’est un système de liquide en vase
clos sans citerne. Cependant le système veineux joue indirectement ce rôle ; en effet celui-ci
renferme 60 à 70% du volume sanguin. On retrouve 10 % de sang dans les artères, environ 5% dans
les capillaires, 10% dans les poumons et moins de 10% dans le cœur. Le sang est maintenu sous
pression dans ce système, ce qui permet son déplacement dans les vaisseaux. Ce système permet au
sang d’accomplir son rôle qui est d’apporter les nutriments et l’oxygène à tous les tissus de
l’organisme, et d’en évacuer les déchets (du métabolisme par exemple).
II.
Principe des manipulations
On utilisera des techniques opératoires : le cathétérisme de la veine jugulaire et de l’artère carotide.
Après la pose des cathéters, on injecte une solution d’héparine à 1% (anticoagulant) par la jugulaire
pour, d’une part éviter la formation de caillots, et d’autre part pour l’analyse du sang : en effet il est
nécessaire que le sang ne coagule pas pour réaliser les mesures.
Sang hépariné : Si le sang n’est pas hépariné, il coagule : ce qui fait apparaitre 2 phases, l’une étant
le sérum et l’autre étant le « coagulum ». Lors de la coagulation, une protéine plasmatique est mise
en jeu, le fibrinogène qui, une fois convertie en fibrine par la thrombine (une autre protéine), forme
une maille qui emprisonne les éléments figurés (érythrocytes, thrombocyte et leucocytes). Le sérum
est donc le plasma sans le fibrinogène. L’héparine bloque ce phénomène en empêchant la formation
de thrombine. On peut séparer le plasma des éléments figurés d’un sang hépariné en le
centrifugeant.
A.
Cathétérisme de la jugulaire
Le Cathéter posé au niveau de la jugulaire nous permettra d’injecter un colorant, le Bleu Evans, qui
va diffuser et être dilué dans le volume sanguin. On injecte une quantité déterminée Q d’une
solution du colorant à 2g/L. L’injection dans la jugulaire permet un passage rapide par le cœur et
donc une diffusion rapide dans tout le système vasculaire.
Avantages de l’utilisation du Bleu d’Evans : c’est un composé non toxique. Il demeure dans le sang
du fait de sa liaison aux protéines plasmatiques (au moins le temps de notre expérience) : il sera alors
mesurable dans le plasma après centrifugation. Il n’est pas métabolisé (pas durant l’expérience). Il
est mesurable facilement en utilisant un spectrophotocolorimètre (à 580 nm)
B.
Cathétérisme de la carotide
On pourra ensuite récupérer du sang, par le cathéter de la carotide (Le prélèvement se fait à partir
de l’artère Carotide car on a un débit sanguin plus important, celle-ci arrivant directement de la
crosse aortique, située à la sortie du ventricule gauche, qui propulse le sang oxygéné dans tout
l’organisme), afin de déterminer la concentration C en Bleu Evans et alors déterminer la dilution
effective et en déduire le volume plasmatique Vp. En fait, on centrifuge le sang : on aura 2 phases, le
surnageant étant le plasma qui contient le colorant. On détermine alors la concentration C en bleu
d’Evans dans le plasma grâce à une gamme étalon réalisée au préalable. On doit aussi réaliser un
Hématocrite Ht (mesure du pourcentage des érythrocytes = volume globulaire Vg) pour pouvoir
ensuite déterminer le volume sanguin Vs.
2
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Vp = Q / C
Vp (en %) = 100% - V globulaire(en%) : Vs = Vp x (100/(100-Ht))
III.
Expérience et résultats
On a injecté un volume de Bleu d’Evans, à 2 g/l, en fonction du poids de l’animal : 0,5 ml / kg
Notre Rat pesait 340 grammes : 0,5 x 0,340 = 0,17 ml ; on injecte alors 170 µl du colorant au niveau
de la veine jugulaire, ce qui représente 340 µg.
On récupère, au bout de 5 minutes après la fin de l’injection, du sang par le Cathéter de la carotide
et, après centrifugation, on récupère le surnageant pour lire l’absorbance à 580 nm.
A.
Problème : lecture directe impossible
On est en présence d’une solution trop concentrée pour une lecture fiable du spectrophotomètre :
en effet la mesure d’absorbance doit être comprise entre 0,05 et 1,2. Or la concentration est telle
que la mesure d’absorbance est plus grande que 1,2. On réalise alors une dilution de la solution pour
que sa concentration soit telle que la valeur d’absorbance soit comprise entre 0,05 et 1,2. On dilue la
solution au 1/6ème : on trouve une valeur d’absorbance A égale à 0,612.
B.
Courbe d’étalonnage
Pour faire une courbe étalon, on réalise des dilutions à partir de la solution de départ pour obtenir
des valeurs d’absorbances comprises dans l’intervalle fiable (entre 0,05 et 1,2). La solution de départ
est à 2g/L.
Dilution par rapport à la solution mère
Concentration (en g/L)
Absorption
1/160
1/320
1/640
1/960
1/1280
1/1720
1/2560
1,25E-02
6,25E-03
3,13E-03
2,08E-03
1,56E-03
1,16E-03
7,81E-04
1,176
0,622
0,330
0,221
0,193
0,130
0,095
On peut alors positionner les points sur le graphique ci-dessous.
On trace une droite de régression linéaire : on constate qu’elle passe par 0 et que le coefficient de
détermination R2 est très proche de 1. La droite est donc relativement fidèle aux points
expérimentaux.
On utilise ensuite l’équation de la droite, y = 96,37x, pour déterminer la concentration en Bleu Evans.
(y correspond à l’absorbance et x à la concentration)
Concentration plasmatique = Cp = (A / 96,37) x 6 (dilution au 6ème) = 3,81.10-2 g.L-1
3
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On doit calculer le volume total de notre produit, comme vu précédemment : Vp = Q/C. On doit
déterminer Q. Notre solution est à 0,2 %, on a donc Q = 170 x 0,2 = 0,34 µg de produit injecté.
Vp = 0,34 (µg) / 3,81.10-2 (µg/ml) = 8,92 ml
Courbe étalon : Absorbance en fonction de la
concentration en Bleu Evans
1.400
1.200
y = 96.37x
R² = 0.9945
Absorbance
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0.00E+00
2.00E-03
4.00E-03
6.00E-03
8.00E-03
1.00E-02
1.20E-02
1.40E-02
Concentration en Bleu d'Evans en g/l
L’hématocrite nous a permis de mesurer la proportion en éléments figurés : Il y en a environ 47%
dans le sang. On en déduit alors le volume sanguin total.
C.
Volume et masse sanguine
Vs = Vp x (100 / (100-Ht))
Ici,
Vp = 8,92 mL
Ht = 47%
Donc Vs = 8,92 x (100 / (100-47))= 16,21 mL
On en déduit la masse sanguine : en supposant une masse spécifique du sang à 1g/mL, on obtient
une masse sanguine de 16,21 g.
On peut en déduire en pourcentage, le rapport masse sanguine/ masse corporelle :
(16,21 / 340) x 100 = 4,8 %
On remarque que ce rapport est assez bas. Ceci est dû à quelques problèmes rencontrés lors des
manipulations.
4
TP de Physiologie animale
IV.
Chateigner Aurélien
Interprétation des résultats et analyse des erreurs cumulées
Comme nous l’avons signalé précédemment, nous avons rencontré un certain nombre de
mésaventures pendant nos manipulations.
En effet, nous avons provoqué des pertes de sang, au cours de la pose des cathéters. En dégageant
les couches de muscles pour accéder à la carotide, nous avons provoqué une hémorragie,
possiblement due à la lésion de la jugulaire.
De plus, Une carotide a été sectionnée, à cause d’une erreur lors de l’introduction du cathéter,
provoquant de ce fait une forte hémorragie, limitée tant bien que mal par la pose d’une pince clamp.
Une dernière hémorragie, d’origine plus profonde et inconnue, est survenue lors de la 2ème tentative
de pose de cathéter carotidien (qui fut au final un succès).
Toutes ces maladresses ont fait perdre à notre rat une forte quantité de sang, le volume sanguin
mesuré par l’expérience est donc faussé, nos résultats étant inférieurs à ceux attendus. On aurait
théoriquement du trouver un volume de sang d’environ 30 mL. Il aurait fallu évaluer la quantité de
sang perdu lors des hémorragies pour s’approcher de la valeur réelle.
Nos résultats nous conduisent à un volume sanguin restreint (16,21 mL), on suppose donc que l’on a
perdu entre 10 mL et 20 mL de sang, au cours de notre expérience.
Des erreurs peuvent également survenir lors de l’injection du colorant. En effet, on injecte un volume
très faible, ce qui augmente le pourcentage d’erreurs possible, en relation avec la précision du
matériel utilisé. Cependant, en manipulant avec précision, on peut rendre ce quasiment nul.
On peut également imputer des erreurs à l’établissement de la gamme étalon, les dilutions ayant été
faites en cascade, si la première était faussée (erreur de pipetage par exemple), toutes les autres
l’étaient aussi. Le matériel utilisé (micropipette) étant précis, il permet, à conditions de manipuler
correctement, d’être confiant par rapport à la précision des dilutions effectuées. On constate une
bonne qualité de la gamme étalon, le coefficient de détermination R2 (mise en évidence du taux
d’erreur) étant quasiment égal à 1 (voir courbe étalon).
V.
Conclusion
Ce TP nous a permis de déterminer le volume sanguin restant après les hémorragies. On a donc pu
déterminer la masse sanguine correspondante, malheureusement, on ne peut pas déterminer la
masse réelle, à cause des différents problèmes rencontrés.
Pour conclure sur la méthode employée, on peut dire qu’elle peut s’avérer très intéressante et
précise, dans le cas d’une manipulation parfaite (sans hémorragies). On ne pourrait pas obtenir de si
bons résultats en « saignant » l’animal, car une partie du sang resterait dans les vaisseaux sanguins.
En effet, le produit diffusant dans tout le système vasculaire, on peut en déduire avec précision le
volume total de sang, grâce à la dilution effective. Le temps de diffusion étant assez court, on limite
également l’élimination rénale, qui pourrait fausser les résultats dans le cas d’une diffusion plus
longue.
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Certains aspects sont peu clairs. Tout graphique (courbes) doit porter des titres pour l’abscisse et
l’ordonnée.
Etude de la Diurèse osmotique
VI.
Introduction
L’objectif de ce TP est d’étudier les effets de l’adjonction de liquide physiologique (NaCl 0.9%) d’une
part, et une solution de mannitol (10%) d’autre part, dans le liquide plasmatique via la veine
jugulaire, sur la diurèse.
Ces effets seront comparés à la diurèse du rat dans les conditions basales à travers la première
expérience qui nous servira de témoin.
L’injection doit être pratiquée dans une veine où la solution inoculée se mélangera rapidement avec
le sang circulant.
De plus, il existe un lien fonctionnel entre la circulation sanguine et le rein.
Au niveau du glomérule, un très grand volume de liquide est filtré à partir du sang (taux de filtration
glomérulaire = TGF) dans le tubule (urine primitive) et contient, outre l’eau, les petites molécules du
plasma. Par la suite, au niveau du tubule et du tube collecteur, les constituants de l’urine primitive
retournent dans le sang à travers la paroi du tubule (réabsorption), et ce, dans des proportions
différentes selon la substance (par exemple urée<<glucose) et en quantité variable pour la même
substance selon les besoins (régulation). Le reste du filtrat est éliminé avec l’urine (excrétion).
L’influence du taux d’hormone antidiurétique (ADH) ou vasopressine dans le plasma ne sera pas
abordée au cours de ce T.P. Il faut tout de même préciser que cette hormone a un rôle de régulation
très important dans la diurèse en agissant sur la perméabilité du tube collecteur. Cependant, les
effets intervenant après un temps assez long, nous ne les avons pas vus au cours de ce T.P..
VII. Expériences et interprétations
A.
Conditions basales
Après avoir ligaturé les voies naturelles afin d’éviter les pertes d’urine par le canal
excréteur (l’uretère), on recueille l’urine dans une pipette de 2 mL grâce à un cathéter introduit dans
la vessie et relié à cette pipette.
On mesure ainsi le volume d’excrétion d’urine en fonction du temps.
Les interprétations des expériences suivantes seront établies à partir des résultats obtenus dans ces
conditions basales (expérience témoin).
1.
Observations
On constate que l’urine monte lentement dans la pipette avec un débit relativement faible qui est
d’environ 0.002mL par minute en moyenne. Ceci correspond aux conditions basales du
fonctionnement du rein.
6
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2.
Interprétation
L’urine est élaborée en deux temps : le plasma sanguin est tout d’abord filtré au niveau du
glomérule, ceci aboutit à la formation d’un gros volume que l’on appelle urine primaire, et dont la
composition est très différente de l’urine définitive.
Lors d’une seconde étape, l’urine primitive est récupérée par le tubule qui fait suite au glomérule et
en réduit considérablement le volume, tout en modifiant la composition chimique. Le tubule rénal
réalise un énorme effort de concentration via différents segments cellulaires, du tube contourné
proximal au tube collecteur.
Au final, près de 99% de l’eau ainsi que des électrolytes contenus dans l’urine sont réabsorbés : cela
aboutit à l’excrétion de l’urine définitive.
Tout ceci pour expliquer l’efficacité du rein dans les conditions basales qui produit un volume très
faible d’urine ; justifiant l’injection d’un liquide physiologique qui a pour effet d’augmenter la
diurèse.
B.
Injection du liquide physiologique
On injecte une solution de liquide physiologique contenant du chlorure de sodium à 0.9% dans la
veine jugulaire et on recueille à nouveau l’urine dans une pipette de la même manière que
précédemment.
1.
Observations
En comparaison avec les résultats obtenus dans les conditions basales, on constate après injection
d’un sérum physiologique, une augmentation de la production d’urine avec un débit plus élevé qui
est d’environ 0.015mL par minute.
Volume
Volume diurétique
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
Volume diurétique
0.2
Log. (Volume diurétique)
0.15
0.1
0.05
0
-0.05
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
temps en
minutes
7
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Variations du Volume émis
Débit
0.035
0.03
0.025
0.02
Variations du Volume émis
0.015
2 per. Mov. Avg. (Variations
du Volume émis)
0.01
0.005
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
temps en
minutes
Interprétation :
Expliquez
que
la
filtration
glomérulai
re
est
augmenté
e, dû à
l’augment
ation de la
pression
artérielle
L’adjonction de 3 mL de ce liquide physiologique qui est un liquide iso-osmotique, au plasma (partie
liquide du sang dans lequel baignent les cellules sanguines) va avoir pour conséquence une
augmentation de la volémie (volume plasmatique) qui va se traduire par un effet quasi immédiat :
augmentation de la diurèse. On passe d’un débit de 0.002 mL par minute dans les conditions basales
à un débit de 0.015 mL par minute en moyenne après injection du liquide physiologique. En effet,
l’augmentation de la volémie entraine le passage de l’eau du secteur plasmatique vers le secteur
intracellulaire (tube collecteur). L’état final se caractérise par un nouvel équilibre réalisé par ce
transfert d’eau entre les deux compartiments : l’excès d’eau est facilement éliminé sous forme
d’urine diluée par le rein.
A noter que l’augmentation du volume plasmatique, c'est-à-dire la volémie, est détectée par des
volorécepteurs aboutissant à une élévation de la diurèse. On parle alors de diurèse volumique.
Toutefois, si le système rénal est défaillant, on peut observer une véritable « intoxication » par l’eau
avec des veines qui sont engorgées et la formation d’œdèmes.
C.
Effet du mannitol
Pour cette dernière expérience, l’influence du mannitol sur la diurèse du rat sera étudiée.
On procède de la même manière, en injectant toujours dans la veine jugulaire, mais cette fois-ci, il
s’agit d’une solution de mannitol à 10% et d’un volume de 3 mL.
1.
Observations
Il apparaît clairement que la solution de mannitol est un puissant diurétique étant donné que la
production d’urine a considérablement augmenté au regard des conditions basales.
On observe une élévation du débit de la production d’urine jusqu’à un pic qui a lieu environ 11
minutes après injection. Le débit maximum est alors d’environ 0.7 mL par minute, ce qui correspond
8
TP de Physiologie animale
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à un facteur 350 entre la diurèse dans les conditions basales et celle observée après injection de
mannitol. Après ce pic, on constate une diminution du débit urinaire mais ce débit reste toutefois
supérieur à celui obtenu dans les conditions basales.
Volume diurétique
1.4
1.2
1
0.8
Volume diurétique
0.6
2 per. Mov. Avg. (Volume
diurétique)
0.4
0.2
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Variation du Volume diurétique
0.8
0.7
0.6
0.5
Variation du Volume
diurétique
0.4
2 per. Mov. Avg. (Variation
du Volume diurétique)
0.3
0.2
0.1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Notre 2ème injection nous a permis de confirmer les résultats de notre première, en apportant
toutefois quelques bémols.
9
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Volume diurétique
2.5
2
1.5
Volume diurétique
1
Log. (Volume diurétique)
0.5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
-0.5
Variation du Volume Diurétique
0.35
0.3
0.25
Variation du Volume
Diurétique
0.2
0.15
2 per. Mov. Avg. (Variation
du Volume Diurétique)
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Les résultats obtenus suite à cette 2ème injection, identique à la première, nous montre quelques
différences avec la première. En effet, alors que la première nous montrait un facteur 350 entre la
diurèse normale et celle après injection du mannitol, nous ne rencontrons plus qu’un facteur 150
(environ 0,3 contre 0,002 de base). De plus, la diurèse maximale est vite atteinte, dès la 2 ème minute.
Ces différences peuvent être dues à l’accumulation de mannitol dans le sang et la déshydratation du
sujet.
2.
Interprétation
Le mannitol est une molécule filtrée mais non réabsorbée car il ne possède pas de transporteurs
nécessaires à sa recapture. Le mannitol va être filtré, il va entrer dans le tube rénal ; l’urine primaire
est alors osmotiquement très forte, ce qui limite la réabsorption d’eau hors du néphron. Il s’agit par
10
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conséquent d’une diurèse osmotique (avec toujours une diurèse volumique puisque l’on a introduit
de l’eau).
La diminution du débit urinaire que l’on observe après le pic est due à l’élimination du mannitol par
le rein au cours du temps, étant donné que celui-ci n’est pas réabsorbé ; par conséquent l’urine
primaire va voir son osmolarité chuter progressivement.
En outre, des osmorécepteurs vont être excités par la solution de mannitol qui est osmotiquement
chargée ; ils vont entrainer la libération d’une hormone produite par l’hypothalamus : l’ADH ou
vasopressine qui joue un rôle dans la modulation de la diurèse.
Cependant, l’effet de ces osmorécepteurs sur l’ADH n’est pas visible car la durée de l’expérience est
trop courte pour que l’on puisse observer la « mise en place » de cette hormone.
VIII. Conclusion et discussions
Nous avons donc pu, au cours de ce TP, mettre en évidence les effets de l’injection de liquide
physiologique et de mannitol dans le corps d’un rat, sur la diurèse osmotique. L’augmentation nette
des taux d’excrétion entraine la conclusion que le mannitol est un diurétique osmotique, que l’on
peut différencier de l’excrétion due à l’injection de liquide physiologique, seulement due au
changement de volume de liquide dans le corps du sujet, et donc appelée diurèse volumique.
De plus, les débits moyens sont très différents suivant l’injection. Quand le débit normal est de 0,002
mL.min-1, la diurèse volumique l’augmente ici à une valeur moyenne de 0,015 mL.min-1, alors que la
diurèse osmotique pousse cette valeur moyenne jusqu’à 0,085 mL.min-1. La différence entre ces
valeurs est due au fait que dans le cas de la diurèse volumique, seul le volume injecté est sensé
ressortir rapidement, et donc les 3 mL injectés seulement. Dans le cas de la diurèse osmotique, c’est
tout le liquide intracorporel qui entre en jeu, étant donné que c’est l’osmolarité de toutes les cellules
réceptrices qui change. Le volume excrété doit donc être supérieur.
On aurait pu pousser l’expérience à des volumes de liquide physiologique injectés plus grands, pour
voir si l’on pouvait atteindre les débits de la diurèse osmotique. On aurait aussi pu faire durer
l’expérience plus longtemps, pour atteindre l’effet de l’ADH, et étudier les corrections hormonales.
Enfin, il est possible que nos résultats ne soient pas optimaux, étant donné les erreurs de
manipulations rencontrées, comme des pertes de sang, des mauvais placements de cathéters dans
les veines ou dans la vessie, les différentes fuites et autres pertes quelconques.
Pour finir, voici un schéma de synthèse expliquant les résultats obtenus :
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Injection de liquide physiologique
Injection de Mannitol
Circulation sanguine
Filtration
absorption
excrétion
Néphron
Excrétion
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Etude de la pression artérielle chez le
rat
Introduction
La pression sanguine représente une force physique exercée par le sang sur la paroi des vaisseaux. En
effet, le sang propulsé par le cœur suite à une contraction du ventricule gauche, circule sous pression
dans l’organisme comme dans un circuit fermé.
Pour son écoulement, le sang circule toujours des zones de haute pression (système artériel) vers les
zones de basse pression (système veineux). Pour notre manipulation, nous considèrerons la pression
artérielle au niveau de la carotide.
Le sang doit circuler uniformément de la tête aux pieds pour assurer un bon fonctionnement des
organes. Pour éviter l’évanouissement de la personne qui bondit hors du lit le matin, le cœur, les
vaisseaux sanguins et les reins doivent interagir de façon précise, sous la surveillance étroite de
l’encéphale. Parmi les mécanismes homéostatiques qui régissent la dynamique cardiovasculaire,
ceux qui maintiennent la pression sanguine, et en particulier ceux qui concernent le débit cardiaque,
la résistance périphérique et le volume sanguin, sont d’une grande importance.
Le dispositif expérimental est constitué d’un capteur que l’on disposera au niveau de l’artère carotide
et d’un logiciel informatique permettant la transcription graphique des informations recueillies.
Dans un premier temps, nous nous efforcerons de définir le phénomène de pression artérielle par
l’intermédiaire d’observations en conditions normales. Puis, en influant sur le système nerveux, nous
tendrons à mettre en évidence la voie nerveuse de régulation de cette constante.
Nous avons donc ouvert un rat, auquel nous avons cathéterisé la carotide, de façon à ce que, avec un
capteur approprié et un système Exao, nous puissions mesurer la pression artérielle. Nous avons de
plus mis en place un cathéter dans une veine jugulaire, de façon à pouvoir facilement injecter
différentes substances au rat. Enfin, nous avons isolé les nerfs pneumogastriques, pour pouvoir leur
appliquer différents types de stimulations.
Expériences
Etude de la pression artérielle normale
Résultats
Voir les graphiques : « Enregistrement de la pression artérielle basale, sans stimulation » et
« Agrandissement du premier enregistrement »
Oscillation de premier ordre
Fréquence : 333 battements par minute ; Amplitude : 0,5 mV (unité arbitraire)
13
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Chateigner Aurélien
Chez le rat, on sait que la fréquence cardiaque est d’environ 300 battements par minute, on peut
donc associer ces 2 phénomènes et dire que ces oscillations sont d’origine cardiaque.
Oscillation de 2ème ordre
Fréquence : 50 respirations par minute ; Amplitude : 1,04 mV
De la même manière que précédemment, on associe ces oscillations au mouvement respiratoire,
sachant que la valeur théorique est d’environ 80 respirations par minutes.
Oscillation de 3ème ordre
Fréquence : 2,7 contractions par minutes
Interprétations
Oscillations respiratoires
Le processus de respiration induit des changements de pression artérielle. Il s’agit d’augmentation
lors de l’inspiration et d’une diminution lors de l’expiration.
Facteurs mécaniques
Au niveau thoracique
Pour comprendre le lien entre respiration et pression artérielle nous devons considérer la notion de
retour veineux dont les fluctuations sont dépendantes des variations de pression intra thoraciques.
A l’inspiration, sous l’activité des muscles intercostaux, la cage thoracique s’élargit entrainant ainsi le
gonflement des poumons par aspiration d’air. Dans ce cas la pression intra thoracique diminue et le
sang, tout comme l’air dans les poumons, est aspiré par le cœur. L’augmentation du retour veineux
induit donc une augmentation du volume d’éjection systolique et par une augmentation du débit
cardiaque, une augmentation de pression artérielle.
A l’expiration, la pression intra thoracique augmente. On observera alors une baisse du retour
veineux, et donc par le même procédé que précédemment une baisse de la pression artérielle.
Facteurs nerveux
Lien centre inspiratoire et centre cardiomodérateur
Le mouvement d’inspiration est un mouvement réflexe induit par une voie nerveuse (induction des
mécanismes mis en évidence précédemment). Comme le mécanisme d’inspiration provoque une
augmentation de la pression artérielle, on peut penser que la stimulation du centre inspiratoire
induit une inhibition du centre cardiomodérateur.
Lien centre respiratoire et centre vasomoteur
On peut influer sur la pression artérielle en modifiant le diamètre des vaisseaux sanguins. Une
vasoconstriction permettant une augmentation de la pression artérielle, une vasodilatation, une
diminution. Le centre vasomoteur régit ces changements de conformation vasculaire. Sa stimulation
réduit le diamètre vasculaire et inversement. A l’inspiration par exemple, on peut donc supposer que
le centre vasomoteur se trouve stimulé par celui dit centre inspiratoire et donc créé une
augmentation de pression.
14
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Cependant, l’influence de ces 2 centres est relativement faible.
Oscillations cardiaques
Le cœur est un organe contractile. Son activité est faite d’alternance de phases de systole et de
phases de diastole. Les variations de pression artérielle observées sont directement liées à ces deux
phases.
La systole
La contraction du muscle cardiaque induit l’éjection brutale du sang du cœur vers le système artériel.
Cette éjection crée une tension sur la paroi des artères soit par définition, une augmentation de la
pression artérielle. Plus précisément il s’agit d’une distension de la paroi artérielle locale pendant
l’éjection ventriculaire. A cet instant, le sang est entré plus vite qu’il ne peut en ressortir et ce à cause
de la résistance à l’écoulement.
La diastole
Il s’agit de la phase de relâchement du muscle cardiaque. Le cœur se remplit du sang venant des
veines sans éjection. Les artères se rétractent en opposition à la phase de systole, pour permettent
l’écoulement sanguin. En résumé, pendant la phase de diastole, les artères ne reçoivent plus de sang
mais poursuivent son écoulement. La perte du volume sanguin occasionnée dans les artères sous
l’effet élastique des parois artérielles induit une diminution de la pression artérielle.
Oscillations d’origine vasculaire
Les vaisseaux sont dotés d’une propriété contractile. Le tonus vasculaire basal est régit par le
système nerveux sympathique, qui l’influe par une activité vasoconstrictrice. La contraction des
parois vasculaires crée une tension par pression sur le sang.
Notion de régulation
La pression artérielle comme nous l’avons précédemment démontré est une résultante mécanique
directe des fonctions cardiaque, vasculaire et respiratoire. Ces trois paramètres sont soumis à des
variations significatives lors de l’effort physique par exemple. Cependant, il est essentiel que les
valeurs de pression artérielle soient maintenues autour d’une constante. Par ces considérations, il est
alors possible de penser que la régulation de la pression artérielle dépend de ces composantes.
La dépendance du maintien de la pression artérielle aux composantes vasculaire et cardiaque
(fréquence cardiaque) se manifeste tel que ;
PA = Dc x Rp
Dc = Vs x Fc
(PA : pression artérielle, Dc : débit cardiaque, Rp : résistance périphérique, Vs : volume systolique,
Fc : fréquence cardiaque)
Phénomène mécanique
La composante respiratoire intervient dans l’homéostasie de la pression artérielle en raison de son
implication directe avec les concentrations en O2 et CO2 sanguine. (La fonction respiratoire (apport)
15
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
comme la fonction cardiaque (distribution) assure le maintien de ces concentrations sur l’ensemble
de l’organisme).
Phénomène chimique
-
La pression artérielle est un stimulus du rythme cardiaque et est physiquement ressentie par
des barorécepteurs. La stimulation de tels récepteurs crée un influx nerveux sensoriel,
véhiculé par le nerf de Cyon (fibres de la crosse aortique) et le nerf de Hering (fibres du sinus
carotidien).
-
La pression artérielle est un stimulus de la vasomotricité. Les fluctuations de pression
sanguine sont transmises au centre vasomoteur par l’intermédiaire de barorécepteurs pour
induire une vasoconstriction ou une dilatation (vasomotricité et cardiomotricité sont en lien
étroit)
-
La respiration est un stimulus de la pression artérielle. La respiration (hyper et
hypoventilation) impose des fluctuations de concentration sanguine en O2 et CO2, captées
par des chémorécepteurs. En effet, l’air inspiré est un apport en dioxygène, transmis à la
circulation sanguine par diffusion alvéole/capillaires. Situés à proximité des barorécepteurs,
ces récepteurs chimiques communiquent par l’intermédiaire des mêmes branches nerveuse
à savoir nerf de Cyon et Hering.
Le mécanisme de maintien de la pression sanguine est dicté par l’activité de baro et chimiorécepteurs
présents au niveau de la crosse aortique et du sinus carotidien.
Stimulations nerveuses du nerf pneumogastrique :
Stimulation du bout central
Voir le graphique : « Enregistrement de la stimulation du bout central du nerf X »
Résultats
Sur le graphique, on distingue une différence entre avant et après la stimulation :
16
TP de Physiologie animale
-
Chateigner Aurélien
Avant la stimulation : fréquence cardiaque = 288 battements/min
Après la stimulation : fréquence cardiaque = 264 battements/min
Interprétation
La stimulation du bout central provoque une excitation des fibres sensitives afférentes du nerf
vague ; cela se traduit par la propagation d’un influx nerveux excitateur qui se dirige vers le centre
bulbaire cardiomodérateur et d’un influx inhibiteur vers le centre cardio-vasculaire. Il y a donc
activation du système qui permet la diminution de la fréquence cardiaque et désactivation du
système effectuant la fonction opposée. On aura donc finalement un ralentissement de la fréquence
cardiaque comme cela nous apparaît sur le graphique.
De plus, la fréquence respiratoire chute, et on a noté une désorganisation de ces respirations. Il y a
donc une diminution de l’activité de la pompe respiratoire, ce qui entraine une diminution du retour
veineux, et donc une diminution du volume systolique, ce qui entraine la diminution du débit
cardiaque. On a donc inhibé les centres respiratoires, par la même façon.
Stimulation du bout périphérique
Voir le graphique : « Enregistrement de la stimulation du bout périphérique du nerf X ».
Résultats
Avant la stimulation : fréquence cardiaque = 276 battements par minutes
A de faibles intensités de stimulation (inférieures à 7 V) la réponse attendue (chute de tension) est
peu significative.
A partir de 7 V de tension de stimulation, on observe une importante chute de fréquence cardiaque
et donc de la pression artérielle.
Après stimulation (7 V pendant 2 s) : on note l’effondrement de la pression artérielle, ainsi que du
volume respiratoire. C’est l’arrêt cardiaque. Il mène à la mort de l’animal. On peut revenir à la
normale grâce à un massage cardiaque en cas d’arrêt, mais il revient de lui-même à la normale à
l’arrêt de la stimulation.
Interprétations
Dans ce cas, il n’y a plus de contrôle des centres nerveux sur la réponse apportée par le nerf
pneumogastrique à la pompe cardiaque. Nous pouvons penser de part les résultats précédents, que
la réponse à la stimulation du bout central entraine un influx efférent moteur plus modéré qu’il ne
devrait. En effet, les centres nerveux bulbaires et cérébraux n’induisent pas la mort de l’animal mais
régule l’activité pour qu’elle demeure à une activité basale. La stimulation de ces centres modifie
donc la fréquence cardiaque mais de façon plus modérée.
Dans ce cas de la stimulation périphérique, ce contrôle n’existe plus, et l’activité du cœur dépend
donc directement de l’influx porté par la branche motrice du nerf vague.
La stimulation entraine donc comme précédemment une diminution de la fréquence cardiaque mais
très brutale et très rapide : cela se traduit donc par une importante chute de la tension artérielle
traduisant la chute de la pression artérielle.
17
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
En revanche, contrairement à ce que nous pouvions penser quant à l’effet de la stimulation
prolongée, cela n’en est rien, cette surexcitation du nerf vague ne peut entrainer la mort du rat. En
effet, si la stimulation aboutit à un arrêt cardiaque, le système nerveux est rapidement « bloqué » et
la pompe cardiaque recouvre progressivement sa rythmicité de base. Ce phénomène n’est pas sous
contrôle nerveux mais est dû un épuisement physique de neurotransmetteur : le nerf vague est un
nerf parasympathique, transmettant son activité par l’intermédiaire d’un neurotransmetteur :
l’acétylcholine ; à chaque stimulation (physiologique ou électrique) une quantité de vésicules présynaptiques sont exocytées et libèrent de l’acétylcholine qui transmet l’influx nerveux à la cellule
post-synaptique (dans notre cas, ce sont des cellules cardiaques). Si la stimulation se prolonge, le
stock d’acétylcholine, lui, ne peut pas se renouveler et s’épuise, les cellules cardiaques ne reçoivent
plus l’influx inhibiteur et reprennent donc leur activité contractile, d’où notre observation d’un
retour à une fréquence cardiaque basale et non pas un arrêt cardiaque.
Section des 2 nerfs
Voir le graphique : « Enregistrement de la pression artérielle après bivagotomie de l’animal ».
Résultats
Après la section du second nerf de la dixième paire de nerfs crâniens, on observe une augmentation
progressive et continue de la pression artérielle
Interprétations
On peut donc proposer l’hypothèse que, de par le fait que le nerf moteur (effecteur) de la fonction
transmise par le système parasympathique soit sectionné, la pression artérielle n’est alors plus
régulée par les centres nerveux vasomoteur et bulbaire. La pression artérielle a donc
majoritairement tendance à augmenter lorsqu’elle n’est pas régulée. L’effet principal de la
régulation de la pression par les centres nerveux est globalement un rétrocontrôle négatif, cette
hypothèse est vérifiée par l’observation du graphique où l’on note que sans l’existence de ce
contrôle la pression artérielle augmente.
Occlusion de la carotide
Résultats
Nous n’avons pas de graphique illustrant cette expérience, puisque, suite à notre installation du
cathéter, la carotide canulée a été clampée durant toutes les expériences, néanmoins nous sommes
capables d’interpréter l’observation attendue.
Interprétation
La mise en place du clamp va stopper la circulation dans le sinus carotidien ; les barorécepteurs
présents à ce niveau vont percevoir ce changement de pression et vont transmettre un influx
nerveux portant l’information « diminution de la pression artérielle ». Le centre cardiovasculaire va
être excité tandis que le centre cardiomodérateur bulbaire sera lui inhibé : cela va conduire à un
message nerveux effecteur permettant de rehausser la pression artérielle. Comme l’animal est
bivagotomisé, l’influx ne passe plus dans le nerf vague, seul l’influx du système orthosympathique
sera transmis : on aura donc une augmentation de la fréquence cardiaque ainsi qu’une
vasoconstriction.
18
TP de Physiologie animale
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La pression étant en réalité « normale » dans tout l’organisme, nous pourrons alors voir s’établir une
hypertension vasculaire significative.
Analyse globale
Le cœur est comme la plupart des viscères, contrôlé par le système nerveux végétatif :
-
Le système parasympathique agit sur le cœur par le nerf pneumogastrique qui se détache du
bulbe rachidien
-
Le système sympathique agit sur le cœur et se détache de la moelle épinière dorsale.
Les nerfs de Hering et de Cyon transportent les informations des récepteurs sensibles à la variation
de la pression artérielle (barorécepteurs) vers le centre bulbaire.
Ce centre nerveux cardio-vasculaire perçoit les variations de la pression artérielle grâce aux
barorécepteurs et induit un retour à la normale, ce qui réadapte l’état d’excitation des
barorécepteurs.
Ce centre nerveux gère 2 types de réflexe : un réflexe cardiomodérateur, activé en cas
d’hypertension artérielle ; et un reflexe cardio-accélérateur en cas de diminution de la pression
artérielle.
Le réflexe cardiomodérateur agit pour corriger l’état d’hypertension. En effet, étant supérieur à la
normale, la valeur de la pression artérielle sera traduite par une augmentation de la fréquence de
potentiels d’action qui parcourent les nerfs de Cyon et de Hering. Au niveau du centre bulbaire, il y
aura alors activation du pneumogastrique et inhibition de la branche sympathique. Le résultat sera
une diminution de la fréquence du rythme cardiaque et par conséquent de la pression artérielle.
Dans le cas du réflexe cardio-accélérateur, l’organisme cherche à lutter contre un état
d’hypotension. En effet, cet état se traduit par une fréquence faible de potentiels d’action qui
parcourent les nerfs de Cyon et de Hering. Au niveau du bulbe rachidien, il y aura inhibition du
pneumogastrique et activation de la branche sympathique. Le résultat sera une accélération du
rythme cardiaque et une vasoconstriction et par conséquent une augmentation de la pression
artérielle.
Conclusion
Durant ce TP, nous avons étudié la définition de la pression artérielle (selon 3 types d’oscillations) et
sa régulation quasi exclusive par voie nerveuse.
Le cœur tient le rôle majeur dans l’exécution directe des changements de pression puisqu’il est la
pompe mécanique qui permet au sang de circuler dans les vaisseaux. Mais il n’en reste pas moins
qu’un acteur puisque les décisions concernant les changements de pression sont prises en amont,
dans les centres nerveux. La régulation est réalisée à partir d’un circuit fermé en perpétuel
fonctionnement ; celui-ci permettant au sang de circuler en parfaite harmonie dans les vaisseaux. Il
existe également une régulation hormonale (rapide ou retardée) mais nous ne la traitons pas dans
ce TP.
19
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
La connaissance approfondie des différents systèmes de régulation chez le rat est importante
puisque, étant un mammifère, certains résultats pourront être transposés chez l’Homme et peuvent
alors nous permettre d’avoir une meilleure compréhension de notre propre régulation. Cela peut
aboutir à l’étude de molécules pharmacologiques efficaces chez le rat et qui pourraient suivre les
étapes nécessaires au développement d’un médicament efficace chez l’Homme pour lutter contre
de nombreuses pathologies cardiaques comme les insuffisances cardiaques, les hypertensions etc.
20
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
15 : Bon travail. Revoyez une partie méthodes pour justifier les techniques employées
TP 5 : Etude de la respiration chez le rat
Introduction
L’objectif de ce TP est d’étudier 3 influences, qui ont un effet sur la rythmicité et l’amplitude de la
respiration. La première est le rôle du nerf pneumogastrique. La 2ème est l’action des ions
hydrogène. La 3ème est l’action du dioxyde de carbone.
Théoriquement, si l’on coupe le pneumogastrique, la personne respire, mais par l’activité autonome,
la régulation ne se fait plus, et elle ne sera donc plus régulée, la respiration sera lente et profonde,
car ces centres ont leur propre activité. Cette respiration est appelée respiration de double
vagotomie, qui met en évidence le fonctionnement des centres respiratoires. On va donc mettre en
évidence l’action de ce nerf en comparant les respirations avant et après section de ce nerfs, ou de
ces nerfs, étant donné qu’ils sont au nombre de 2. De par le fait que l’on doit léser les nerfs pour
mettre en évidence leur action, nous commencerons par l’action des ions hydrogène et du dioxyde
de carbone. Nous allons de plus enregistrer l’action de la stimulation de ces nerfs des deux côtés,
central et périphérique, et ainsi déterminer leur action propre.
En ce qui concerne les ions hydrogènes et le dioxyde de carbone, ils ne forment en fait qu’une seule
action. En effet, dans le sang, l’oxygène est transporté de 2 façons. Une petite partie est dissoute
dans le plasma, la plus grande partie étant transportée par liaison à l’hémoglobine. Le gaz
carbonique, quand à lui, est transporté dans le plasma sous forme d’ions bicarbonate dans sa plus
grande partie, alors qu’une petite partie est transportée dans les érythrocytes fixés à l’hémoglobine.
Le transport du dioxygène et celui du dioxyde de carbone ne sont pas en concurrence, les deux
molécules ne se fixant pas sur les mêmes sites de la molécule d’hémoglobine. Sous la forme d’ions
bicarbonates, le gaz carbonique ne peut pas diffuser du sang jusqu’aux alvéoles, et il doit donc
changer de forme. Pour cela, il doit se fixer à des ions hydrogène (H+), pour former l’acide
carbonique, qui se dissociera rapidement en eau et en gaz carbonique, ce dernier pouvant entrer
dans les alvéoles.
Donc les ions hydrogène et le dioxyde de carbone font partie d’une même action.
Un air enrichi en gaz carbonique est appelé hypercapnique, alors qu’un air appauvri en oxygène est
appelé hypoxique. Bien souvent, on rencontre ces deux termes dans les mêmes cas, si l’air qui arrive
vient d’un espace confiné, enrichi en gaz carbonique et appauvri en oxygène par la respiration. C’est
la respiration de cet air qui provoque le phénomène d’asphyxie. Il faut donc faire attention dans le
cas de manipulations dans ce genre d’air.
N.B. : Sur les feuilles annexes, le volume de la cage thoracique est mesuré en tension, mais on fera le
parallèle entre cette tension et le volume de la cage thoracique. En effet, les 2 unités étant ici
directement liées. On n’a cependant pas fait de calibrage, et donc on considèrera que 1 unité de
volume = 1 unité de tension.
21
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Expériences et interprétations
Etude de la respiration normale
Observations
Voir les feuilles annexes nommées :
-
« Etude de la respiration normale – Mise en évidence de la fréquence respiratoire et de la
durée des phases inspiratoire et expiratoire »
« Etude de la respiration normale – Mise en évidence de la fréquence respiratoire et de la
durée des phases inspiratoire et expiratoire – Zoom sur quelques phases respiratoires »
Pour mesurer la respiration normale de notre rat, nous avons placé une ceinture de pâte à modeler
sur la cage thoracique de l’animal, ceinture reliée à un capteur et une interface ExAO. Ce montage
nous a permis de mesurer les variations du volume de la cage thoracique, et en remettant ses
variations dans un graphique en fonction du temps, nous pouvons déterminer 2 choses : l’amplitude
et la fréquence des inspirations et des expirations.
Nous avons obtenu un graphique du même type que le suivant :
Volume
Temps
On peut à partir de ce genre de graphiques déterminer 2 phases dans la respiration, qui sont bien
distinctes, et complémentaires.
Volume
Temps
Inspiration
Expiration
22
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
La phase d’inspiration est la phase au cours de laquelle la chambre respiratoire augmente de volume.
C’est à ce moment que l’air entre dans les poumons, et que l’oxygène pénètre dans le corps. La
phase d’expiration est celle de diminution du volume de la chambre respiratoire, c’est au cours de
celle-ci que l’air est expulsé, que le dioxyde de carbone sort du corps.
On peut cependant, sur notre graphique de mesure, distinguer de petites variations, la plupart étant
visibles durant l’expiration.
Ces petites variations sont dues aux battements du cœur, le cœur étant enfermé dans la cage
thoracique, frappe en dessous de notre ceinture de mesure, et entrainant des variations parasites.
On a ici mesuré les amplitudes et fréquences (en inversant la période) de ces variations naturelles.
On obtient les mesures suivantes :
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Inspiration
50,4
4,1
Expiration
59,32
0,9
Cycle total
59,32
0,76
Convertissez en respirations par minutes
Interprétations
On note alors plusieurs différences. En effet, contrairement à ce qu’on attendait, l’amplitude de
l’inspiration et de l’expiration diffèrent. Cette différence est cependant une variation due à la mesure
expérimentale, sur sujet vivant, et donc de petites variations entre 2 cycles respiratoires peuvent
apparaître.
On remarque cependant que la fréquence des inspirations est beaucoup plus grande que celle des
expirations, ce qui veut dire que les inspirations sont beaucoup plus rapides que les expirations.
Cette différence de fréquence est due aux mécanismes de l’inspiration et de l’expiration. En effet,
l’inspiration normale est un phénomène actif, alors que l’expiration normale est un phénomène
passif. En effet, pour inspirer, le sujet contracte ses muscles inspiratoires, qui sont le diaphragme et
les muscles intercostaux externes. En les contractants, il augmente la hauteur de la cavité thoracique
(diaphragme) et le diamètre du thorax (muscles intercostaux externes). Les poumons étant
solidement fixés à la cage thoracique, grâce à la tension superficielle du liquide pleural, les poumons
s’étirent, en même temps que la cage thoracique. L’augmentation du volume de ces poumons
entraine une dépression intérieure, et la différence de pression avec l’extérieur fait entrer l’air dans
les poumons.
Contrairement à l’inspiration, l’expiration normale ne se fait que par relâchement des muscles, et
donc c’est un phénomène élastique. Le relâchement étant automatique, il se fait plus lentement que
23
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
la contraction, ce qui induit la lenteur de l’expiration. Cependant, ce phénomène peut être forcé par
la volonté de l’individu, et dans ce cas, le temps d’expiration peut être réduit.
Injection d’acide chlorhydrique
Observations
Voir la feuille annexe nommée : « Injection d’acide chlorhydrique – Mise en évidence de l’effet de
l’acide chlorhydrique sur la respiration »
Nous avons injecté rapidement dans la jugulaire un volume de 0,2 mL d’une solution de HCl à 0,1N.
Après l’injection (marqueur sur la feuille annexe), nous pouvons remarquer 2 effets : l’augmentation
de l’amplitude et l’augmentation de la fréquence (la période diminue). En effet, on a obtenu les
résultats présentés dans le tableau suivant :
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Avant injection
44,61
0,79
Après injection
55,18
0,84
Interprétations
La solution d’HCl permet d’apporter des ions H+ (hydrogène) dans le sang. Comme nous l’avons vu
précédemment, ces ions servent à complexer les ions bicarbonate, pour en faire de l’acide
carbonique, et au final le dissocier en eau et en gaz carbonique. L’adjonction d’ions H+ dans le sang
permet donc d’augmenter la concentration en gaz carbonique dans le sang. Ce fort taux de gaz
carbonique entraine un besoin d’expulsion de ce gaz en dehors du corps.
Pour cela, le système respiratoire met en place une hyperventilation, pour réduire l’hypercapnie, et
ainsi rétablir le taux normal de CO2 dans le sang. Ces variations du taux de CO2 sanguin, et donc la
diminution du pH stimulent les chimiorécepteurs centraux du tronc cérébral, l’amplitude et la
fréquence de la respiration augmentent.
En plus de cela, les ions Cl- participent au phénomène de Hamburger, ce qui permet un échange
facilité d’ions HCO3- (bicarbonate) entre les érythrocytes et le plasma.
N.B. : la diminution globale de la tension minimale de notre feuille annexe est certainement due à
notre système de ceinture en pâte à modeler, qui a dû glisser au cours des manipulations.
Augmentation de l’espace mort respiratoire
Observations
Voir feuille annexe nommée : « Augmentation de l’espace mort respiratoire – Mise en évidence de
l’effet de l’augmentation de l’espace mort respiratoire ».
L’espace mort respiratoire est un espace dans lequel l’air est appauvri en oxygène, et enrichi en
dioxyde de carbone. Cet espace permet de diminuer le renouvellement de l’air au niveau des
alvéoles pulmonaires, provoquant ainsi une hypercapnie et une hypoxie.
24
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Pour simuler l’augmentation de l’espace mort respiratoire, nous avons utilisé un tuyau d’une
longueur supérieure à la longueur normale des conduits supérieurs de la respiration, que nous avons
branché directement à la trachée, par un système de canulation après trachéotomie.
En branchant ce tuyau, nous observons une augmentation nette de l’amplitude et de la fréquence
des respirations, qui reviendront à la normale après retrait de cet espace mort respiratoire. On note
de plus la présence de pics respiratoires, d’amplitude largement supérieure à la normale.
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Avant augmentation de l’espace mort
52,99
0,83
Après augmentation de l’espace mort
109,02
1,12
Interprétations
L’augmentation de l’amplitude et de la fréquence des respirations est due, comme précédemment, à
l’augmentation du taux de CO2 dans le sang, et donc à sa baisse de pH. Les conclusions sont donc les
mêmes que précédemment.
Cependant, ici, le phénomène est plus fort, puisque le manque d’oxygène se fait lui aussi sentir, et
donc les chimiorécepteurs sont doublement alertés, la réponse est supérieure. On peut alors faire
l’hypothèse que si l’on avait laissé de sujet plus longtemps dans cet état, il aurait pu, après un certain
temps, réussir à contenir cet effet d’espace mort augmenté, en augmentant fréquence et amplitude.
Cependant, on peut aussi alors se poser la question des effets de ces hyperventilations sur la durée
de vie du système respiratoire. Cependant ici, nous avons retiré le tuyau au bout de quelques
dizaines de minutes, pour ne pas risquer l’asphyxie.
Une autre hypothèse peut être présentée à la vue de nos résultats : Les pics respiratoires enregistrés
peuvent être assimilés à des phénomènes de détresse respiratoire, des éléments de secours, dans le
cas de manque d’oxygène. On aurait pu les assimiler à l’hypothèse des bâillements, qui étaient
autrefois attribués au besoin d’augmenter le taux sanguin d’oxygène, et à la ventilation de toutes les
alvéoles pulmonaires.
Action de l’air confiné
Observations
Voir la feuille annexe nommée : « Action de l’air confiné – Mise en évidence de l’action de l’air
confiné sur la respiration »
Pour simuler l’action de l’air confiné, nous avons utilisé un ballon bien vidé de son air à la canule
trachéale. Nous observons alors une augmentation de la fréquence et de l’amplitude de la
respiration, entre le moment où l’on fixe le ballon, et celui où on l’enlève. Une fois que le ballon a été
enlevé, ces valeurs reviennent à leur valeur normale.
Encore une fois, nous remarquons des pics au cours de la respiration.
Nous regroupons les valeurs obtenues dans le tableau suivant :
25
TP de Physiologie animale
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Avant mise en place du ballon
38,46
0,78
Chateigner Aurélien
Après mise en place du ballon
128,7
0,99
Interprétations
Encore une fois, tous ces phénomènes s’expliquent de la même façon que précédemment. En effet,
en plaçant le ballon comme unique point de sortie de la respiration, et donc comme unique zone
d’échanges avec l’extérieur, le système respiratoire tourne en cycle fermé. Il n’y a alors plus de
renouvellement de l’air, et donc encore une fois, augmentation du taux de dioxyde de carbone et
diminution du taux d’oxygène dans le sang. Le pH diminue encore une fois.
Les chimiorécepteurs réagissent alors encore une fois, il y a de nouveau phénomène d’asphyxie. Ici,
on remarque que l’amplitude a presque été multipliée par quatre. La fréquence augmente aussi.
Encore une fois, on retrouve les pics de respiration, qui peuvent ici aussi être assimilé à des
phénomènes de détresse.
Ici cependant, même au bout d’un certain temps, il n’y aurait pas eu possibilité d’adaptation de la
respiration au ballon, contrairement à l’augmentation de l’espace mort. En effet, au bout d’un
certain temps, l’air aurait été intégralement rempli de dioxyde de carbone et vidé d’oxygène. Nous
avons donc retiré le ballon encore une fois pour éviter l’asphyxie. Les effets ont été ici plus rapides
est plus fort, en tout cas au niveau de l’amplitude. Nous étions encore une fois en hypercapnie et en
hypoxie.
Etude de la respiration après vagotomie bilatérale
Respiration normale
Observations
La vagotomie bilatérale consiste en une section des nerfs pneumogastriques des deux côtés. Nous
avons alors enregistré la respiration, après vagotomie bilatérale.
Voir feuille annexe nommée : « Etude de la respiration normale après vagotomie bilatérale – mis en
évidence des différences de la respiration normale, avant et après vagotomie »
Les résultats que nous obtenons ne sont cependant pas bons, en effet, nous aurions dû obtenir une
augmentation de l’amplitude et de la fréquence. Cependant ici, en comparaison aux résultats d’avant
vagotomie, notre amplitude de notre fréquence diminuent. Cette erreur est due au positionnement
du capteur, et à la faible fiabilité de la ceinture en pâte à modeler, qui s’est décrochée du capteur et
a dû être replacée.
Interprétations
Nos interprétations seront donc faites à partir des résultats que l’on aurait dû obtenir. En effet, les
nerfs pneumogastriques servent à ralentir la respiration. Lorsqu’ils sont sectionnés, ils ne ralentissent
plus la respiration, qui est alors plus ample et plus rapide.
Nous allons maintenant recommencer les expériences précédentes, alors que le nerf est coupé, et
ainsi déterminer si les mécanismes précédents dépendent de ce nerf ou pas.
26
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Injection d’acide chlorhydrique
Observations
Voir la feuille annexe nommée : « Injection d’acide chlorhydrique après vagotomie bilatérale – Mise
en évidence de l’effet de l’acide chlorhydrique sur la respiration après vagotomie bilatérale »
Encore une fois, nous pouvons noter l’effet de l’acide chlorhydrique, identique à celui présenté
précédemment, avant vagotomie bilatérale. En effet, nous obtenons les variations suivantes :
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Avant injection
38,6
0,61
Après injection
57,28
0,64
Nous avons donc de nouveau eu une augmentation de l’amplitude et de la fréquence, avec l’injection
d’acide chlorhydrique.
Interprétations
On peut en faire les mêmes interprétations que précédemment, et ajouter que si les effets sont les
mêmes avec ou sans nerf vague, c’est qu’il n’influence pas le trajet de l’acide chlorhydrique dans le
corps, et donc que ce serait plus un transport de l’information par la voie humorale.
Ou des informations nerveuses
transitant par d’autres voies. Mais
Augmentation de l’espace mort respiratoire
effectivement les chémorécepteurs
Observations
centraux sont ici en cause.
Voir feuille annexe nommée : « Augmentation de l’espace mort respiratoire après vagotomie
bilatérale – Mise en évidence de l’effet de l’augmentation de l’espace mort respiratoire après
vagotomie bilatérale »
Une fois encore, les résultats sont quasiment les mêmes que précédemment, l’augmentation de
l’espace mort respiratoire entraine une augmentation de l’amplitude et de la fréquence des
respirations.
En effet, on obtient les résultats suivants :
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Avant augmentation de l’espace mort
46,9
0,59
Après augmentation de l’espace mort
136,93
0,61
Encore une fois, on remarque que l’amplitude a fortement augmenté, triplant presque, et que de
plus, ici, nous obtenons un résultat plus dans les normes à obtenir, étant donné que notre effet met
quelques secondes à survenir.
Interprétations
Les interprétations sont les mêmes que précédemment, et encore une fois, l’augmentation de
l’espace mort, et ses effets sur le corps n’influent pas par voie nerveuse, le nerf étant coupé, et
l’action toujours présente. On favorisera alors la voie humorale. Cependant, on ne remarque plus les
pics dans la respiration, et donc ce système de secours dont on a fait l’hypothèse précédemment
dépend peut-être de la voie nerveuse.
27
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Action de l’air confiné
Observations
Voir la feuille annexe nommée : « Action de l’air confiné après vagotomie bilatérale – Mise en
évidence de l’action de l’air confiné sur la respiration après vagotomie bilatérale »
Ici encore, nos résultats ne diffèrent presque pas de ceux obtenus précédemment. En effet, l’action
de l’air confiné se fait rapidement sentir, et l’amplitude et la fréquence des respirations augmentent
encore cette fois. On atteint les valeurs suivantes :
Amplitude (mV)
Fréquence (s-1)
Avant mise en place du ballon
38,61
0,52
Après mise en place du ballon
99,1
0,68
On a encore une belle augmentation de l’amplitude, qui est multiplié par presque 3, et une petite
augmentation de la fréquence, de l’ordre des 24%.
Interprétations
Nos interprétations sont encore les mêmes qu’avant la section des nerfs, et donc encore une fois que
l’air confiné, comme l’augmentation de l’espace mort, utilisent la voir humorale et non nerveuse.
Encore ici, les pics de respiration ont disparu, et donc encore une fois, on pense qu’ils étaient dus à la
voie nerveuse.
Stimulation du nerf vague
Côté périphérique
Observations
Voir la feuille annexe nommée : « Stimulation du nerf vague du côté périphérique – Mise en évidence
des perturbations de l’activité respiratoire provoquées par les modifications de l’activité cardiaque »
On peut observer, à partir de nos graphiques, que si l’on stimule le nerf du côté périphérique (en le
plaçant sur des électrodes à crochets), on obtient une déstructuration du signal, les respirations se
font n’importe comment, on ne peut plus déterminer de phase d’inspiration, ou de phase
d’expiration, les 2 étant mélangées.
Interprétations
On peut donc en conclure que la partie périphérique du nerf pneumogastrique déstabilise la
respiration. Cette déstabilisation est due au contrôle de ce nerf sur la pression artérielle. En effet, le
nerf vague diminue la pression artérielle, et cette baisse de la pression artérielle est la cause des
perturbation, le sang n’arrivant plus en flux continu et stable, il arrive par à-coups, et donc déstabilise
totalement l’action respiratoire, le sang entrant dans les poumons irrégulièrement.
Côté central
Observations
Voir feuille annexe nommée : « Stimulation du nerf vague du côté central – Mise en évidence de
l’arrêt respiratoire en réponse à la stimulation des tensio-récepteurs pulmonaires »
28
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Ici, la stimulation entraine tout simplement un arrêt respiratoire, en inspiration, durant le temps où
on stimule le nerf du côté central, c'est-à-dire en direction du cerveau.
Volume
Arrêt respiratoire
Temps
Interprétations
En stimulant le nerf X du côté central, on stimule le cerveau, dont une partie, le groupe respiratoire
dorsal semble être le centre générateur du rythme respiratoire, et donc on l’a appelé centre
inspiratoire.
Ce centre, par l’intermédiaire de neurones, émet à fréquence progressive des influx aux nerfs
phrénique et intercostaux, qui stimulent les nerfs de l’inspiration. En cas de forte stimulation de ce
centre, comme c’est notre cas, les influx sont lancés en continu, les muscles inspiratoires restent
alors contractés, la respiration est bloquée en phase d’inspiration, et il y a arrêt respiratoire.
Conclusions et discussions
En conclusion, on a étudié les effets de l’acide chlorhydrique, d’une augmentation de l’espace mort,
et de l’air confiné sur la respiration dans 2 cas, en cas normal et en cas de vagotomie bilatérale. Ces
expériences nous ont permis d’étudier les 2 systèmes de régulation de la respiration, le système
humoral et le système nerveux.
On a étudié l’action du nerf pneumogastrique, et son rôle dans la respiration. On s’est aperçu qu’il
avait 2 actions, l’une étant de déstabiliser la respiration indirectement, et l’autre étant de provoquer
indirectement un arrêt respiratoire. On a de plus vu qu’il servait à ralentir la respiration en général,
en la rendant plus ample et plus lente.
Enfin, on a pu approcher le phénomène d’asphyxie, et on a obtenu quelques pistes sur les voies
utilisées par le corps pour éviter cette asphyxie.
Cependant, les résultats de notre TP ne sont pas absolus, notre système de mesure étant soumis aux
possibles erreurs obtenues à cause d’un décrochement de la pâte à modeler, ou son glissement, ou
des artefacts de manipulation.
Votre conclusion doit aller plus loin si possible. Ici, vous résumez le travail et indiquez les limites de
vos résultats, ou vous pouvez proposer des moyens pour améliorer les résultats expérimentaux.
29
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
TP 6 : Action de substances
pharmacodynamiques sur le cœur isolé
de grenouille
Généralités
Anatomie du cœur
Le rythme cardiaque est géré par son système de conduction intrinsèque. Cependant, les neurofibres
du système nerveux autonome peuvent influer sur le cœur, et donc modifier le rythme. Le système
nerveux sympathique est accélérateur, et augmente à la fois le rythme et la force du battement
cardiaque. A l’inverse, le système nerveux parasympathique sert à ralentir ces deux points. Le cœur
isolé de grenouille présente de faibles exigences quant aux conditions de température,
d’oxygénation et de perfusion. Il est facile d’obtenir sa survie pendant de nombreuses heures par
perfusion à l’aide du liquide de Ringer. Ceci vient du fait que la grenouille est poïkilotherme.
Sa base est plate et sur la face supérieure, alors que son apex en pointe se tourne vers le bas. Il est
enveloppé dans un sac à double paroi appelée péricarde. Il est composé de trois parties, deux
oreillettes et un seul ventricule dans lequel les 2 sangs se mélangent. Les deux oreillettes sont la
droite et la gauche. Si l’on regarde le cœur sur le côté, on peut trouver au-dessus du ventricule et
entre les deux oreillettes le bulbe artériel : il sert à la collecte du sang quand il est éjecté. Le cœur est
irrigué par deux conduits veineux qui forment le tronc aortique. On trouve aussi du côté dorsal le
sinus veineux, derrière l’oreillette droite, c’est la zone de collecte du sang veineux. On trouve
plusieurs feuillets d’automatisme, que sont le nœud de Remak (1), le nœud de Ludwig (2) (entre les
deux oreillettes), et le nœud de Bidder (3) (dans le ventricule).
Figure 1 : Schéma simplifié du cœur de grenouille
Aorte
1
2
Oreillette gauche
Bulbe
artériel
Oreillette droite
Ventricule unique
Sinus
veineux
situé en arrière de l’oreillette droite :
zone de collecte du sang qui va arriver
par les veines caves
3
Apex
Face
Côté
Veines caves
30
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
La régulation nerveuse
La régulation nerveuse se fait par le système nerveux autonome. Il existe des mécanismes
extrinsèques de régulation de la fréquence cardiaque, dont le système nerveux autonome fait partie,
et il en est le facteur le plus important. Le système nerveux sympathique peut être activé par des
facteurs émotionnels ou physiques. Par son activation, les neurofibres sympathiques libèrent de la
noradrénaline à leurs synapses cardiaques, qui se lie aux récepteurs adrénergiques β1. Le temps
d’atteinte du seuil d’excitation du nœud sinusal diminue alors, le nœud sinusal augmente la
fréquence de ses potentiels d’action et le cœur bat plus vite. Il y a aussi augmentation de la
contractilité en favorisant la pénétration de calcium dans les cellules contractiles, ce qui entraîne une
diminution du volume télésystolique. Cependant, le volume systolique ne diminue pas, alors qu’on
aurait pu le prévoir ainsi s’il ne se produisait qu’une augmentation de la fréquence cardiaque.
À l’inverse, l’antagoniste du système nerveux sympathique est le système nerveux parasympathique.
Il permet de réduire la fréquence cardiaque, une fois que les facteurs émotionnels et physiques sont
éliminés. En réponse à cette stimulation, ou plutôt cette fin de stimulation, de l’acétylcholine est
libérée dans le cœur, les membranes plasmiques sont alors hyperpolarisées, et ouvrent les canaux à
K+. L’activité parasympathique prédomine sur le cœur, grâce au frein vagal.
Nous pouvons alors nous demander que font d’autres substances telles que l’adrénaline,
l’acétylcholine ou l’atropine sur le cœur, quels sont leurs effets.
Expériences
Enregistrement normal : activité pace maker du cœur isolé.
Résultats expérimentaux
Voir les feuilles annexes nommées « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille dans
des conditions normales, en perfusion de liquide de Ringer » et « Mécanogramme ventriculaire du
cœur isolé de grenouille dans des conditions normales, en perfusion de liquide de Ringer – Zoom ».
Grâce à des mesures sur les graphiques, on obtient les valeurs suivantes :
Phase de Systole
Phase de Diastole
Fréquence (battements par minutes)
57,5
23,4
Amplitude (mV)
273,3
269,52
Durée
Analyse et interprétations
Pour obtenir ces résultats, nous avons fait un cardiogramme ventriculaire. Pour cela, nous avons fixé
le cœur à l’aide d’un tube en plastique, tenu pas un élastique sur un support. Par ce tube, nous avons
pu injecter les substances à tester. A l’apex, nous avions placé une pince, reliée à un capteur, et au
système Exao. Nous mesurions ainsi les contractions du ventricule. C’est ce qu’on appelle un
cardiogramme ventriculaire.
On observe une alternance de phase de contraction (systole ventriculaire) et de relâchement
(diastole ventriculaire) suivies de rebonds que l’on considérera comme des artéfacts ; ceci constitue
une révolution cardiaque : à la fin de la diastole ventriculaire, la dépolarisation du nœud sinusal
31
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
provoque la contraction des oreillettes, puis l’excitation atteint les ventricules. La pression
ventriculaire augmente et dépasse celle des oreillettes. Quand la pression est trop élevée, la valve du
ventricule s’ouvre et le sang est violement éjecté dans les crosses aortiques pour circuler dans tout
l’organisme ; à ce moment il y a raccourcissement des fibres musculaires, ce qui favorise l’expulsion
de la masse sanguine : c’est la systole. Le ventricule vient de se contracter et commence à se
relâcher, les valves aortiques se ferment : le sang ne peut plus entrer dans le ventricule ; c’est la
relaxation iso-volumétrique. Quand les oreillettes sont remplies, les valves auriculaires s’ouvrent et
le sang se déverse dans le ventricule, celui-ci se remplit donc à son tour progressivement ; lorsque
tout le sang a quitté les oreillettes, les valves auriculaires se ferment et on repasse à la systole ;
l’enchainement de ces 2 évènements constitue la révolution cardiaque.
Le cœur est un muscle strié possédant une activité rythmique autonome. Cette contraction
rythmique et spontanée est assurée par la présence de tissu nodal (cellules autorythmiques qui
déchargent des potentiels d’action de manière cyclique) au sein de cet organe : le nœud de Remak,
de Bidder, de Ludwig. Le cœur assure ainsi sa propre activité rythmique permettant la circulation
sanguine dans l’ensemble de l’organisme.
Cette première expérience nous servira de témoin pour voir les effets de substances
pharmacodynamiques. Elle met en évidence l’activité pace maker du cœur isolé.
Effet de l’adrénaline
Tout d’abord, l’adrénaline appartient au groupe des catécholamines, c'est-à-dire qu’elle possède un
cycle catéchol. L’adrénaline est sécrétée par les glandes médullosurrénales, à partir de résidu de
tyrosine, et elle affluera par l’intermédiaire de la circulation sanguine jusqu’aux récepteurs β-1
présents à la surface des cellules myocardiques. L’adrénaline est un neurotransmetteur du système
nerveux sympathique, il s’agit d’un agent neuro-hormonal.
Résultats expérimentaux :
Voir la courbe nommée « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille en perfusion
d’une solution d’adrénaline à 10-6 », « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille en
perfusion d’une solution d’adrénaline à 5.10-6 » et « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de
grenouille en perfusion d’une solution d’adrénaline à 10-5 ». Voir figure 1.
La première courbe ne présente pas de variation significative. Ces résultats signifient qu’une dose
trop minime a été injectée. La deuxième montre un léger effet, mais encore, il n’est pas significatif,
pour la même raison. La troisième présente quand à elle un léger effet chronotrope positif. Nous
utilisons cependant les résultats plus probants d’un autre groupe, de façon à illustrer tous les effets
de l’adrénaline. Ce graphique nous permet donc d’observer les effets de l’adrénaline, l’amplitude et
la fréquence augmentent après l’injection, enfin de façon significative. Les valeurs suivantes ont été
mesurées :
Injection
Amplitude (mV)
Période
(ms)
Fréquence
en s-1
Fréquence en min-1
avant
pendant
après
211,09
250,93
209,99
2926,63
2594,2
2641,82
0,34
0,39
0,38
20,50
23,13
22,71
32
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Figure 2 : Tracé montrant les effets de la perfusion d'une solution d'adrénaline à 10-6 M, sur l'activité cardiaque
Effets de l’adrénaline sur le cœur
Temps en
minutes
Amplitude
Analyse et interprétations :
L’adrénaline provoque une augmentation de fréquence et de force de
contraction du cœur isolé quelques secondes après l’injection de la
solution dans le ventricule. Par conséquent, l’adrénaline est un agent
inotrope positif.
Figure 3 : molécule d'adrénaline
L’effet de l’adrénaline augmente d’autant plus que sa concentration
est élevée, il s’agit de l’effet dose. Dans notre expérience, la valeur
seuil déclenchant l’effet est de 10-6 M.
L’adrénaline agit sur le cœur par l’intermédiaire des récepteurs β-1-adrénergiques présents à la
surface cellulaire. Ces récepteurs sont couplés à une protéine G trimérique stimulatrice qui agit via sa
sous-unité alpha sur l’activité de l’adénylate cyclase. La stimulation de l’adénylate cyclase, dont
l’activité est de transformer l’ATP en AMPc, revient à augmenter la concentration en AMPc
intracellulaire. S’en suit l’augmentation de l’activité de la protéine kinase A AMPc dépendante, qui
permettra la phosphorylation de canaux calciques, présents dans les membranes des cellules. Après
phosphorylation, ces canaux autorisent l’entrée de calcium (la fréquence d’ouverture est augmentée,
le temps d’ouverture diminué). De ce fait, la contraction musculaire calcium-dépendante se voit
facilitée et augmentée. Ceci explique l’effet inotrope positif. L’augmentation de la contractilité est
due à l’augmentation de l’entrée de calcium induite par les récepteurs β-1-adrénergiques, ce qui fait
monter la concentration du calcium dans le cytosol des cellules myocardiques.
De plus, l’adrénaline augmente la fréquence des impulsions du nœud sinusal : effet chronotrope
positif. L’augmentation de la pente du prépotentiel sous l’influence du système sympathique (et de
l’adrénaline) provient d’une augmentation de la conductance du calcium, g Ca, et d’une diminution
de la conductance du potassium, gK. Il y a de plus activation d’un courant IH, directement par l’AMPc,
responsable de la pente de dépolarisation diastolique.
33
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Ce canal (canal hyperpolarisant, appelé aussi canal HCN ou If) est responsable de l'activité
automatique des cellules pacemaker. Activé en hyperpolarisation (c'est à dire à la fin de la
repolarisation induite par le courant potassique), il laisse passer un courant entrant de nature mixte
(Na et K). Il a donc un effet dépolarisant. Il contrôle donc la variation de potentiel au niveau de la
valeur de potentiel la plus négative des cellules pacemaker (- 60 mV) en provoquant, dès la fin d'un
premier PA, la génération d'un autre (par l'initiation du début de la phase de dépolarisation
diastolique).
Au point de vue de sa régulation, il est contrôlé directement par l'AMPc (pas d'intervention de la
kinase A). En fait l'AMPc se fixe directement sur le canal. Quand le taux d'AMPc s'élève (sous l'action
de l'adrénaline), le courant IH est activé, aussi l'automatisme est stimulé (effet chronotrope positif).
Inversement, quand le taux d'AMPc diminue (sous l'action de l'Acétylcholine), le courant IH est
inhibe, aussi l'automatisme est réduit (effet chronotrope négatif, par diminution de la pente de
pente de dépolarisation diastolique).
Cependant, pour expliquer les effets chronotropes de l'adrénaline et de l'acétylcholine, il faut bien
voir que le canal IH n'est pas le seul affecté, il y a aussi le canal calcique et le canal potassique.
Effet de l’acétylcholine
Figure 4 : Molécule d'acétylcholine
L’acétylcholine est un neurotransmetteur majeur du système
nerveux périphérique. Dans la jonction neuromusculaire, les
fibres qui libèrent l’acétylcholine sont dites cholinergiques ;
en effet le cœur est innervé par le nerf vague qui appartient
au système nerveux parasympathique et dont le dernier
neurotransmetteur est l’acétylcholine.
Ce neurotransmetteur est synthétisé à partir de la choline et de l’acétylcoenzyme A dans le
cytoplasme des terminaisons pré-synaptiques, puis stockés dans des vésicules. Lors du TP, le cœur
est isolé de l’organisme et donc du système nerveux, la circulation de l’acétylcholine ne se fait donc
pas à travers des fentes synaptiques mais atteint le cœur par voie sanguine : l’acétylcholine n’a donc
plus le rôle de neurotransmetteur mais agit alors comme une hormone.
Suite à une stimulation, l’acétylcholine est libérée et va se fixer à son récepteur. On distingue 2 types
de récepteurs capables de l’accueillir :
-
les récepteurs nicotiniques : présents dans les cellules des muscles striés, dans le système
nerveux central.
-
Les récepteurs muscariniques présents dans les cellules des muscles lisses comme le cœur et
également dans le système nerveux central.
Résultats :
Voir la feuille annexe nommée « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille en
perfusion d’une solution d’acétylcholine à 5.10-7 ».
34
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
Les résultats n’étant pas quantifiables, on se contentera d’une description du tracé : après l’injection
de la solution d’acétylcholine à 5.10-7, on note que le cœur s’arrête. Ensuite, on note la présence
d’artefacts de manipulation, dus au massage cardiaque qui a été entrepris pour ramener le cœur en
activité. Ensuite, les contractions reprennent progressivement.
Analyse et interprétations :
On observe quelques secondes après le passage de la solution dans le ventricule, une chute
importante de l’amplitude de la contraction associée normalement à une diminution non négligeable
de la fréquence cardiaque, entrainant l’arrêt.
L’acétylcholine libérée par les fibres parasympathiques du nerf vague agit sur les récepteurs
muscarino-cholinergiques M2 (seule l’expérience avec l’adrénaline permettra de prouver
l’implication de ces récepteurs), et a un effet chronotrope négatif. La diminution de la pente du
prépotentiel (PP) et le potentiel diastolique maximal (PDM) négatif sous l’influence de l’acétylcholine
proviennent d’une augmentation de la conductance du potassium, gK.
De quelle façon
s’effectue
l’activation de
IK ; transduction
du signal non
précisée.
Lorsque la fréquence cardiaque est réduite, l’entrée de calcium par unité de temps est faible (peu de
potentiels d’action), ce qui offre relativement plus de temps pour la sortie de calcium. De ce fait, la
concentration cytosolique moyenne en calcium se trouve réduite, donc la contractilité reste
relativement diminuée. Par ce mécanisme, l’acétylcholine exerce une action inotrope négative.
Vous n’expliquez pas l’effet chronotrope négatif de l’acétylcholine
Effet de l’atropine :
Résultats :
Voir la feuille annexe nommée « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille en
perfusion de liquide de Ringer additionné d’atropine » : On observe une activité de type normal, peu
de variation, que ce soit au niveau de l’amplitude que de la fréquence.
Voir la feuille annexe nommée « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille en
perfusion de liquide de Ringer contenant de l’acétylcholine à 5.10-7 » : On ne note pas de variation,
même avec une valeur seuil d’acétylcholine.
Voir la feuille annexe nommée « Mécanogramme ventriculaire du cœur isolé de grenouille en
perfusion de liquide de Ringer contenant de l’adrénaline 10-5 »
Injection
Amplitude (mV)
Fréquence (Hz)
Avant
696,97
3,63
Après
1393,94
2,63
On note une fréquence qui diminue plutôt que d’augmenter. Cette erreur est due aux imprécisions
de mesure.
Analyse et interprétations :
La perfusion d’atropine pendant 5 minutes n’a aucun effet visible sur l’activité du cœur. En effet,
l’action de l’atropine est révélée seulement au moment de la perfusion de l’acétylcholine, puisque la
rythmicité cardiaque reste basale même après passage de l’acétylcholine. On ne constate donc
aucune inhibition de l’activité cardiaque ; l’atropine s’oppose aux actions de l’acétylcholine sur les
récepteurs muscariniques. L’atropine n’empêche pas la libération de l’acétylcholine mais agit en se
35
TP de Physiologie animale
Chateigner Aurélien
combinant aux récepteurs cholinergiques : cette substance pharmacologique présente donc un
pouvoir antagoniste envers l’acétylcholine.
En outre, nous pouvons affirmer que l’atropine agit spécifiquement sur les récepteurs
cholinergiques. En effet, quelques minutes après le passage de l’acétylcholine, nous avons perfusé le
cœur avec la solution d’adrénaline dont la concentration est celle de la valeur seuil déclenchant un
effet ; le résultat est immédiat : l’amplitude et la fréquence augmentent de la même manière que
l’expérience sans atropine. Par conséquent, on peut en déduire que l’atropine est un antagoniste
spécifique des récepteurs cholinergiques muscariniques.
Enfin, même si cela n’apparaît pas sur notre graphique, nous savons que l’effet de l’adrénaline en
présence d’atropine est supérieur à ce qui était observé préalablement en adrénaline seule. Ce
phénomène peut être expliqué par la rupture de « l’équilibre » entre les effets du système
parasympathique et ceux du système sympathique ; ces derniers étant favorisés lorsque l’atropine
est présente, puisque l’on sait désormais qu’il s’agit d’une substance qui présente un pouvoir
antagoniste envers l’acétylcholine.
Conclusion
C’est donc à travers ces quelques expériences que nous avons pu mettre en évidence certains
mécanismes de régulation du rythme cardiaque. Nous n’allons pas ici faire un résumé des
conclusions de chaque expérience, mais projeter nos expériences et voir plus loin, déterminer l’utilité
de ces connaissances dans le cas de pathologies.
Dans le cas de maladies de type Arythmiques, c'est-à-dire des troubles du rythme cardiaque, on peut
utiliser deux types de médicaments, en fonction de la modification du rythme. Dans le cas d’un
rythme trop rapide (Tachycardie), on utilise des β-bloquants, des sédatifs ou des tranquillisants. Les
β-bloquants empêchent la fixation de l’adrénaline, et donc son effet inotrope et chronotrope positif,
le rythme cardiaque diminue. Dans le cas de bradycardie (rythme trop rapide), on utilise des dérivés
atropiniques, antagonistes de l’acétylcholine, et donc répresseurs de l’activité inotrope et
chronotrope négative, le rythme peut alors remonter.
En cas d’insuffisance cardiaque, on utilise principalement des tonicardiaques (digitaline, ouabaïne) et
de diurétiques, mais on peut aussi utiliser des dérivés nitrés ou des inhibiteurs de l’enzyme de
conversion.
En cas d’hypertension artérielle, on utilise encore une fois les diurétiques, mais aussi les β-bloquants,
des inhibiteurs calciques. Dans tous ces cas, ils s’opposent à l’action de l’adrénaline, et permettent
de réduire le rythme cardiaque, d’éviter que le problème ne s’aggrave.
Enfin, dans le cas des angines de poitrine, les dérivés nitrés, les inhibiteurs calciques et les
digitaliques sont les médicaments les plus répandus.
On voit alors l’utilité de tests tels que les nôtres sur un cœur, de grenouille ou humain.
Il aurait été judicieux de fournir un schéma de synthèse
36