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Rétrotranscription Cette étape du cycle est réalisée par une enzyme virale polymérase Rnase H L'enzyme virale = reverse transcriptase p66 hétérodimère : p66/P51 en forme de main 1 mutation toutes les 1000 ou 10 000 bases synthétisées ADN p51 Les activités enzymatiques de la RT sont: ADN-polymérase/ ARN-dépendante ADN-polymérase/ ADN-dépendante Et Rnase H Inhibiteurs de la RT Analogues nucléosidiques ou inhibiteurs non nucléosidiques Cinétique de la synthèse du double brin d’ADN = OPERATION COMPLEXE 1ère étape: initiation du brin (-) d’ADN R ARN I I ADN R’ 2ème étape: ARN I I ADN saut de brin la RT s’attache et se détache (erreur) 3ème étape: dégradation de la matrice d’ARN par la RNAse H U5 PBS I I U5’ PBS I I gag pol I R I I ARN t amorce gag pol env U3 I R I I R’ PPTc PBS ARN ADN U3 env I I gag pol U5’ PPT env U3 R I I I U3’ R’ U5’ Cinétique de la synthèse du double brin d’AND PPTc U3 4ème étape: initiation du brin (+) d’ADN 5ème étape: saut de brin 6ème étape: provirus linéaire synthétisé avec les 2 LTR PPT ADN U3 ADN ADN I I PBS’ R I pol U3’ env U5 PBS I R’ U5’ I I U5 PBS PBS’ U3 gag R R U5 PBS I I I I I gag gag pol pol U3’ env U3 env I I R’ U5’ I I R I I U5 I Variabilité des virus La multiplication du virus ne se fait pas de manière fidèle, chaque nouveau virus n’est pas exactement identique à son parent Comme beaucoup de nouveaux virus sont produits chaque jour, cela provoque de la diversité et différentes familles de virus coexistent dans l’organisme 30 % 50% 8O% 7% 10% 5% en quelques jours…. en quelques semaines…. Mélange en équilibre instable De virus génétiquement différents mais voisins Réponse Immunitaire Sélection d’un virus qui échappe à la réponse immunitaire Traitement par des analogues des bases naturelles: nucléosidiques ou nucléotidiques Analogues de : •Analogues nucléosidiques •Thymidine •AZT (Rétrovir) •d4T (Zérit) •FLT (Alovudine) •Adénine •ddI (Videx) •Cytosine •ddC (Hivid) •3TC (Epivir) •FTC (Emtricitabine) •Guanine •ABC (Ziagen) •DAPD •Analogues nucléotidiques •Adéfovir •TDV (Viread) schéma de l' AZT L'AZT (azidothymidine) est un analogue de la Thymidine. . 3’ N3 N3 Synthèse d’ADN Si on incorpore un analogue, il n’y L’extrémité aura plus d’extrémité OH libre permet OH avec incorporation d’une base===> naturelle arrêt de la synthèse du brin d’ADN l’ incorporation d’une nouvelle base naturelle Les analogues des bases naturelles sont: des terminateurs de chaînes Mécanismes de la résistance aux analogues 1- diminution d’affinité de l’analogue NON 2- excision de l’analogue après incorporation O DNA NH N OH O P O O H OH N3 H H H O Liaison au récepteur et fusion Décapsidation ARN Phase précoce du cycle réplicatif Rétrotranscription ADN Intégration Transcription et épissage Phase tardive du cycle réplicatif Traduction Bourgeonnement Maturation Intégration du Provirus dans l’ADN cellulaire 1 - L’intégrase clive les extrémités du provirus Après passage de la membrane nucléaire Il va y avoir intégration du provirus dans l'ADN cellulaire grâce à une enzyme virale => l’ intégrase virale U3 R U5 CA TT GTAA AATG U3 R U5 TT AC 2 - L’intégrase clive le chromosome cellulaire UIOOPQSDFGHJK UIOOPQSDFGHJK 3 - L’intégrase met en contact l’ADN virale et cellulaire Mais se sont les enzymes cellulaires qui réparent l’ADN AATG U3 R U5 UIOOPQSDFGHJK AC U3 R U5 CA UIOOPQSDFGHJK GTAA Anti-intégrase Transcription des ARNm viraux L’ADN virale étant intégré dans l’ADN cellulaire cette étape de transcription va être réalisée grâce aux ARN polymérases cellulaires: le virus “profite” de toute la machinerie cellulaire Les ARNm viraux ont: Un seul site de déclenchement (LTR5') et de fin de la transcription (LTR3') mais l'épissage (découpages et réassemblages) permet d’obtenir de nombreux ARNm codant pour différentes protéines virales Start de transcription ARNm Stop de transcription Traduction des protéines de structure Polyprotéines gag et gag-pol Polyprotéines immatures => maturation par la protéase virale après l’étape de bourgeonnement (cf après) Polyprotéine env Subit les modifications posttraductionnelles commes une autres protéines cellulaires Cad glycosylation et clivage par une protéase cellulaire (dans l’appareil de Golgi) Clivage protéolytique des précurseurs gag et gag-pol La protéase virale est absolument essentielle pour la maturation du virion Elle clive les polyprotéines gag et gag-pol Elle est active sous forme dimérique p17 p24 p7 p6 p17 p24 p7 p6 Pr RT INT Antiprotéases Protéase virale dimérique (bleu et rouge) L’inhibiteur de protéase (en jaune) se fixe sur le site actif de l’enzyme Maturation du virion Microscopie électronique Nouveaux virus La cellule CD4+ Aspects quantitatifs de la multiplication virale (malades entre 50 et 400 CD4/mm3) Demi-vie du virus Virémie Production de particules virales Durée d’un cycle de réplication 6 heures 104 - 107 virus/ml 109 - 1011 /jour 1,5 jours
