- apramen

Radiomarquage des
leucocytes autologues
in vitro au 18F-FDG
O.Aupée1, L. Roy2, A. Desbree2, C. Vaylet3, P. Voisin2, H. Foehrenbach4
1
Radiopharmacie, HIA Val-de-Grâce
2 Institut de Radioprotection et de Sûreté Nucléaire
3 Service de Médecine Nucléaire, Hôpital Trousseau
4 Service de Médecine Nucléaire, HIA Val-de-Grâce
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P
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s
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ta
M
A
R
P
A
EN
Historique
1992 : Faisabilité du radiomarquage des leucocytes au FDG
Osman S, Danpure HJ : The use of 2-[18F]fluoro-2-deoxy-D-glucose as a potential in vitro
agent for labelling human granulocytes for clinical studiesby positron emission tomography. Int J
Rad Appl Instrum B 19 : 183-190,1992
2002 : Biodistribution et Dosimétrie
Forstrom LA, Dunn WL, Mullan BP, Hung JC, Lowe VJ, Thorson LM : Biodistribution and
dosimetry of [(18)F]fluorodeoxygluxose labelled leukocytes in normal human subjects. Nucl Med
Commun 23 : 721-725, 2002.
2005 : Comparaison FDG / FDG-LKC
Pellegrino D, Bonab AA, Dragotakes SC, Pitman JT, Mariani G, Carter EA : Inflammation and
infection : imaging properties of FDG-labeled white blood cells versus 18F-FDG. J Nucl Med 46
: 1522-1530, 2005
2006 : Comparaison 111In-oxine / FDG-LKC
Rini JN, Bhargava KK, TRonco GG, Singer C, Caprioli R, Marwin SE, Richardson HL, Nichols N
KJ, Pugliese PV, Palestro CJ : PET with 18F-FDG labeled leukocytes versus scintigraphy with E
111In-oxine-labeled leukocytes for detection of infection. Radiology 238 : 978-987, 2006AM
R
P
A
2006 : Première série de 21 patients
Dumarey N, Egrise D, Blocklet D, Stallenberg B, Remmelink M, del Marmol V, Van n
Simaeys G,
o
Jacobs F, Goldman S : Imaging infection with FDGlabeled leukocyte PET/CT : initial
i experience
t
in 21 patients. J Nucl Med 47 : 625-632, 2006
ta
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s
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Prélèvement sanguin
NFS
100 mL de sang total
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M
A
R
P
Glycémie
A
n
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
2 mL HEA +
15 mL sang hépariné
Isolement
des
leucocytes
T1
T2
T3
3 mL HEA +
20 mL sang hépariné
T4
T5
T6
Sédimentation (30-90 min)
surnageant
T1
T2
T3
T4
T5
15 mL
sang hépariné
SSP
Centrifugation
2000g – 10 min
SSP
T6
globules rouges
Prélèvement du
surnageant
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M
A
R
P
A plasma
EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Isolement
des
leucocytes
PRLRP
plasma
PRLRP
leucocytes
Prélèvement du
surnageant
PRP
PRP
Centrifugation
150g – 5 min
Remise en suspension
des leucocytes
PRLRP
Centrifugation
2000g – 10 min
n
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t
RADIOMARQUAGE
n
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s
é
Pr
Numération puis
M
A
R
P
A
EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Radiomarquage des leucocytes au 18F-FDG
18F-FDG
S1
Prélèvement du
surnageant
Incubation à 37°C
Activité AS
T = 10, 20 et 30 minutes
PRLRP
PRLRP
Centrifugation
150g – 10 min
leucocytes
Remise en suspension
des leucocytes
n
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M
A
R
P
A
PRLRP
é
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P
n
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s
Activité AL
EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Contrôle de la préparation de leucocytes marqués
Calcul du rendement de récupération des cellules
Calcul du rendement de marquage
Stabilité du radiomarquage
Evaluation de la viabilité cellulaire (bleu trypan)
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M
A
R
P
A
EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Rendement de récupération des cellules :
Leucocytes : 15 % [5-58]
Hématies : 0,04 %
Plaquettes : 1,71 %
Variation de la proportion des sous-populations
leucocytaires
Influence majeure de l’étape de ion
sédimentation des cellules tat
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s
M
A
R
P
A
EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Rendemement de marquage :
Variabilité importante : 4 à 84%
Plusieurs paramètres de variation :
Nombre de cellules et durée d’incubation
N
E
Activité volumique de la solution de FDG
M
A
Présence de glucose dans le milieu de marquage PR
A
n
Température (non évalué)
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n
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s
é
Pr
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Rendemement de marquage
Influence du nombre de cellules
Activité incorporée dans les cellules en fonction du temps d'incubation
et du nombre de cellules (A = 340 MBq)
90
80
% Activité incorporée
70
60
80 millions de cellules
50
100 millions de cellules
40
M
A
R
P
A
20 millions de cellules
30
20
10
0
10
20
Temps d'incubation (min)
30
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P
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Rendemement de marquage
Influence de l’Activité volumique et de la présence de Glucose
Rendement de marquage des leucocytes au FDG en fonction du
milieu d'incubation
100
90
Rendement de marquage (%)
80
70
60
Plasma
50
NaCl 0,9%
40
30
20
10
0
0
100
200
300
400
500
Activité volumique (MBq/mL)
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A
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Stabilité du marquage
Stabilité du radiomarquage des leucocytes au FDG
Activité résiduelle intracellulaire (%)
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
30
60
90
120
Temps d'incubation (min)
Viabilité cellulaire (bleu trypan) : > 99 % en
s
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Etude des effets cellulaires induits
Conséquences biologiques du radiomarquage
au 99mTc-HMPAO sur les lymphocytes
Altérations morphologiques
De Labriolle Vaylet, Eur J Nucl Med, 1998
Aberrations chromosomiques
Ilknur, J Nucl Med, 2002
Evaluation des effets cellulaires associés ion
t
au radiomarquage des leucocytes au 18F-FDG
ta
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A
R
P
A
EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Recherche des aberrations chromosomiques
Mise en culture des lymphocytes radiomarqués (LT)
Recherche des aberrations chromosomiques
Mort cellulaire
Présence de débris cellulaires et de
quelques noyaux – pas de métaphases
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Evaluation de la dose reçue par les lymphocytes
Conditions expérimentales :
25.106 leucocytes (73,2 % PN)
Activité : 250 MBq (340 MBq/mL)
Rendement de marquage :
14 % après 10 minutes d’incubation
43 % après 30 minutes d’incubation
Hypothèses de calcul :
n
Pas de prise en compte des photons d’annihilation
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Répartition cellulaire homogène de l’activité
n
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Evaluation de la dose reçue par les lymphocytes
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
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s 2002
Forstrom et al. Nucl Med Comm,
é
Pr
M
A
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EN
Radiomarquage des
leucocytes au 18F-FDG
Conservation des
fonctions biologiques des
cellules marquées ?
n
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s 2002
Forstrom et al. Nucl Med Comm,
é
Pr
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A
EN
Place de la TEP aux leucocytes marqués
au 18F-FDG ?
?
18F-FDG
-LKC
EN
99mTc-besilesomab
99mTc-HMPAO-LKC
18F-FDG
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L’avenir ?
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