Anopheles gambiae immune responses with natural isolates of
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UNIVERSITE DE YAOUNDE I JOURNEE SCIENTIFIQUE PPR FTH-AC Complexité génétique de Plasmodium falciparum et modulation de la réponse immunitaire chez Anopheles gambiae Sandrine Evéline Nsango Doctorat/PhD Université de Douala Espèces de Plasmodium humains > 90% P. falciparum 5-10% P. malariae < 1% 1-3% P. ovale P. vivax Mbenda et al., 2014; Fru-Cho et al., 2014 Vecteurs du paludisme au Cameroun Distribution géographique des vecteurs 48 espèces anophéliennes A. gambiae s.s A.moucheti s.s. A. arabiensis 14 espèces vectrices A. funestus s.s. 9 vecteurs secondaires A. nili s.s. 5 vecteurs majeurs Hervy et al, 1998 Revue PEPC, 2007 Cycle de transmission de Plasmodium falciparum Homme Anophèle femelle http://www.nature.com/nature/journal/v433/n7022/images/433113a-f1.2.jpg Variations du nombre de parasites au cours du développement sporogonique Perte majeur en parasite Causes des pertes en parasites Log Flore bactérienne Réponse immunitaire du moustique Sinden, 1999; Blandin et Levashina, 2004 ThioEster containg protein 1 (TEP1) HumC3 TEP1 α-ring β-ring Baxter et al., 2007 TEP1: facteur antiparasitaire majeur Ac anti-TEP1 TEP1 TEP1 est synthétisée dans les hémocytes TEP1 exerce une activité antiparasitaire contre P. berghei dsLacZ dsTEP1 Blandin et al., 2004 Objectifs de l’étude Caractériser la réponse immunitaire d’A. gambiae vis-à-vis de Plasmodium falciparum Impact de la multiclonalité sur l’infectivité d’Anopheles gambiae Rôle de la réponse immunitaire induite par l’injection Matériel et méthodes Critères d’inclusion Etre inscrit dans une des écoles Avoir reçu le consentement parental Volontariat des enfants Critères d’exclusion Refus parental Consentement éclairé du Comité National d’Ethique Recrutement des porteurs de gamétocytes Traitement Infections J1 Injection ARNdb J4 Gorgement sur membrane J4 Dissection J11-J12 Purification des gamétocytes de P. falciparum Polya Colonne LD TAA87 Base aimantée P25 P20 ARA2 Chr4 TAA109 Chr6 P26 Chr11 Pfg377 Support pour tube vacutainer PfPK2 P22 Chr12 P23 TAA60 P24 Chr13 P21 Système MACS (Miltenyi Biotec) Anderson et al., 2000 Annan et al., 2007 Allèles 188 186 177 174 165 162 P26 RESULTATS ET DISCUSSION Paramètres paludométriques et infectivité des moustiques Code porteur ME5 MJ5 MR7 GJ5 ETD FA5 ON8 NES SIL LN5 BA8 MA7 JB8 MF5 EVA EA8 MI NH8 MAM OJ1 Densité gamétocytaire (par µl de sang ) 95 154 177 96 266 46 52 91 16 83 53 21 62 23 23 44 29 370 23 68 Parasitémie asexuée (par µl de sang ) 0 0 0 1 0 1 1 0 0 3 1 4 1 2 3 1 1 3 3 1 Multiplicité de l’infection 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 4 5 5 5 6 7 7 0- absence de trophozoïte 1: 1-50 trophozoïtes 2: 51-500 3: 501-5000 4: > 5000 Phénotype Injection TEP1 + _ Impact de la multiclonalité sur l’infectivité d’A. gambiae 11 exp MOI > 2 MOI ≤ 2 9 exp P<0.001 P<0.001 n: 323 P(%): 69.3 Moy: 19.1 215 30.7 1.9 210 68.6 16.3 547 67.5 10.2 394 68.5 8.4 MOI module l’ éfficacité du système immunitaire 387 60.5 7.1 Confection des puces à ADN dsLacZ Non injecté 3h Collecte 3h Collecte Confection des puces (IGBMC) Induction de TEP1 3-6h Levashina et al., 2001 Genespring vs10.1 Li, C., and Wong, W., 2003 dsLacZ > non injecté Liste des gènes différentiellement exprimés dsLacZ > Ninj 1081 409 332 Frolet, comm pers AP1/Kay TGases TEPs, LRR, GPCR, Sérine protéases…. Régulation de l’expression des gènes par AP1/Kay Effet de TGase9098 sur la survie de P.falciparum 3 exp Ctrl dsLacZ dsTGase dsTGase dsKay 9100 9098 n 111 80 76 87 83 P(%) 57.6 50 53.9 66.7 78.3 M 7.2 3.9 5.2 6.4 7.6 dsTEP1 59 76.3 5.5 TGase9098 nouveau facteur antiparasitaire contre P. falciparum Conclusions TEP1 régule le développement du parasite humain chez le vecteur Induction d’une réponse immunitaire par l’injection Identification de deux composantes antiparasitaires induites par l’injection: AP1/Kay et TGase9098 L’analyse fonctionnelle par RNAi n’est pas adaptée pour l’étude du rôle des gènes avec P. falciparum La multiplicité de l’infection module l’infectivité des moustiques Perspectives Identification du mécanisme d’activation de TEP1 contre P. falciparum Mise en évidence du mécanisme de fonctionnement de TGase9098 Dissection de la réponse immunitaire induite après injection Mise au point de méthodes alternatives d’analyses fonctionnelles dans le contexte naturel MERCI POUR VOTRE AIMABLE ATTENTION
