Amplification ex vivo de lymphocytes T CD8 humains spécifiques à l
Amplification ex vivo de lymphocytes T CD8 humains
sp´ecifiques `a l’aide de mol´ecules recombinantes
multim´eris´ees.
Catherine Rabu
To cite this version:
Catherine Rabu. Amplification ex vivo de lymphocytes T CD8 humains sp´ecifiques `a l’aide de
mol´ecules recombinantes multim´eris´ees.. Immunologie. Universit´e de Nantes, 2005. Fran¸cais.
<tel-00339416>
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Submitted on 17 Nov 2008
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UNIVERSITE DE NANTES
FACULTE DE PHARMACIE
Amplification ex vivo de lymphocytes T CD8 humains
spécifiques à l’aide de molécules recombinantes
multimérisées.
Thèse de Doctorat
Ecole Doctorale : Chimie-Biologie
Discipline : Sciences de la Vie et de la Santé
Spécialité : Immunologie
Présentée et soutenue publiquement par
Catherine RABU
Le 8 novembre 2005, devant le jury ci-dessous
Rapporteurs : M. Eric ROBINET, Chargé de Recherches, Besançon
M. Daniel OLIVE, Professeur des Universités, Marseille
Examinateur : M. Yannick JACQUES, Directeur de Recherches, Nantes
Directeur de Thèse M. François LANG, Professeur des Universités, Nantes
Inserm Unité 601
Je remercie le Dr. Eric Robinet et le Pr. Daniel Olive qui me font l’honneur d’être
rapporteurs de cette thèse.
Je remercie le Dr. Yannick Jacques pour avoir accepter d’être membre de ce jury.
Je remercie le Pr. Francine Jotereau pour m’avoir accueillie dans l’équipe de recherche
qu’elle dirige.
Je remercie le Dr. Marc Bonneville pour m’avoir accueillie dans l’unité INSERM
U601 qu’il dirige.
Mille mercis à Karine
Bernardeau pour tous les
moments de complicité que
nous avons partagés au cours
de ces quelques années
passées dans ce labo.
Il serait trop long d’énumérer toutes les raisons pour lesquelles je souhaite addresser mes plus chaleureux
remerciements à François Lang. Je me contenterai donc de le remercier pour l’énergie, la patience, et
l’acharnement qu’il a déployés pour encadrer ce travail. Ces années de formation sous sa direction furent très
enrichissantes.
Je remercie tout aussi
chaleureusement Nathalie
Labarrière pour sa bonne
humeur, sa grande disponibilité,
ses conseils avisés et son amitié.
Un grand merci à Pierre-Joseph
Royer et Régis Bouquié pour
leur aide précieuse appportée
dans la finalisation de ce
manuscrit.
Je remercie toutes les personnes que j’ai eu plaisir à cotoyer à l’U601, et en particulier Delphine
Carbonnelle, Marie Bodinier, Blanca Ripolles-Piquer, Frédéric Ebstein, Virginie Vignard, Emmanuelle
Godefroy, Annabelle Bonin, Yannick Guilloux, Nadine Gervois, Michel Chérel, François Davodeau,
Thomas Simon, Severine Tanguy-Royer, Gregory Bellot, Carole Sapède et Erwan Mortier.
Un grand merci également
à Klára Echasserieau et
Audrey Lartigue pour leur
aide et leurs conseils sur la
plateforme de protéines
recombinantes.
Je remercie également les
membres de l’équipe 3 avec qui
nous avons collaboré : Patricia
Vusio qui a réalisé les manips de
BiaCore et Agnès Quémener qui
a modélisé le 4-1BBL.
Merci à Elizabeth Diez pour sa
grande disponibilité et son aide
en culture cellulaire.
Sommaire
INTRODUCTION.........................................................................................................................................................9
I. INDICATIONS DE L’IMMUNOTHERAPIE CELLULAIRE PASSIVE........................................................................12
A. Rétablir une immunité anti-virale ............................................................................................................12
B. Conférer une immunité anti-tumorale .....................................................................................................18
II. CARACTERISATION DES LYMPHOCYTES T CD8 ............................................................................................25
A. Reconnaissance antigénique par les lymphocytes T
αβ
CD8 .................................................................25
1. Les molécules CMH de classe I............................................................................................................................ 25
2. Les peptides antigéniques associés aux molécules de classe I ........................................................................... 26
3. Le récepteur des lymphocytes T αβ (TCR) ......................................................................................................... 26
4. Le co-récepteur CD8 ............................................................................................................................................. 29
5. Complexe CMH-peptide recombinant ................................................................................................................. 30
6. Synapse immunologique ....................................................................................................................................... 31
7. Transmission du signal d’activation ..................................................................................................................... 32
B. Réponses des lymphocytes T CD8 ............................................................................................................33
1. Initiation de la reconnaissance .............................................................................................................................. 33
2. Expansion clonale.................................................................................................................................................. 34
3. Contraction............................................................................................................................................................. 37
4. Génération du répertoire mémoire........................................................................................................................ 38
C. Rôle des cytokines dans l’activation T CD8 ............................................................................................48
D. Rôle des molécules accessoires dans l’activation T CD8 ......................................................................54
1. Molécules d’adhérence.......................................................................................................................................... 54
2. Molécules de co-stimulation .................................................................................................................................57
III. METHODES DE GENERATION DE LYMPHOCYTES T CD8 A USAGE CLINIQUE .........................................68
A. Nature et origine des lymphocytes injectés .............................................................................................68
B. Critères exigés ...........................................................................................................................................68
C. Méthodes utilisées .....................................................................................................................................69
1. Méthodes cellulaires .............................................................................................................................................. 70
2. Méthodes acellulaires ............................................................................................................................................ 74
D. Projet de recherche et objectifs du travail ..............................................................................................76
RESULTATS ...............................................................................................................................................................78
I. ETUDE DE L’EXPRESSION DU 4-1BB SUR LES LYMPHOCYTES T...................................................................79
A. Résultats.....................................................................................................................................................79
B. Conclusions et perspectives......................................................................................................................88
II. PRODUCTION, PURIFICATION ET CARACTERISATION BIOCHIMIQUE ET FONCTIONNELLE D’UN 4-1BBL
CHIMERIQUE : AVITAG-4-1BBL ..............................................................................................................................90
A. Résumé .......................................................................................................................................................90
B. Données complémentaires ......................................................................................................................109
C. Commentaires..........................................................................................................................................113
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