Annexes

Annexes
Annexes

Science
Science
A
A

3
Etude thérapies cellulaires et ingénierie tissulaire – Février 2007
Les CSE issues d’embryons fécondés ont en général
deux origines :
1. Les embryons surnuméraires issus de
fécondations in vitro (FIV) et ne faisant plus
l’objet de projets parentaux
2. La fécondation d’un ovocyte par un
spermatozoïde, de la même manière qu’une
FIV, mais l’embryon créé est utilisé
précocement en recherche uniquement
(autorisés dans quelques pays)
Les cellules souches sont récoltées après 5-6 jours
de divisions cellulaires
Les CSE ainsi obtenues sont capables de se
différencier en plusieurs types de tissus
Principe Spermatozoïde
Ovocyte
Fécondation
Zygote
Division cellulaire
Masse
cellulaire
interne
Blastocyste
Cellules de la masse
cellulaire interne
CSE cultivées
Source : British-North American Committee, June 2004
Annexes A
Annexes A – –Science des cellules souches
Science des cellules souches – –Cellules souches embryonnaires Cellules souches embryonnaires
Les cellules souches embryonnaires peuvent être obtenues à partir d’embryons…
Les tissus obtenus des cultures de cellules souches
ne sont normalement pas le même patrimoine
génétique que la personne devant être traitée

4
Etude thérapies cellulaires et ingénierie tissulaire – Février 2007
Le transfert somatique de noyau implique 2 étapes
majeures:
1. Insérer un noyau cellulaire qui contient l’ADN
d’une cellule adulte différenciée (cellule
somatique) dans un ovocyte non fécondé
(oocyte) dont on a retiré le noyau (énucléé)
2. Stimuler cette lignée cellulaire in vitro jusqu’au
stade blastocyste
Les cellules souches sont prélevées après 5 à 6 jours
de divisions cellulaires
Les lignées de cellules souches ainsi obtenues
pourraient être capables de se différencier en une
large fourchette de tissus
Principe
Source : British-North American Committee, June 2004
Cellule somatique
Zygote
Division
cellulaires
Masse
cellulaire
interne
Blastocyste
Cellules de
la masse
interne
CSE
cultivées
Énucléation
Ovocyte
Transfert
somatique de
noyau
noyau
Ovocyte
énucléé
Activation
Annexes A
Annexes A – –Science des cellules souches
Science des cellules souches – –Cellules souches embryonnaires Cellules souches embryonnaires
…ou par transfert somatique de noyau (somatic cell nuclear transfer, SCNT)
Les tissus ainsi obtenus peuvent être
génétiquement identiques à la personne devant
être traitée (i.e. pas de rejet)

5
Etude thérapies cellulaires et ingénierie tissulaire – Février 2007
L’approche la plus largement répandue pour diriger la
différenciation des CSE est la modification spécifique des
conditions de culture, par l’ajout de facteurs de croissance
par exemple
Dans la maladie de Parkinson, une population clé de
neurones dopaminergiques disparaît
Une des priorités cliniques est de trouver un
moyen de remplacer in vivo ces cellules par des
neurones cultivés in vitro
En 2000, Ron McKay et al. a réussi à déclencher la
différenciation in vitro de CSE de souris en changeant les
conditions de culture, afin d’imiter les conditions
d’embryogenèse in vivo. Les neurones obtenus ont un
aspect et un fonctionnement similaires à ceux que l’on
trouve in vivo
Ce processus complexe de différenciation multi-étapes a
un rendement élevé (proche de 30%) de production de
neurones exprimant la tyrosine-hydrolase, l’enzyme
limitante dans la synthèse de la dopamine
Exemple de différenciation de CSE initiée par le milieu de culture
CSE non différenciées
Corps embryoïdes
Milieu ITFSn
(insuline/transferrine/fibronectine
/sélénium) Substrat adhérent
SELECTION DES CELLULES POSITIVES POUR LA NESTINE
Milieu N2 /βFGF/laminine
CELLULES PRECURSEURS
DE NEURONES POSITIVES
POUR LA NESTINE
Élimination du βFGF
NEURONES SECRETANT DE
LA DOPAMINE ET DE LA
SEROTONINE
Phase d’expansion
Phase de Différenciation
Sources : Nat. Biotechnol. 18, 675–679, 2000, NIH 2001
Annexes A
Annexes A – –Science des cellules souches
Science des cellules souches – –Cellules souches embryonnaires Cellules souches embryonnaires