Détection des Métastases du Cancer Ovarien par Fluorescence

Détection des Métastases du
Cancer Ovarien
par Fluorescence après Injection
Intraperitonéal e
de l‘ ALA et l‘Hexyl Ester
Une étude préclinique
T. Gabrecht & N. Lange , EPFL
A. Major & F. Lüdicke, HUGenève
Plusieurs rats blancs
Cancer ovarien
• la plus grave maladie gynécologique du monde de l‘ouest
• formation rapide des métastases
diffusion peritonéale
Cul-de-sac recto-utérin
Cul-de sac vésico-utérin
Péritoneum
diffusion lymphathique
Noeuds lymph. pelvis & paraaortals
Infiltration de la cavité thoracique
• cancer précoce souvent asymptomatique
diagnostic à degré avancé
taux de survie à 5 ans: 39 % - 23 %
Thérapie
• Laparotomie
• Résection complète de la tumeur
et ses metastases
• Lavage abdominal
• Post opération:
radiothérapie, chimiothérapie
En générale:
Patientes répondent bien a la thérapie
...mais
50 % Récidives
en raison de
micrométastases pas vues à la 1ère laparotomie
Amélioration de la détéction des métastases
cachées pendant l‘opération initiale
Etude animale
42 Rats Fischer 344
(femelles)
106 NuTu-19 cellules du cancer ovarien
14
Lu
n
19
Dim
20
Lun
35 jours
1 r
a
M
26 rats avec metastases abdominales
et ascite légére
Données de l‘Injection
31 rats avec h-ALA: concentrations 4, 8, 12 et 20 mM
10 rats avec ALA: concentration 8 mM
Temps: 0.5 h- 4.0 h
Preparation: drogue dissoute dans PBS,
pH adapté à 7.4 par NaOH
Volume de l‘injection:
2 ml
1 rat sans sensibilisateur: référence
Données de l‘Injection
Total
No Sens.
h-ALA
ALA
ND
ND
No ND
ND
No ND
1
31
10
0 mM 4mM
8 mM
12 mM 20 mM
2.0 h 0.5 h 1.0 h 2.0 h 4.0 h
2.0 h
2.0 h
3
2
2
1
1
3
3
1
2
1
6
2
3
5
1
3
2
1
Mesures
Spectrofluoromètriques
Spectrofluoromètre à fibre optique
Diametre de la fibre
600 µm
Longueur d‘onde d‘excitation
Puissance d‘excitation
(extrémité de la fibre)
500 nm
14 µW
Spectrofluoromètre
OMA
Unite diodes
LP
L
M
Spectrographe
SP
PC
Dic
L
M
M
Monochromateur
Xe
Lampe
Microscope
Fibre optique
M: mirroir
L: lentille
SP: passe-court
LP: passe-longe
Dic: dichroïque
Fluorescence des Nodules
12000
Fluorescence [u.a.]
10000
ALA 8 mM
h-ALA 4 mM
h-ALA 8 mM
h-ALA 12 mM
h-ALA 20 mM
n=12
8000
6000
4000
n=5
n=7
n=12
n=35
2000
n=16
n=16
0
0.0
0.5
n=14
n=4 n=16
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
Temps après l'injection [h]
Valeurs moyennes de plusieures mesures sur nodules situés sur peritoneum et diaphragme et
erreurs standards, n=nombre des mesures
Fluorescence des Nodules
Conclusions
Géneration rapide du PpIX (<0.5 h)
Fluorescence h-ALA > ALA (8 mM, 2 h)
Fluorescence h-ALA (2 h) = ALA (4 h)
Fluorescence maximale avec h-ALA 20 mM
Fluorescence du Tissu Sain
ALA 8 mM
h-ALA 4 mM
h-ALA 8 mM
h-ALA 12 mM
h-ALA 20 mM
2200
2000
Fluorescence [u.a.]
1800
1600
1400
1200
n=3
n=6
n=6
n=3
n=1
1000
n=6
800
n=10
600
n=12
400
n=6
n=4
n=6
200
0
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
Temps après l'injection [h]
Valeurs moyennes de plusieures mesures sur nodules situés sur peritoneum et diaphragme et
erreurs standards, n=nombre des mesures
Fluorescence du Tissu Sain
Conclusions
Fluorescence h-ALA < ALA (independent de la dose!)
Contrast tissue sain:nodule : ≈1:5 (h-ALA 8 mM, 2 h)
≈1:1 (ALA 8 mM, 2 h)
Plus grand contrast :
h-ALA 20 mM (1:13)
Examen Endoscopique
Moniteur
VHS Video
STORZ PDD système
avec 0° Cystoscope
Caméra PDD
Source de la lumière PDD
(lampe filtrée)
Examen en lumière blanche et en bleu
Comparaison du nombre de nodules vus
Examen Endoscopique
Rapport Bleu/Blanc
Concentration
[mM]
4
4
Temps
[h]
2
2
Lum.
Blanche
9
0
Lum.
Rapport
Bleu
19
2.1
4
∞
8
8
2
2
21
36
37
57
1.8
1.6
8
8
2
2
13
4
29
24
2.2
6
12
2
3
8
2.7
20
2
9
25
2.8
8 ALA
2
10
16
1.6