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Plateau technique d’imagerie cellulaire du CPTP-Purpan
Sophie Allart - [email protected] – Astrid Canivet – [email protected]
Tél : 05. 62. 74. 45. 78
05. 31. 54. 79. 01
Plateau technique d'imagerie
cellulaire du CPTP-Purpan
Juillet 2013
Mode d'emploi
Microscope Apotome Zeiss

Plateau technique d’imagerie cellulaire du CPTP-Purpan
Sophie Allart - [email protected] – Astrid Canivet – [email protected]
Tél : 05. 62. 74. 45. 78
05. 31. 54. 79. 01
Composition du système
Type de microscope Zeiss Axio-observer (statif inversé)
Type de Brûleur HXP 120
Shutter de fluorescence Obturateur de la lampe
Filtres de fluorescence présents
VERT 38 HE eGFP shift free
EX BP 470/40, BS FT 495, EM BP 525/50
ROUGE 43 HE Cy 3 shift free
EX BP 550/25, BS FT 570, EM BP 605/70
DAPI 49 DAPI shift free
EX G 365, BS FT 395, EM BP 445/50
FAR RED 50 Cy 5 shift free
EX BP 640/30, BS FT 660, EM BP 690/50
Objectifs pour observation en
fluorescence
Objectif EC "Plan-Neofluar" 10x/0,3 Ph1 M27 (Phase)
Objectif "Plan-Apochromat" 20x/0,8 M27
Objectif "Plan-Apochromat" 40x/1,4 Oil DIC M27
Objectif "Plan-Apochromat" 63x/1,4 Oil DIC M27
Objectifs pour observation en
contraste interférentiel (DIC) 40X, 63X
Platine de déplacement Motorisée par joystick
Déplacement en Z Galvanométrique précision de 25 nm
Changement d’objectifs Motorisé
Facteur de grossissement du tube 1X
Chambre C02
Thermorégulateur Non
Non
Caméra
Résolution et taille du pixel
CCD refroidi
Digitalisation
Bruit noir
Axiocam HRm Rev.3
1388x1040 et jusqu'à 4164x3120 - pixel 6,45 µm
oui
jusqu’à 14bit
0,07 e-/p/s @ -30°C
Acquisition
Images multi-marquages en séquentiel
2D à 6D
Multi-champ, Mosaïque
Logiciel d’acquisition
Zen 2012
Système d’exploitation Windows XP
Ordinateur Processeur Xéon 6 Core MUI, 6 Go RAM

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Filtre 38 (vert):
Excitation: BP 470/40
Beam Splitter: FT495
Emission: BP 525/50
Fluorochromes: 5-Carboxyfluorescein (5-FAM) 5-FAM (5-Carboxyfluorescein) Acridine
Orange, both DNA & RNA Acridine Yellow Alexa Fluor 488™ Astrazon Orange R
Auramine Aurophosphine Cy2™ DiO (DiOC18(3)) EGFP FITC FITC Antibody Fluo-3 Fluo-
4 Fluorescein (FITC) Fluoro-Emerald GFP (S65T) GFP red shifted (rsGFP) GFP wild type,
non-UV excitation (wtGFP) Lyso Tracker Blue-White Mitotracker Green FM Oregon Green
488-X Oregon Green™ 488 Oregon Green™ 500 PKH67 rsGFP S65A S65C S65L S65T
sgGFP™ (super glow GFP) SYTO 13 SYTO 18
Filtre 43 (rouge):
Excitation: BP 545/25

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Beam Splitter: FT570
Emission: BP 605/70
Fluorochromes: DsRed (Red Fluorescent Protein) Ethidium Bromide Fluor Ruby Magdala
Red (Phloxin B) Phloxin B (Magdala Red) Rhodamine B Rhodamine BB Rhodamine B 200
R-phycoerithrin (PE) Sevron Brilliant Red B Xylene Orange
FilterSet 49 (bleu):
Excitation: G365
Beam Splitter: FT395
Emission: BP 445/50
Fluorochromes: 1,8-ANS (1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid); 1-Anilinonaphthalene-8-
sulfonic acid (1,8-ANS); 6,8-Difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0; 7-Amino-4-
methylcoumarin pH 7.0; 7-Hydroxy-4-methylcoumarin; 7-Hydroxy-4-methylcoumarin pH
9.0; Alexa 350; AMCA conjugate; Amino Coumarin; BFP (Blue Fluorescent Protein);
Cascade Blue; Coumarin; DAPI; DAPI-DNA; DyLight 350; Hoechst 33258; Hoechst 33258-
DNA; Hoechst 33342; Indo-1 Ca2+; Indo-1, Ca free; Indo-1, Ca saturated; LysoSensor Blue;
LysoSensor ; Blue pH 5.0; LysoSensor Yellow pH 9.0; LysoTracker Blue; Marina Blue
Filtre 50 (rouge lointain):

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Excitation: BP 640/30
Beam Splitter: FT660
Emission: BP 690/50
Fluorochromes: Alexa 647; Alexa 660, Alexa Fluor 647 antibody conjugate pH 7.2; Alexa
Fluor 660 antibody conjugate pH 7.2; Allophycocyanin pH 7.5; APC (allophycocyanin); Atto
647; BODIPY 650/665-X, MeOH; Cy 5; DDAO pH 9.0; DyLight 649; Nile Blue, EtOH; TO-
PRO-3-DNA; TOTO-3-DNA
Allumage du système
- Eteindre le PC
- Basculez l'interrupteur sur ON au niveau de la multiprise (allume la lampe HXP 120 + le
boîtier de l'Apotome-2 + le boîtier control Unit 232 )
- Allumez le microscope (bouton à gauche du statif)
- Attendre que le microscope soit complètement allumé (la barre d'initialisation et le logo
Zeiss n'apparaissent plus sur l'écran TFT) puis démarrez le PC. Sur le bureau, choisir le
logiciel Zen 2012
Observation aux oculaires
L'observation de l'échantillon aux oculaires se pilote au travers du logiciel en sélectionnant
dans l'onglet le bouton Oculaire et le fluorochrome à observer.