Applica on de la métabolomique dans le suivi de la

Applica'on*de*la*métabolomique*dans*le*suivi*de*la*transplanta'on*rénale!
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Référence*
Introduc'on*
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Considéra'ons*techniques*
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Métabolomique*en*transplanta'on*
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RMN$
MS$
Aspects'expérimentaux'
Réglages!pour!biofluides!
!
1D!1H!and!1D!31P!
2D!CPMG!
2D!HSQC!!
2D!COSY!
2D!TOCSY!
!
GC/LC/CE-MS!
ESI-Q-TOF!
ESI-Q-orbitrap!
MALDI-TOF!
Réglages!pour!biopsie!
HRMAS!
MALDI-TOF!
Réglages!pour!études!in!vivo!
Possible!avec!MRS!
Non!
Détection!moyenne!de!
métabolites!
<!200!
500+!
Équipement!
!
!
Coût!de!l’équipement!
Très!élevé!
Modéré!à!élevé!
Coût!de!maintenance!
Élevé!
Modéré!
Analyses!automatisées!
Oui!
Oui!
Temps!expérimental!
5!minutes!pour!1D!
Jusqu’à!60!minutes!pour!2D!
Jusqu’à!60!minutes!si!combiné!
à!de!la!chromatographie!
Avantages'généraux!
Non-destructible!
Applications!larges!
!
Intrinsèquement!quantitatif!
Très!sensible!(pg-ng)!
!
Préparation!minimale!
Haute!résolution!
!
Robuste!et!reproductible!
Utilisable!sur!tout!type!de!
biofluide!!
Détection!élevée!de!
métabolites!
Peut!être!couplé!à!des!
méthodes!de!séparation!
Limitations'générales'
Résolution!modérée!à!cause!de!
la!superposition!de!pics!
Faible!sensibilité!(μg)!
Détection!basse!de!métabolites!
Très!dispendieux!
Méthode!destructive!
Reproductibilité!modérée!pour!
les!biofluides!avec!des!sels!
Biais!de!détection!(mode!positif!
ou!négatif)!
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RMN!Échan'llon!MS!
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Complication+
Matrice+
Métabolites+
Rein%
!
!
Dommage!ischémique!
!
Urine!
TMAO,!DMA,!acétate,!lactate,!citrate!
Dommage!ischémique!
Plasma!
TMAO,!allantoïne,!inosine,!hypoxanthine,!glucose,!lactate,!lipides,!
adénine,!guanosine,!urate,!polyols,!prostaglandines,!kynurenine,!
citrulline!
!
Dommage!ischémique!
!
Tissu!
ATP!
Rejet!
Urine!
Kynurenine,!phosphatidylcholines,!proline,!dérivés!d’acides!
aminés!
!
Rejet!
Sérum!
Acides!aminés,!carbohydrates,!lipides,!métabolites!de!la!flore!
intestinale,!métabolites!cataboliques,!kynurenine!
!
Délai!reprise!de!fonction!
!
Urine!
TMAO,!creatine,!creatinine,!hippurate,!mannitol,!acétate!
!
Délai!reprise!de!fonction!
PM!
Glutathion,!glucose,!leucine,!inosine,!gluconate!
!
Tox.!Immunosuppresseurs!
Urine!
Glucose,!TMAO,!citrate,!lactate,!15-F2t-isoprostane,!hippurate,!
inositol,!créatinine,!succinate,!α-ketoglutarate,!créatine,!TMA,!
taurine!
!
Tox.!immunosuppresseurs!
!
Plasma!
Créatinine,!TMAO,!glutathion!
!
Tox.!immunosuppresseurs!
Sérum!
Lipides,!glucose,!hypoxanthine,!lactate,!succinate,!taurine!
!
Foie+
!
!
Dommage!ischémique!
!
Plasma!
ADMA!
Dommage!ischémique!
!
Sérum!
Acides!gras,!carbohydrates!
Dommage!ischémique!
Tissue!
Urée,!acides!biliaires,!acide!homovanillique,!méthionine,!
glutathion!réduit,!formate,!orthophosphate,!ADP,!lactate,!
pyruvate,!glycérol,!fumarate,!succinate!
!
Dommage!ischémique!
!
PM!
Lactate,!urée,!acides!biliaires!
Rejet!
!
Bile!
Acide!biliaire!conjugué!à!la!taurine!
Délai!reprise!de!fonction!
Tissue!
Acides!biliaires,!xanthine,!acide!urique,!kynurenine,!3-
nitrotyrosine,!acide!4-hydroxy-3-methoxymandélique!
!
Coeur+
!
!
Rejet!
!
Urine!
Nitrate!
Rejet!
Plasma!
Lipides,!lipoprotéines,!proline,!glycine,!sérine,!phénylalanine,!
isocitrate!
!
Rejet!
Tissue!
Phosphocréatine,!ATP,!N-acetylaspartate,!myo-inositol,!créatine!
!
Poumon+
!
!
Dommage!ischémique!
!
Tissue!
Phénylalanine,!tyrosine,!acides!gras!
Dommage!ischémique!
!
Liquide!de!
préservation!
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Glutathion,!uracil!
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Dosage*du*TMAO*dans*le*liquide*de*
conserva'on*rénal*
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Condition'
Signification'
Niveau'de'TMAO'
Normal'
!
Protection!des!protéines!et!des!acides!nucléiques!
contre!les!altérations!structurales!causées!par!
l’acide!urique!
!
Normal!
Transplantation'rénale'
Marqueur!de!dommage!médullaire!rénal!
Marqueur!d’intensification!du!stress!oxydatif!
Associé!à!au!dommage!ischémique!rénal!
Associé!à!la!toxicité!des!immunosuppresseurs!
Associé!à!un!délai!de!reprise!de!fonction!
!
Augmenté!
!
Maladies'rénales'
chroniques'
!
Corrélation!inverse!entre!la!concentration!de!
TMAO!et!le!DFGe!
Risque!de!complications!cardiaques!
!
Augmenté!
!
Tableau*3=!DO/$32!@+!@'0*W)!@+!1I7i!L'+#!/)!@$*W('0O%!)3!/)!
0+$?$!382#*L)+O[+)!@)0!L*O)(30!*?)%!*S)$(3)0!#2(*/)0!'+!
3#*(0L/*(3*O'(!#2(*/)=!7@*L32!@)!&'(()*+!)3!*/=!
!
Information!sur!la!banque!d’échantillons!
Nombre'd’échantillons'(N)'
!
169!
!
Genre''
'''''Homme%
%%%%%Femme'
!
108!
61!
!
Temps'd’ischémie'moyen'
!
11!heures!et!3!minutes!
!
Type'de'donneur'
'''''Décès%cardiocirculatoire%
%%%%%Décès%neurologique%
%%%%%Donneur%volontaire%vivant%
%%%%%Inconnu'
!
!
51!
85!
16!
17!
Reprise'de'fonction'
'''''Immédiat%
%%%%%Lent%
%%%%%Inconnue'
!
!
100!
24!
17!
Nécrose'
!!!!!Nécrose%tubulaire%aigue%
%%%%%Inconnu!
!
28!
17!
!
!
Tableau*4=!B'(0O3+O'(!@)!/*!6*([+)!@E2%8*(O//'(0!@)!
/$[+$@)!@)!%'(0)#?*O'(!@)!3#*(0L/*(3*O'(!#2(*/)!d!/EJI5!