II.1 - Biotechnologies Animales - Culture cellulaires

•Passage d’un organisme à des cellules isolées dans un
milieu et des conditions de croissance artificiels
•Intérêts et limites
•Définition de «in vitro »
Les cultures cellulaires

Notion de stérilité
Culture ne contenant que les cellules que l’on souhaite y trouver
et aucun autre organisme (autre cellule eucaryote, bactéries, champignons, levure, virus)
Pourquoi?
•Induit du stress par déprivation (le contaminant prolifère plus vite et consomme
les nutriments du milieu)
•Stress par des signaux de danger qui modifient les réactions d’une cellule
Les contaminants les plus courants
•Les bactéries de notre peau, E. Coli, S. Aereus
•Levures
•Mycoplasmes
•Autres types cellulaires (quand un même expérimentateur travaille au même endroit
avec plusieurs types cellulaires)
Eviter les contaminations
•filtre 0,22 mm (ne laisse passer que les virus)
•autoclavage

Une pièce de culture cellulaire
Laboratoire type L2 assurant la protection
des manipulateurs et de l’environnement
contre les risques biologiques
•SAS d’entrée
•Les hottes sont des PSM (poste de sécurité
microbiologique)
•Une différence de pression limite les échanges d’air
L’air est filtré avant d’être rejeté vers l’extérieur

Détecter une contamination
•Le plus souvent la contamination se perçoit à cause de la turbidité du milieu et de sa
couleur
Le contaminant (bactérie ou levure) prolifère plus vite que des cellules de
mammifères
Comme il est plus petit, il va flotter dans le milieu et lui donner un aspect opalescent
La plupart des milieux de culture incluent un indicateur de pH
Généralement la présence de bactéries acidifie le milieu, celle des levures le rend
plus basique
•La contamination par les mycoplasmes est plus pernicieuse. Ce sont des parasites
intracellulaires, capables de coloniser toutes les cellules de mammifère, avec les
mêmes conséquences que toute autre contamination. Pour déceler leur présence, il
faut une microscopie à fluorescence, qui permettra de voir les noyaux des parasites
dans le cytoplasme des cellules, ou un kit de détection (par technique ELISA ou par
PCR) commercial

Les milieux de culture doivent répondre aux exigences multiples et complexes des
cellules eucaryotes:
-eau
-ions minéraux nombreux et variés à des concentrations adéquates. L'osmolarité
du milieu doit être celle du sérum physiologique
-source de carbone et d'énergie
-source d'azote : acides aminés obligatoirement
-facteurs de croissance
-gaz :le dioxygène, les cellules étant aérobies strictes
-pH maintenu constant vers 7,4
On évite la multiplication microbienne par l'ajout d'antibiotiques.
Les milieux de culture