Transfert de cellules germinales primordiales de

J. Embryol. exp. Morph. Vol. 21, 3, pp. 485-507, June 1969
4g5
Printed in Great Britain
Transfert de cellules
germinales primordiales de Dindon a Fembryon
de Poulet par injection intravasculaire
Par GEORGES REYNAUD 1
Faculte des Sciences, Universite d'Aix-Marseille
et Laboratoire Hubrecht, Utrecht
Les recherches descriptives et experimentales concernant l'etude des rapports
entre soma et germen, suscitees par les theories de Nussbaum (1880) et de
Weismann (1885), ont montre que chez la plupart des Metazoaires — et notamment chez la quasi totalite des Vertebres — le soma et le germen constituent des
lignees cellulaires deja distinctes au debut du developpement puisque la destruction des elements germinaux entraine la sterilite sexuelle definitive des individus.
La segregation complete et irreversible des lignees somatique et germinale
n'implique pas pour autant leur independance metabolique. Des travaux portant sur la differentiation des cellules germinales et la maturation des gametes
ont en effet demontre qu'elles necessitent un apport de substances provenant
des tissus somatiques de la gonade. Des lors, on pouvait se demander si certaines de ces substances n'etaient pas porteuses d'information. La resolution
experimentale de ce probleme necessitait la colonisation d'un tissu somatique
de gonade par des cellules germinales de speciflcite zoologique differente.
Chez les Amphibiens, des experiences ont ete tentees par Blackler (1962).
Elles ont consiste a remplacer, au stade neurula, 1'endoderme ventral d'un
embryon de Xenopus laevis laevis, qui renferme a ce stade les gonocytes primordiaux, par 1'endoderme homologue provenant d'une neurula de Xenopus laevis
victorianus de meme age. L'auteur a constate que les individus ainsi operes
produisent des gametes de meme speciflcite que le greffon, c'est-a-dire apparemment non modifies par leur sejour prolonge dans une gonade etrangere. Les
resultats de ces travaux ne plaident done pas en faveur d'une transmission de
substances porteuses d'information des cellules somatiques aux cellules germinales mais, a ma connaissance, l'analyse genetique n'a pas encore ete poussee
assez loin pour les considerer comme definitifs.
Chez les Oiseaux, les cellules germinales sont regroupees au debut du
developpement, dans une aire extra-embryonnaire decrite par Swift (1914) sous
1
Adresse de Vauteur: Laboratoire de Morphogenetique Animale, Faculte des Sciences,
Place Victor Hugo, Marseille, France.
486
G. REYNAUD
le nom de 'croissant germinal'. Elles quittent ensuite ce territoire et empruntent
la circulation sanguine pour aller coloniser les ebauches gonadiques. Reagan
(1916) et DantchakofT (1929) avaient envisage la possibility d'un transfert
precoce des gonocytes primordiaux par transplantation du croissant germinal
mais c'est seulement a une date recente que Simon (1960) est parvenu, en
mettant en parabiose circulatoire un embryon de Canard intact et un embryon
de Poulet prive de ses gonades presomptives, a faire coloniser les ebauches
gonadiques du Canard par des cellules germinales des deux especes. Ces associations, faites in vitro et maintenues en culture organoptypique, ne peuvent fournir
aucun renseignement sur la destinee des gonocytes de Poulet parvenus aux
ebauches gonadiques du Canard car la survie des parabiontes n'excede pas le
4e jour d'incubation.
La technique experimentale decrite ci-dessous a ete mise au point dans le but
de suivre plus longuement, et si possible au-dela de l'eclosion, la destinee de
gonocytes effectuant leur maturation dans une gonade etrangere. Les travaux
de Simonsen (1955) ayant demontre une large tolerance immunologique
reciproque entre Poulet et Dindon, et le Poulet s'elevant plus facilement que le
Dindon, la premiere espece a ete choisie comme receveur, la deuxieme a fourni
les gonocytes. Le processus experimental comporte trois series d'operations:
(1) la sterilisation sexuelle precoce d'un embryon de Poulet par destruction des
cellules germinales contenues dans le croissant germinal; (2) la recuperation des
cellulues germinales d'un embryon de Dindon avant leur migration vers les
ebauches gonadiques; (3) l'injection des cellules germinales ainsi recuperees
dans le reseau vasculaire de l'embryon de Poulet que Ton a prive de ses propres
gonocytes.
STERILISATION SEXUELLE DES EMBRYONS DE POULET
La plupart des travaux descriptifs et experimentaux effectues sur le germen
des Oiseaux au cours des cinquante dernieres annees tendent a confirmer les
observations de Swift (1914) selon lesquelles les cellules germinales primordiales
subissent, aux premiers stades du developpement, une segregation a partir d'un
materiel extra-embryonnaire. La realite du croissant germinal decrit par cet
auteur chez le blastoderme parvenu au stade de la ligne primitive s'est progressivement imposee a la suite des observations histologiques de Hulpieu (1925),
Woodger (1925), Goldsmith (1928) et DantchakofT, (1931a, b). Une nouvelle
technique (Reynaud, 1967), combinant l'isolement des feuiJlets blastodermiques
et l'application du procede de coloration P.A.S. au feuillet profond etale sur
lamelle, a fourni une demonstration supplementaire du regroupement temporaire des gonocytes primordiaux dans un territoire precephalique en forme de
croissant (voir plus bas).
Cette localisation des gonocytes au stade de la ligne primitive permet la
sterilisation precoce des embryons. Parmi les techniques experimentales utilisees,
l'excision du croissant germinal (Reagan, 1916) et sa cauterisation (Dantchakoff,
Transfert de cellules germinates
487
1931 a, b; Hukao, 1937) paraissent les plus efficaces mais ne sont pas compatibles
avec la survie des embryons. D'autres techniques moins nocives, comme les
irradiations aux rayons ultra-violets (Benoit, 1930), /? (Dantchakoff &
Lacassagne, 1932) et y (Dulbecco, 1946), n'entrainent, dans bien des cas,
qu'une sterilite sexuelle partielle. Le fait qu'un croissant germinal bien delimite
est encore en place chez des embryons de Poulet pourvus de 5 a 10 paires de
somites (Simon, 1960) a permis a Dubois (1962) de provoquer a coup sur et
dans de brefs delais une sterilisation totale a ces stades, au moyen d'une irradiation fractionnee aux rayons X du croissant germinal. Malheureusement, cette
technique compromet encore gravement la survie embryonnaire puisque seulement 6 sujets sur 100 sont encore en vie apres 3 jours d'incubation et meurent
avant la fin du 5e jour.
L'irradiation du croissant germinal aux rayons ultra-violets a ete tentee par
Benoit en 1930. Elle s'est averee tres maniable et tres efficace dans la destruction
des cellules germinales primordiales mais son intervention a un stade tres
precoce du developpement (entre 18 et 21 h d'incubation) et rinsuffisance de
protection des ebauches embryonnaires limitaient aussi la survie des sujets
experimentes. Neanmoins, les rayons u.v. sont sans doute mieux adaptes a la
destruction elective de cellules eparses dans un mince feuillet puisqu'ils sont a
la fois moins penetrants et beaucoup plus facilement absorbes que les radiations
ionisantes (Errera, 1959). C'est pourquoi je les ai utilises, mais a un stade plus
tardif ou, d'apres Simon (I960), le croissant germinal est encore en place.
L'irradiation du croissant germinal a ete ainsi pratiquee chez des embryons de
Poulet pourvus de 5 a 10 paires de somites (Fig. 1), c'est-a-dire aux stades precedant ^incorporation des cellules germinales primordiales aux ilots sanguins
extra-embryonnaires. Quelques blastodermes ont ete cependant irradies au
stade de la ligne primitive (15 h d'incubation) afin d'examiner les effets immediats des rayons u.v. sur les cellules du croissant de Swift. Enfin, je me suis
egalement inspire des techniques de Dubois (1962) pour la protection des
embryons par des ecrans de forme appropriee.
Technique de destruction des gonocytes primordiaux
Les experiences ont ete faites sur des embryons de Poulet de la race Rhode
Island. Les oeufs, incubes a 39 °C, sont sortis de la couveuse au terme du delai
necessaire pour parvenir au stade choisi pour le traitement. Pour decouvrir
1'embryon, une fenetre est pratiquee dans l'ceuf en decoupant, dans la region
de la coquille qui recouvre le blastoderme, un carre de 8 a 10 mm de cote.
Avant d'enlever les membranes coquillieres sous-jacentes, on perfore la chambre
a air, ce qui a pour efTet de deprimer le contenu de l'ceuf dans la coquille et de
faire descendre le blastoderme a quelques millimetres au-dessous du plan de la
fenetre ainsi menagee (technique de Hara, 1961). Les oeufs dont 1'embryon a
depasse le stade favorable sont elimines; ceux chez lesquels il ne l'a pas atteint
sont remis en incubation apres obturation de la fenetre.
488
G. REYNAUD
Deux ecrans tailles dans du papier d'aluminium sont places au-dessus du
blastoderme: le premier comporte un secteur evide respectant la forme du
croissant germinal; le second, en forme de languette, a pour but de renforcer la
protection de l'extremite cephalique de l'embryon (Fig. 2). La surface decouverte
est seule exposee aux u.v. La source de rayons est constitutee par une lampe a
vapeur de mercure (type S. 100 de Leitz), placee sur socle de maniere a donner
un faisceau vertical dirige de haut en bas. L'interposition de divers filtres sur le
Fig. 1
Fig. 2
Fig. 1. Schema d'un embryon de Poulet au moment ou se pratique l'irradiation
du croissant germinal (stade a huit paires de somites). En pointille: le croissant
germinal. (D'apres Simon et Dubois, modifie.)
Fig. 2. Systeme des ecrans de papier d'aluminium utilises pour l'irradiation, vu de
dessus. En pointille: ecran evide. En hachures: ecran plein en forme de languette.
(D'apres Dubois, modifie.)
trajet lumineux permet de disposer d'une bande plus ou moins etendue d'ultraviolet. En dehors du choix du filtre et de la duree d'irradiation, toutes les
caracteristiques du dispositif experimental utilise peuvent etre considerees
comme constantes. En ce qui concerne l'energie incidente du spectre d'emission,
il n'a ete procede a aucune evaluation de sa valeur absolue: on ne dispose que
de valeurs relatives en rapport avec les durees d'exposition.
Apres irradiation, les ecrans sont retires et on aspire par la perforation faite
au gros bout de l'oeuf, une quantite d'albumine necessaire pour faire redescendre
le blastoderme a quelques millimetres au-dessous du plan de la fenetre. On
referme celle-ci au moyen d'une bande de ruban adhesif et on replace l'oeuf
opere a l'incubateur. Tant que l'embryon n'est pas entierement recouvert par
l'amnios, il est necessaire d'humecter le blastoderme a intervalles reguliers avec
du liquide physiologique, pour eviter la dessiccation.
Controles histologiques
Le controle histologique des sujets d'experience et des temoins a beneflcie
de la decouverte de Mintz (1960) et de Meyer (1960) concernant la richesse des
cellules germinales de Poulet en enclaves glycogeniques P.A.S. ( + ). Clawson &
Transfert de cellules germinates
489
Domm (1963) et Meyer (1964), apres avoir utilise ce resultat pour suivre la
migration des cellules germinales, ont constate que cette richesse en glycogene
diminue a la fin du cinquieme jour d'incubation et s'annule completement dans
le courant du 7e jour. Chez le Poulet et le Dindon, la meme technique, legerement modifiee dans ses temps, peut s'etendre a la mise en evidence des cellules
germinales primordiales contenues dans le feuillet profond du croissant germinal
isole et etale sur lamelle (Reynaud, 1967). Elle va done etre appliquee sous cette
forme a tous les embryons normaux ou irradies recuperes entre le stade de la
ligne primitive (15 h d'incubation) et celui du repli cephalique (21 h). Les
individus recuperes entre 3 et 6 jours d'incubation sont evidemment trop
developpes pour etre examines in toto; aussi, apres avoir ete colores par la
technique preconisee par Meyer (1960), ils sont inclus dans la paraffine et
coupes a 5 fi ou a 7,5 fi. Seule une region troncale comprenant tres largement
les ebauches gonadiques est conservee. Chez les embryons sacrifies ou morts
au-dela du 6e jour d'incubation, on disseque et on conserve l'ensemble du
mesonephros et de la gonade. Celui-ci est fixe au Bouin et colore, apres section,
suivant une technique histologique courante: hemalun de Mayer, hematoxylineeosine ou trichromique de Masson.
Les feuillets entoblastiques provenant de blastodermes irradies au stade de
la ligne primitive (15 h) ont ete compares a des feuillets temoins. Chez ceux-ci,
on trouve constamment de nombreuses cellules germinales primordiales, reconnaissables non seulement a leurs granulations P.A.S. ( + ) mais encore a leur
grande taille, environ double de celle des cellules entoblastiques banales, et a
leur gros noyau montrant souvent deux masses irregulieres de chromatine. En
outre, a partir du stade du prolongement cephalique, la presence de pseudopodes
est frequente chez ces cellules (Fig. 3 A). Chez les blastodermes irradies depuis
quelques heures, on a pu observer les premieres phases de la destruction des
gonocytes. Les cellules germinales sont souvent hypertrophiees, jusqu'a quatre
et cinq fois plus grosses que les cellules entoblastiques. Leurs enclaves glycogeniques et leurs granules vitellins sont tres rarefies (Fig. 3B). On rencontre
meme quelques cellules a l'aspect totalement vide (Fig. 3C). Enfin, chez les
blastodermes parvenus au stade du repli cephalique (21 h), les gonocytes
primordiaux adherant au feuillet germinal profond ne presentent pas de
pseudopodes.
L'examen des ebauches gonadiques d'embryons temoins de 3 a 6 jours
d'incubation revele la presence de nombreux gonocytes primaires, en tous
points comparables aux cellules germinales du croissant de Swift, et donnant
en particulier une intense reaction cytoplasmique P.A.S. positive (Fig. 3D, E).
L'observation des glandes sexuelles chez les temoins de plus de 6 jours d'incubation permet de retrouver de tres nombreux gonocytes primaires ou de tres nombreuses gonies incorpores a l'epithelium et aux cordons germinatifs. Les gonocytes ont pu etre denombres chez six embryons temoins ages de 3 a 7 jours
d'incubation (tableau 1). Les nombres obtenus, auxquels on a adjoint des
490
G. REYNAUD
valeurs trouvees a la suite de denombrements similaires effectues par deux
auteurs (Firket, 1914; Simon, 1960), servent de reference dans Fetude quantitative de Faction sterilisante des rayons u.v. Pour chaque sujet d'experience, il
devient en effet possible de calculer un index de sterilite a partir de la formule
Transfert de cellules germinales
491
(N—X)/N, JVetant le nombre moyen de gonocytes d'un temoin donne et X \e
nombre de gonocytes trouves chez un embryon irradie de meme stade. Les index
les plus eleves correspondent aux sujets dont la sterilisation est la plus poussee.
Le resultat varie suivant la duree de l'irradiation et la nature des filtres
interposes. Les individus irradies pendant moins de 7 min ou a l'aide d'une
combinaison de filtres donnant une raie monochromatique de la bande u.v.
(3120 A), montrent encore quelques gonocytes dans leurs ebauches gonadiques.
Leur index de sterilite ne depasse jamais 0,90. Lorsque le croissant a ete irradie
pendant 7 a 11 min et au moyen d'une large bande d'ultra-violet (2540-3660 A),
la sterilisation est beaucoup plus efficace (Tableau 2). L'index n'est jamais
inferieur a 0,95 et atteint meme l'unite, ce qui correspond a une sterilite absolue
(Fig. 3F, G; Fig. 4A, B). Dans le cas ou des cellules sexuelles persistent, elles
presentent alors frequemment l'aspect anormal — hypertrophie et vide —
Tableau 1. Augmentation du nombre des gonocytes primaires au
cours des premiers jours d Incubation
Age des embryons
temoins
(jours d'incubation)
Nombre de gonocytes
primaires
3
4
5
6
7
335
372 et 416
736
1.150 environ
2.000 environ
FIGURE 3
A. Cellule germinale primordiale adherant au croissant germinal entoblastique d'un
embryon de Poulet normal au stade du prolongement cephalique. Reaction au
P.A.S. et coloration nucleaire par l'hematoxyline au dioxane.
B. Cellule germinale hypertrophiee observee dans le croissant germinal entoblastique, 6 h apres l'irradiation aux u.v. Noter l'appauvrissement en inclusions
cytoplasmiques colorees. Reaction au P.A.S.
C. Deux cellules germinales a aspect 'vide' adherant a l'entoblaste du croissant
germinal, 6 h apres l'irradiation aux u.v. Reaction au P.A.S.
D. Ebauche gonadique d'un embryon de Poulet temoin de 6 jours d'incubation, au
moment de la premiere poussee de cordons germinatifs. Reaction au P.A.S. x 400.
(ep.g, epithelium germinatif; md, mesentere dorsal; st, stroma gonadique.)
E. Gonocyte primaire de Poulet a fort grossissement. Noter la presence dans le
cytoplasme de granules vitellins (en gris clair) a cote des enclaves glycogeniques (en
noir intense). P.A.S.
F. Ebauches gonadiques steriles (g) d'un embryon de 5 jours d'incubation dont le
croissant germinal a ete irradie pendant 10 min au stade a 9 paires de somites.
P.A.S. x80. (ao, aorte; md, mesentere dorsal; mn, mesonephros.)
G. Ebauche gonadique sterile d'un embryon de 5 jours d'incubation, irradie pendant
7 min au stade a 10 paires de somites. P.A.S. x 500. {ep.g, epithelium germinatif
sterile; st, stroma gonadique.)
Index de sterilite
Sexe de l'embryon
9
1
—
1
—
—
—
G, P.A.S.
26
(dont 2
alteres)
0,93
G, P.A.S.
1
(egare)
G, P.A.S.
6
(dont 4
alteres)
0,99
0
G, P.A.S.
17
(dont 6
alteres)
0,98
9
4
10
5
10
4
10
6
10
9
B, H
5
9
5
C93
5
C74
—
0,99
10
C69
1
—
Stade evolutif au moment de
l'irradiation (somites)
Duree de l'irradiation (min)
Age au moment de la
fixation (jours)
Traitement
Nombre de gonocytes
C68
9
6
1
—
C54
0,98
1
4
...
Embryons
Index de sterilite
Sexe de l'embryon
G, P.A.S.
0
0
G, P.A.S.
28
0
G, P.A.S.
B, M
B, M
10
6
10
4
7
5
10
10
10
12
C41
5
C31
9
9
5
7
C13
Stade evolutif au moment de
l'irradiation (somites)
Duree de l'irradiation (min)
Age au moment de la
fixation (jours)
Traitement
Nombre de gonocytes
C8
C5
...
Embryons
(B, Bouin; G, Gendre; H, hemalun; M, Masson.)
Tableau 2. Resultats des experiences d"irradiation
—
0,97
11
G, P.A.S.
11
4
9
C94
1
—
0
G, P.A.S.
11
6
8
C48
9
1
0
B, M
10
7
8
C100
—
G, P.A.S.
33
(dont 2
alteres,
plusieurs
egares)
0,97
7
6
6
C50
—
0,98
G, P.A.S.
20
(dont 3
alteres)
7
6
5
C53
O
r,
2
w
...
1
8
B, H
Age au moment de
la fixation (jours)
Traitement
Rapport N/P des
gonocytes
Sexe
$
B, H
10
Embryons
Nombre de gonocytes ou de gonies
8
_
_
Plusieurs
centaines
11
0,55
0,54
Rapport N/P des
gonocytes
Sexe
11
12
<$
B, H-X, E
_
0,54
152
G, P.A.S.
G, P.A.S.,
H
59
87
5
4
Nombre de gonocytes ou de gonies
Age au moment de
4
la fixation (jours)
Traitement
G, P.A.S.
Embryons
_
6
B, H
16
13
0,55
167
_
G, P.A.S.
5
9
B, H
19
14
0,55
B, M
20
15
£
4
(dont 2
alteres)
0,68
G, P.A.S.
6
$
6
a
B, H
21
16
0,56
G, P.A.S.
H
532
Plusieurs milliers
de gonies
_
G, P.A.S.
H
125
5
(B, Bouin; E, eosine; G, Gendre; H, hemalun; H-X, hematoxyline; M, Masson.)
Tableau 3. Resultats des experiences d'injection
7
<$
B, H-X, E
21
17
$
0,54
$
0,56
G, P.A.S. B, H, H-X,
H
E
650
1500
environ
6
8
U)
494
G. REYNAUD
decrit plus haut pour les cellules observees quelques heures apres l'irradiation
au stade de la ligne primitive. En outre, elles se localisent souvent en position
atypique — pres de la chorde dorsale ou du tube neural — ce qui ne se produit
qu'a titre tres exceptionnel chez les temoins.
Transfert de cellules germinates
495
Les gonades embryonnaires sont toujours normalement developpees malgre
la rarete ou Fabsence des cellules germinales, et on ne constate jamais dans leur
tissu somatique le moindre signe d'alteration cellulaire. Pour les embryons
recueillis au-dela du 6e jour d'incubation, le sexe est parfaitement reconnaissable grace au developpement bilateral des ebauches gonadiques et a leur
structure histologique (Fig. 4A; Tableau 2).
Influence de I'irradiation et de Vouverture de Vceuf sur le
developpement de V embryon
En dehors de la lesion rapide des cellules germinales, les rayons u.v. perturbent la circulation sanguine vitelline dans la region du croissant germinal. Ainsi,
la portion la plus anterieure du sinus terminalis peut faire defaut ou etre plus ou
moins alteree. D'autres fois, c'est la veine vitelline anterieure qui n'est pas
intacte ou dont les veinules afferentes paraissent lesees. Le systeme arteriel
vitellin peut etre atteint de la meme facon dans ses nombreuses arborisations
anterieures (Fig. 4C). Ces anomalies constituent autant d'obstacles a
Tembarquement' des gonocytes dans le reseau vasculaire extra-embryonnaire
et contribuent vraisemblablement a parfaire la sterilisation ulterieure des
gonades. En effet, tant que ces perturbations locales n'empechent pas l'etablissement d'une circulation vitelline fonctionnelle, la sterilite totale des gonades,
acquise dans la plupart des cas, est parfaitement compatible avec une survie
prolongee de l'embryon.
L'irradiation interesse egalement le territoire de Famnios anterieur presomptif
dont le developpement est souvent entrave, ce qui est a l'origine de certains cas
de mortalite precoce. Enfin, la plupart des malformations decrites par Ancel
(1956) comme resultant de l'ouverture de la coquille et du prelevement d'une
FIGURE 4
A. Partie du coelome d'un embryon de 12 jours d'incubation dont le croissant
germinal a ete irradie pendant lOmin au stade possedant 10 paires de somites.
Noter la presence de testicules (0 bien developpes. Trichromique de Masson. x 30.
B. Aspect du testicule du meme embryon, a fort grossissement (x400): les tubes
seminiferes (ts) sont absolument steriles.
C. Effet de l'irradiation aux u.v. sur les ebauches vasculaires vitellines. Embryon
de 3,5 jours d'incubation dont le croissant germinal a ete irradie pendant 10 min.
a la 28e h d'incubation. Laflechemontre l'interruption du sinus terminalis et le
raccourcissement de la veine vitelline anterieure.
D. Embryon de Dindon preleve in vitro au stade du prolongement cephalique et
dont le croissant germinal entoblastique (cr) a ete isole.
E. Aspect de l'entoblaste du croissant germinal de Dindon, etale sur lamelle et
traite in toto par la technique de coloration P.A.S. Lesflechesmontrent des cellules
germinales primordiales. x 150.
F. Echantillon de la suspension cellulaire obtenue par dissociation du croissant
germinal entoblastique. La fleche montre une cellule germinale primordiale. P.A.S.
xl50.
32
JEEM2I
496
G. REYNAUD
fraction d'albumine se retrouvent chez les sujets irradies. Leur frequence (26 %)
est comparable a celle constatee par Ancel pour une ouverture de 1'oeuf intervenant a la 28e h d'incubation, avec toutefois une legere augmentation du taux
particulier des malformations cephaliques (exencephalie, microphtalmie) aux
depens des autres types. La combinaison de ces deux sortes d'effets teratogenes
(ouverture de la coquille et irradiation) rend compte du fort pourcentage de
mortalite des sujets d'experience avant le 4e jour d'incubation (58%), bien
superieur a celui des ceufs temoins ouverts mais non irradies (15%).
Des durees d'irradiation du croissant germinal superieures a l l min accroissent considerablement le taux de mortalite sans assurer une meilleure sterilisation des embryons. D'autre part, il n'apparait pas de relation simple entre la
duree de l'irradiation et l'index de sterilite resultant. Enfin, il ne semble pas
exister pour les differents stades evolutifs traites, un stade particulier ou
l'irradiation seraitplus efficace (cf. Tableau 2). Ainsi, Je choix du stade repose
exclusivement sur la concentration des cellules germinales dans le croissant de
Swift.
En conclusion, on peut dire qu'une sterilite sexuelle totale ou quasi totale
s'obtient par irradiation du croissant germinal avec une large bande de lumiere
ultra-violette pendant 7 a 11 min. La sterilite semble provenir d'une degenerescence massive et rapide des cellules germinales primordiales par hypertrophie
probablement suivie de cytolyse. Cette degenerescence est completee par un
blocage de la migration intra-vasculaire des gonocytes, consecutif a une inhibition de leurs proprietes amiboldes ainsi qu'aux perturbations locales que
l'irradiation apporte au developpement des vaisseaux sanguins vitellins charges
de les vehiculer.
RECUPERATION DES CELLULES GERMINALES PRIMORDIALES
DE DINDON
Elle se fait a partir de l'entoblaste du croissant germinal, au stade ou cette
region du blastoderme ne comporte encore que deux feuillets germinaux. Des
observations histologiques de tres nombreux chercheurs ont montre qu'au stade
du prolongement cephalique, le feuillet profond du croissant germinal de Poulet
contient de nombreuses cellules germinales. Les examens que j'ai personnellement effectues sur des feuillets entoblastiques etales sur lamelle et colores par le
P.A.S. ont confirme cette localisation des gonocytes et m'ont permis de la
retrouver chez le Dindon. En outre, le stade du prolongement cephalique se
prete encore parfaitement a la separation des feuillets du blastoderme selon la
technique de Hara (1961). II a done ete choisi pour la recuperation des gonocytes
primordiaux.
A 24 h d'incubation, le blastoderme de Dindon est separe du vitellus puis
transports dans une solution de Locke depourvue d'ions Ca 2+ qui va faciliter
la separation des feuillets et la dissociation des cellules en diminuant leur
adherence mutuelle. Au moyen de fines aiguilles de tungstene, le feuillet profond
Transfert de cellules germinates
497
du croissant germinal est isole (Fig. 5, 4D). On le decoupe ensuite en une
douzaine de fragments qui seront preleves successivement a l'aide de micropipettes de calibre de plus en plus restreint et dans un milieu constamment depourvu
d'ions Ca 2f . Le produit final consiste en une suspension blanchatre et opalescente qu'on peut examiner directement au microscope et dont on peut prelever
sur lamelle des echantillons qui seront fixes par dessiccation rapide dans un
courant d'air chaud. Cette suspension est conservee a 39 °C jusqu'au moment de
son transfert a un embryon de Poulet dont le croissant germinal a ete prealablement irradie aux rayons u.v.
Mesoblaste
Granules
vitellins
Solution
de locke
sans Ca
Entoblaste
Ectoblaste
Aiguille
de tungstene
Agar
Fig. 5. Separation de l'entoblaste et de l'ectoblaste dans la region du croissant
germinal, au stade du prolongement cephalique. Section sagittale passant par la
ligne primitive. (D'apres Hara.)
L'examen microscopique immediat de suspensions fraiches permet de deceler,
outre des cellules isolees, de petits agregats, des debris cellulaires et des globules
vitellins. L'observation d'echantillons de suspension fixes sur lamelle et traites
suivant la technique de coloration P.A.S. revele la presence de cellules
germinales bien separees des agregats entoblastiques et generalement intactes
(Fig. 4F). Contrairement aux cellules entoblastiques banales, les cellules germinales primordiales ne montrent jamais de mitoses, ce qui est en accord avec les
observations histologiques de Swift (1914), Blocker (1933) et Simon (1960)
relatives aux memes stades embryonnaires et pour deux especes d'Oiseaux.
Dans une suspension obtenue avec un seul croissant germinal, on denombre au
total une centaine de gonocytes primordiaux. Quelques gonocytes, loges entre
les deux feuillets du blastoserme ou partiellement degages de l'entoblaste sont
vraisemblablement perdus ou leses au cours de l'excision, de la fragmentation
ou du pipetage du feuillet. Ces pertes peuvent etre considerees comme negligeables au stade du prolongement cephalique puisque l'examen de feuillets etales
montre qu'a ce stade les gonocytes adherent encore pour la plupart a l'entoblaste (Fig. 4E).
Les techniques de separation des feuillets germinaux, de fragmentation de
l'entoblaste du croissant germinal et de dissociation cellulaire mecanique dans
32-2
498
G. REYNAUD
2+
un milieu prive d'ions Ca , appliquees au blastoderme parvenu au stade du
prolongement cephalique, s'averent done parfaitement adaptees a la recuperation
du materiel germinal des Oiseaux. Elles permettent d'obtenir des suspensions
cellulaires homogenes contenant des gonocytes primordiaux nombreux et bien
isoles.
TRANSFERT DES CELLULES GERMINALES DE DINDON
A L'EMBRYON DE POULET
Technique de transfert
Le transfert des gonocytes se fait par injection des suspensions cellulaires dans
le systeme veineux vitellin du Poulet selon une technique qui s'inspire de celle
elaboree par Weiss & Andres (1952) pour suivre la destinee des cellules embryonnaires disseminees par la circulation sanguine.
Les embryons de Poulet dont le croissant germinal a ete irradie vers la 28e h
d'incubation, e'est-a-dire au stade de 5 a 10 paires de somites, et qui ont survecu
sans presenter d'anomalie vasculaire grave, sont injectes 48 h plus tard, entre
75 et 80 h d'incubation totale. Quelques embryons ont ete injectes plus tard,
mais jamais au-dela du 6e jour d'incubation totale. La bande de papier adhesif
recouvrant la fenetre etant retiree, on fait remonter le sac vitellin au ras de
l'ouverture en deposant quelques gouttes de Locke a l'interieur de l'ceuf, puis
on repere a la loupe binoculaire une veinule peripherique presentant un calibre
en rapport avec le diametre de la pointe de l'aiguille servant aux injections
(environ 50 p). A l'aide d'une seringue a molette reliee par un tube souple a une
aiguille de verre, on preleve une partie de la suspension cellulaire maintenue en
reserve et on en injecte environ 0,5 mm3, sous pression reguliere, dans le vaisseau
choisi. Si la pointe de l'aiguille est bonne, la perforation de la membrane vitelline
et celle de la paroi vasculaire sont faciles; en outre, cette paroi n'est pas
dechiree, de sorte que l'hemorragie est tres reduite apres le retrait de l'aiguille.
Apres injection, on debouche le petit trou qui avait ete pratique dans la coquille
pour crever la chambre a air et, par aspiration, on elimine l'exces de liquide de
facon a faire redescendre l'embryon au-dessous du plan de la fenetre. On obture
une nouvelle fois la coquille avec une bande de papier adhesif et l'ceuf est enfin
remis dans l'incubateur avec sa fenetre dirigee vers le haut. On le laissera en
incubation aussi longtemps que survivra l'embryon et, durant ce delai, il sera
examine et retourne trois fois par jour.
Le volume maximal de liquide qu'il est possible d'injecter sans dommage
dans l'appareil circulatoire d'un embryon de 3 jours etant d'environ 0,5 mm3 et
le volume final de Locke contenant les cellules en suspension avoisinant 5 mm3,
on ne peut transferer a chaque receveur que le l/10e de la suspension totale.
Dans ce cas, si la suspension n'etait obtenue qu'a partir d'un seul croissant
germinal comportant approximativement une centaine de cellules germinales,
une simple injection ne transfererait en moyenne qu'une dizaine de ces cellules.
Devant l'impossibilite d'appliquer une methode simple et inoffensive permet-
Transfert de cellules germinates
499
tant d'isoler in vitro le materiel germinal des cellules somatiques, 1'unique moyen
mis en oeuvre pour augmenter le nombre de gonocytes par dose injectable fut
d'accroitre la densite cellulaire globale des suspensions. Ainsi, cinq croissants
germinaux de Dindon ont ete dissocies dans 5 mm3 de Locke, ce qui porte a
environ 500 le nombre total des gonocytes en suspension et, si la dispersion est
bonne, a cinquante environ le nombre de gonocytes par fraction injectable. Les
gonocytes se rencontrant dans la proportion de 1 % par rapport aux cellules
entoblastiques du croissant, on peut estimer qu'une dose injectable contient en
moyenne, outre les spheres vitellines, quelque 5.000 cellules.
Les differentes anomalies provoquees par une injection intraveineuse, tels
qu'ils ont ete decrits par Weiss & Andres (1952) (congestion du cceur et des gros
vaisseaux, extravasion de sang dans le ccelome extra-embryonnaire, rupture de
vaisseaux capillaires, etc.), ont ete retrouves au cours des presentes experiences.
En outre, au moment du retrait de l'aiguille, une petite hemorragie se produit
frequemment mais elle est stoppee dans la plupart des cas par une constriction
rapide de la paroi du vaisseau. Lorsque celui-ci a ete plus gravement endommage, on observe la formation de deux expansions symetriques de la paroi du
sac vitellin venant recouvrir le point de lesion. Ce phenomene, allant de pair
avec une hemorragie importante, est suivi a breve echeance de la mort de
Pembryon. Dans tous les cas ou l'embryon surmonte la phase critique des
troubles post-operatoires, le retour a la normale intervient tres rapidement.
Toutefois, aucun des embryons traites n'a depasse le stade de 1'eclosion.
Controles histologiques
Les embryons qui ont survecu quelques jours apres l'injection ont ete fixes
le plus tot possible apres leur mort et traites suivant leur age par la technique de
coloration P.A.S., egalement valable pour caracteriser les gonocytes primaires
de Dindon (fig. 6 A), ou par une technique histologique courante (hematoxylineeosine, hemalun de Mayer ou trichromique de Masson). Dix-sept d'entre eux,
dont les deces s'echelonnent sur toute la duree de l'incubation post-operatoire,
ont ete examines avec soin du point de vue du peuplement des gonades
(Tableau 3). Parmi ces dix-sept embryons ages de 4 a 21 jours d'incubation,
seize presentaient des cellules germinales (gonocytes primaires ou gonies) en
nombre tres variable suivant le stade evolutif atteint mais jamais inferieur a
cinquante et pouvant aller, chez les sujets les plus ages, jusqu'a plusieurs milliers
(Fig. 6B-F). Le dix-septieme, fixe au 6e jour d'incubation, ne presentait que
quatre cellules germinales dont deux alterees. Ce dernier resultat peut etre
considere comme une sterilisation simple et s'oppose aux seize premiers cas
chez lesquels les gonocytes et les gonies rencontres sont toujours nombreux et
d'aspect parfaitement normal. Pour ces seize cas, un repeuplement eventuel des
glandes genitales a partir de quelques gonocytes primordiaux epargnes par les
rayons u.v. parait exclu puisqu'un tel phenomene n'a jamais ete observe chez
les individus qui n'ont subi que l'irradiation.
500
G. REYNAUD
Pour etablir avec certitude la provenance des cellules sexuelles, il a fallu
comparer les caracteristiques cellulaires (diametres cytoplasmique et nucleaire,
rapport nucleoplasmique) des gonocytes de Poulet a celles des gonocytes de
Dindon. Les mesures ont ete effectuees d'une part dans le croissant germinal, et
dans les ebauches gonadiques d'autre part (Tableau 4). Du fait de l'existence de
Transfert de cellules germinales
501
zones de chevauchement pour les diametres cytoplasmique et nucleaire des
deux especes, le recours au rapport nucleoplasmique qui est une constante
cellulaire specifique, s'est avere indispensable. Simon (1960) avait trouve Ja
valeur 0,72 pour le rapport nucleoplasmique lineaire des gonocytes primaires de
Poulet. Cette valeur a ete confirmee en faisant, chez des embryons temoins, la
moyenne d'une cinquantaine de mesures. Chez le Dindon, la moyenne obtenue
pour un meme echantillonnage est egale a 0,55.
Chez chacun des embryons de Poulet recuperes apres avoir rec.u une injection
de cellules de Dindon, une quinzaine de gonocytes primaires ont ete mesures
pour revaluation de leur rapport nucleoplasmique. A l'exception du specimen
dont les ebauches gonadiques ne contiennent que quatre gonocytes, ce rapport
se rapproche constamment de 0,55, c'est-a-dire de la valeur speciflque du
Dindon (cf. Tableau 3). Malheureusement, le rapport nucleoplasmique n'a
permis d'identifler les cellules germinales que dans 9 cas sur 17 car il n'est plus
utilisable a partir du moment ou les gonocytes commencent a subir la periode
de multiplication active donnant naissance aux gonies, laquelle debute des le
huitieme jour d'incubation chez les sujets femelles et vers le treizieme jour chez
les males. En effet, les cellules qui entrent en mitose ou qui viennent de se diviser
presentent des rapports nucleoplasmiques aberrants. Ensuite, chez les femelles,
les ovogonies entrent rapidement dans la phase d'accroissement conduisant aux
ovocytes primaires, ce qui rend encore tres difficile la determination de leur
origine speciflque. Une indication sera peut-etre fournie par le diametre
cellulaire de ces ovocytes. Chez les Poulets parvenus a la veille de l'eclosion, ce
diametre ne depasse jamais 20 /i, alors que tous les ovocytes primaires observes
jusqu'ici dans les ovaires des embryons injectes ont un diametre constamment
egal ou superieur a 20 ft (Fig. 6E).
II a ete possible de denombrer les gonocytes primaires des sujets experimentaux sur des preparations traitees au P.A.S. (Tableau 3). J'ai constate que le
FIGURE 6
A. Ebauche gonadique d'un embryon de Dindon temoin de 7 jours d'incubation.
Noter la presence de gonocytes contenant des granules P.A.S. ( + ) a Pinterieur de
Pepithelium germinatif (ep.g.) x 500. {md, mesentere dorsal; st, stroma gonadique.)
B. Embryon de Poulet de 4 jours d'incubation, injecte a 3 jours et dont les ebauches
gonadiques contiennent des gonocytes de Dindon. P.A.S. x 500. (ao, aorte; ch,
chorde dorsale; les fleches montrent deux gonocytes.)
C. D. Gonocytes primaires de Dindon observes a fort grossissement chez le meme
specimen. Noter les granules P.A.S. ( + ) bien distincts dans la cellule de la figure D.
E. Ovocyte primaire de grande taille ayant commence sa phase d'accroissement dans
un ovaire de Poulet de 20 jours et se trouvant entoure par les futures cellules folliculeuses (/). Trichromique de Masson.
F. Testicule gauche d'un embryon de Poulet mort en cours d'eclosion apres avoir
recu, a 3 jours d'incubation, une injection de gonocytes primordiaux de Dindon.
Noter l'abondance des spermatogonies a Pinterieur des tubes seminiferes. Hemalun
de Mayer, x 250.
11
15
Diametre nucleaire
9,18
9
10, 12,5
10,5
7
8
Poulet
Dindon
0,60
0,47
0,72*
0,55
6,4*
7,5
9
15
Limite
infere
10,6*
12,5
Diametre nucleaire
8,53*
8,5*
9
9,5
Rapport N/P
Sexe
0,56
¥
315
Plusieurs
centaines
12
6
Quelques 14001500
cellules
dans
ovaire
droit
19
4
0
19
11
0
5
5
0
9
0
12
0
19
6
4
Age au moment de
l'injection (jours)
Age au moment de
la fixation (jours)
Nombre de cellules
germinales dans les
ebauches gonadiques
4
10
Embryons
6
15*
23
Diametre cellulaire (/*)
11,25*
11,18*
17,75
17,5
6
Limite
supere
Valeur
Moyenne
dominante
Ebauches gonadiques
Tableau 5. Resultats des experiences d'injection differee
Tirees des travaux de Simon (1960).
20
31
Limite
supere
11
17
Moyenne
Poulet
Dindon
Valeur
dominante
Diametre cellulaire (/*)
15,3
15
22,75
22,5, 25
Limite
infere
Croissant germinal extra-embryonnaire
Tableau 4. Dimensions cellulaires et rapports nudeoplasmiques lineaires des gonocytes de Poulet et de Dindon
mesures dans le croissant germinal et dans les ebauches gonadiques
>
m
O
Transfert de cellules germinales
503
nombre de gonocytes rencontres dans les ebauches gonadiques des embryons
injectes est d'autant plus grand que l'embryon est plus age. Si Ton admet que
les differents individus recoivent au moment de Pinjection et fixent dans leurs
ebauches gonadiques des nombres equivalents de gonocytes primordiaux de
Dindon, on peut affirmer qu'il se produit comme chez les temoins (Tableau 1),
une augmentation de Feffectif des gonocytes au cours du temps. Chez les
embryons receveurs, la multiplication cellulaire s'opere a partir d'une population
de gonocytes theoriquement reduite de moitie, a savoir une cinquantaine de
gonocytes injectes en moyenne au lieu de la centaine de cellules germinales
originelles. Dans la limite des denombrements effectues, il apparait qu'une
regulation intervient dans la population de cellules germinales transferees.
Les modalites de cette regulation seront precisees ulterieurement.
Ces trois series de constatations relatives a l'abondance des cellules germinales
chez les individus injectes, a leurs caracteres morphologiques specifiques et a
Taccroissement de leur effectif, permettent de conclure que dans 16 cas sur 17,
les glandes genitales steriles du Poulet ont ete colonisees par des cellules germinales de Dindon. Cette interpretation rejoint la conclusion de Simon (1960)
suivant laquelle 'la competence de la region genitale [de l'embryon de Poulet]
a fixer des gonocytes peut se manifester vis-a-vis de cellules germinales, appartenant a une espece d'Oiseau totalement differente'.
Des experiences d'injection differee ont permis de preciser la duree de cette
competence et de determiner le stade evolutif le mieux adapte au transfert des
gonocytes. Apres l'irradiation aux rayons u.v. du croissant germinal du Poulet,
j'ai retarde l'injection pour ne la pratiquer qu'au 4e, 5e ou 6e jour d'incubation
totale (Tableau 5). Lorsque l'injection est faite a la fin du 4e jour d'incubation
(entre 95 et 100 h), les ebauches gonadiques presentent ulterieurement de nombreuses cellules germinales. Chez un specimen dont on a pu mesurer les rapports
nucleoplasmiques des gonocytes primaires, leur moyenne a donne 0,56, se
montrant une nouvelle fois parfaitement assimilable au rapport specifique des
gonocytes de Dindon. Au contraire, lorsque l'injection est faite plus tard, les
embryons receveurs sont ensuite steriles dans la plupart des cas. La sterilite devient
constante chez les embryons injectes dans le courant du 6e jour d'incubation:
la sterilisation provoquee par les rayons u.v. n'est suivie d'aucun repeuplement
germinal homo- ou heterospecifique. Ces resultats suggerent que la competence
des territoires sexuels presomptifs, definie par Simon (1960) comme 'un
caractere intrinseque des tissus qui exerceraient une attraction specifique sur les
cellules germinales', disparait au cours du 5e jour d'incubation chez l'embryon
de Poulet. II est interessant de noter que cette periode coincide precisement chez
cette espece avec la premiere poussee de cordons germinatifs, c'est-a-dire au
moment ou l'epithelium germinatif marque une premiere etape dans sa differenciation.
Sur le plan de la pratique experimentale, il ressort que l'injection doit etre
faite a un stade ou les vaisseaux vitellins sont deja bien formes et sufinsamment
504
G. REYNAUD
ramifies (au plus tot le 3e jour d'incubation) et ou, d'autre part, les gonades sont
encore competentes. En outre, j'ai note que le taux de mortalite des embryons
temoins s'abaisse tres sensiblement entre le 3e et le 5e jour de Fincubation. Ce
regroupement de donnees permet d'etablir que le moment le plus favorable au
transfert des gonocytes se situe entre la fin du 4e et le debut du 5e jour, c'est-adire autour de la lOOe h d'incubation. Des injections en serie effectuees dans
ces nouvelles conditions, ce qui represente un delai supplemental re d'une
vingtaine d'heures par rapport aux operations courantes de transfert decrites
ci-dessus, permettront peut-etre d'ameliorer le pourcentage general de survie
des embryons traites et d'obtenir quelques eclosions.
CONCLUSIONS
Les presentes recherches ont essentiellement apporte jusqu'ici de nouvelles
preuves experimentales aux resultats acquis par differents auteurs.
Les experiences d'irradiation et les observations histologiques qui s'y rapportent ont demontre une nouvelle fois la localisation exclusive des cellules
germinales de Poulet dans le croissant de Swift au cours d'une periode determinee de Fembryogenese, permettant la destruction efficace des cellules au
moyen des rayons u.v. convenablement choisis et doses. La sterilisation
sexuelle prolongee obtenue grace a cette technique semble prouver de nouveau
que les cellules somatiques de la gonade sont incapables de se transformer en
cellules germinales, du moins pendant toute la duree de Fincubation. Le fait que
les ebauches gonadiques steriles soient bien developpees permet egalement de
reaffirmer que les cellules germinales primordiales n'interviennent pas dans la
croissance de la gonade et dans sa differentiation.
Les experiences de desagregation mecanique des feuillets blastodermiques
ont permis de verifier que les cellules germinales primordiales sont pour la
plupart contenues dans le feuillet profond du croissant germinal, au stade du
prolongement cephalique. L'examen des suspensions cellulaires obtenues par ce
traitement revele que les cellules germinales ne sont apparemment pas lesees
par les operations de dissociation et qu'elles sont en general bien isolees des
cellules entoblastiques banales.
Le controle histologique des embryons de Poulet qui ont recu une injection
intraveineuse de cellules de Dindon montre que les gonocytes primordiaux
introduits secondairement dans la circulation sont encore capables de coloniser
des ebauches gonadiques, lesquelles demeurent competentes jusqu'au debut du
5e jour d'incubation. Ce fait constitue un nouvel argument en faveur de la
these de la migration intravasculaire des cellules germinales chez les Oiseaux
et precise les resultats obtenus par Dubois (1964) concernant l'etude in vitro de
la competence des ebauches gonadiques du Poulet. Enfin, il apparait que les
gonocytes de Dindon sont susceptibles de se maintenir a l'interieur des
ebauches gonadiques du Poulet, de s'y multiplier et d'y commencer leur maturation.
Transfert de cellules germinates
505
RESUME
1. Afin d'analyser ies rapports existant entre les cellules somatiques et les
cellules germinales chez les Oiseaux, des injections de gonocytes primordiaux de
Dindon ont ete faites dans l'appareil circulatoire d'embryons de Poulet ayant
subi la destruction prealable de leur croissant germinal.
2. La sterilisation sexuelle est obtenue par irradiation aux rayons u.v. du
croissant germinal chez des embryons de Poulet ayant de 5 a 10 paires de
somites. Chez certains de ces embryons, recuperes et fixes au-dela du 3e jour
d'incubation, les ebauches gonadiques se montrent absolument depourvues de
cellules germinales. La sterilite sexuelle ainsi provoquee n'empeche ni l'organogenese des gonades, ni leur differentiation.
3. Les gonocytes de Dindon destines a 1'injection sont preleves par dissociation d'une portion du feuillet entoblastique renfermant le croissant germinal,
au stade du prolongement cephalique. Us sont mis en suspension dans une
solution physiologique depourvue d'ions Ca2+ pour prevenir les reagregations.
Apres injection d'une petite quantite de la suspension cellulaire dans une veinule
vitelline d'un embryon de Poulet de 3 jours, prealablement sterilise par irradiation, on constate que les gonocytes de Dindon, identifiables grace a leur rapport
nucleoplasmique, sont capables de coloniser Jes ebauches gonadiques de J'hote.
Us y proliferent ensuite en retablissant une population cellulaire numeriquement
et morphologiquement normale que J'on peut suivre, dans les meilleurs cas,
jusqu'au terme de l'incubation. Aucune eclosion n'a pu etre obtenue jusqu'ici
chez les embryons operes.
4. Des experiences d'injection differee montrent que la competence des
ebauches gonadiques steriles du Poulet a fixer des cellules germinales de Dindon
introduces experimentalement dans la circulation sanguine ne se manifeste plus
apres le 5e jour d'incubation.
SUMMARY
The transfer of turkey primordial germ cells to chick embryos by
intra-vascular injection
1. In order to investigate the relationship between somatic cells and germ cells
in birds, injections of primordial germ cells of turkey embryos were made into
the blood stream of chick embryos in which the germinal crescent had been
previously irradiated with ultra-violet rays.
2. The germinal crescents were irradiated in chick embryos from the 5-somite
to the 10-somite stage. In some of these embryos, which were removed and
fixed after the third day of incubation, no primordial germ cells were found in
the gonads. The absence of primary gonocytes prevents neither the organogenesis of the gonad nor its sexual differentiation.
3. Entoblastic layers including the germinal crescent of head-process-stage
turkey embryos were dissociated in calcium-free Locke solution. A small
506
G. REYNAUD
amount of the resulting suspension was then injected into a yolk-sac vein of a
3-day-old chick embryo previously sterilized by ultra-violet irradiation. The
germ cells of the turkey, identified by their nucleocytoplasmic ratio, were able
to colonize the gonads of the host, to proliferate and to restore a normal germcell population. The length of survival ranged from immediate death to hatching
but none of the operated embryos survived after hatching.
4. By means of progressively delayed injections, it was possible to show that
the competence of the sterile gonads of chick embryos to retain primordial
germ cells of turkey embryos experimentally introduced into the blood stream
disappears after the fifth day of incubation.
Ce travail a ete realise en partie au Laboratoire Hubrecht d'Utrecht grace a une bourse du
Centre National de la Recherche Scientifique.
Que le Professeur P. D. Nieuwkoop et toute son equipe trouvent ici l'expression de ma
profonde gratitude.
TRAVAUX CITES
P. (1956). Recherche sur les effets teratogenes de Fouverture de l'ceuf de Poule au
cours des trente-quatre premieres heures de l'incubation. Archs Anat. microsc. Morph. exp.
45, 203-17.
BENOIT, J. (1930). Contribution a l'etude de la lignee germinale chez le Poulet. Destruction
precoce des gonocytes primaires par les rayons ultra-violets. C. r. Seanc. Soc. Biol. 104,
1329-31.
BLACKLER, A. W. (1962). Transfer of primordial germ cells between two subspecies of
Xenopus laevis. J. Embryol. exp. Morph. 10, 641-51.
BLOCKER, H. W. (1933). Embryonic history of the germ cells in Passer domesticus (L.).
ActaZool. 14, 111-52.
CLAWSON, R. C. & DOMM, L. V. (1963). Development changes in glycogen content of primordial germ cells in chick embryo. Proc. Soc. exp. Biol. Med. 112, 533-7.
DANTCHAKOFF, V. (1929). Experimented Beweise der Keimbahn beim Vogel. Verh. anat.
Ges., Tiibingen 38, 85-90.
DANTCHAKOFF, V. (1931a). Keimzelle und Gonade. I. Von der entodermalen Wanderzelle
bis zur Urkeimzelle in der Gonade. Z. Zellforsch. mikrosk. Anat. 13, 448-510.
DANTCHAKOFF, V. (19316). Keimzelle und Gonade. III. Die entodermale Wanderzelle als
Quelle der Keimzellen. Z. Zellforsch. mikrosk. Anat. 14, 376-84.
DANTCHAKOFF, V. & LACASSAGNE, A. (1932). Destructions localisees, dans l'embryon de
Poulet, au moyen du rayonnement du radon, pour l'etude experimental des cellules
sexuelles. C. r. Seanc. Soc. Biol. 109, 845-8.
DUBOIS, R. (1962). Sur la sterilisation de l'embryon de Poulet par irradiation aux rayons X du
croissant germinal extra-embryonnaire. Archs Anat. microsc. Morph. exp. 51, 85-94.
DUBOIS, R. (1964). Sur l'attraction des cellules germinales primordiales par la jeune region
gonadique de l'embryon de Poulet. C. r. hebd. Seanc. Acad. Sci., Paris 258, 3904-7.
DULBECCO, R. (1946). Sviluppo di gonadi in assenza di cellule sessuali neU'embrione di polio.
Sterilizzazione completa medianti esposizione a raggi gamma allo stadio di linea primitiva.
Atti Accad. naz. Lincei Re. (8). 1, 211-13.
ERRERA, M. (1959). Effects of radiations on cells. In J. Brachet and A. E. Mirsky, The Cell,
vol. i, 695-740. New York: Academic Press.
FIRKET, J. (1914). Recherches sur l'organogenese des glandes sexuelles chez les Oiseaux.
Archs Biol, Paris 29, 201.
GOLDSMITH, J. B. (1928). The history of the germ cells in the domestic fowl. /. Morph. 46,
275-315.
ANCEL,
Transfer! de cellules germinales
507
HARA, K. (1961). Regional neural differentiation induced by prechordal and presumptive
chorda! mesoderm in the chick embryo. These Doct. Sc.: Utrecht.
HUKAO, S. (1937). Notes on an experimental study in relation to the early localization of
primordial germ cells in the chick embryo. Sci. Rep. Tohoku Imp. Univ. (4), 11, 265-78.
HULPIEU, H. (1925). Observations of the definitive sex cells of the chick. Proc. Okla. Acad.
Sci. 5, 70-4.
MEYER, D. B. (1960). Applications of the periodic acid-Schiff technique to whole chick
embryos. Stain Techno). 35, 83-9.
MEYER, D. B. (1964). The migration of primordial germ cells in the chick embryo. Devi Biol.
10, 154-90.
MINTZ, B. (1960). Formation and early development of germ cells. Symp. Germ Cells and
Develop, pp. 1-24. Inst. Int. d'Embryol. and Fondazione A. Baselli.
NUSSBAUM, M. (1880). Zur Differenzierung des Geschlechts im Thierreich. Arch, mikrosk.
Anat. 18, 1.
REAGAN, F. (1916). Some results and possibilities of early embryonic castration. Anat. Rec.
11, 251-67.
REYNAUD, G. (1967). Mise en evidence des cellules germinales primordiales dans les jeunes
blastodermes d'Oiseau par la technique de coloration P.A.S. C. r. hebd. Seanc. Acad. Sci.,
Paris 265, 1636-9.
SIMON, D. (1960). Contribution a l'etude de la circulation et du transport des gonocytes
primaires dans les blastodermes d'oiseaux cultives in vitro. Archs Anat. microsc. Morph.
exp. 49,93-176.
SLMONSEN, M. (1955). Induced tolerance to heterologous cells and induced susceptibility to
virus. Nature, Lond. 175, 763-4.
SWIFT, C. H. (1914). Origin and early history of the primordial germ cells in the chick.
Am. J. Anat. 15, 483-516.
WEISMANN, A. (1885). Die Continuitat des Keimplasmas als Grundlage einer Theorie der
Vererbung. Jena: G. Fischer.
WEISS, P. & ANDRES, G. (1952). Experiments on the fate of embryonic cells (chick): dissemination by the vascular route. /. exp. Zool. 121, 449-88.
WOODGER, J. H. (1925). Observation on the origin of the germ cells of the fowl (Gallus
domesticus) studied by means of their Golgi bodies. Q. J. microsc. Sci. 69, 445-62.
(Manuscrit regu le 28 octobre 1968)