La GFP green fluorescent protein

La GFP
green fluorescent protein
Qu'est ce que la GFP ?
Green Fluorescent Protein :
c'est une protéine
fluorescente verte.
Elle est issue d'une méduse
appelée Aequorea victoria,
qui vit dans les eaux du
Nord-Ouest Pacifique.
Découverte & Description
• La GFP a été décrite pour la première fois en 1962.
• Elle est constituée de 238 acides aminés. Le chromophore
(centre actif responsable de la fluorescence) est contitué par
les chaînes latérales d'une glycine, une tyrosine et une sérine.
• La GFP non modifiée, dite sauvage (wild type : wGFP) a deux
maxima d'excitation. Le premier se trouve avec une longueur
d'onde de 395 nm (lumière UV), le deuxième à 475 nm
(lumière bleue). La longueur d'onde d'émission maximale est à
504 nm.
• Il a été montré que la GFP fusionnée à une protéine peut
aider le repliement de cette dernière lors de son expression.
Structure de la GFP
11 feuillets β disposés en
parallèle, formant une cage
1 hélice α contenant le
chromophore
Fluorophore de la GFP
• Stable jusqu'à 65°C pour des pH allant de 5.5 a
12
• Les acides aminés 2 à 229 sont impliqués dans la
réaction de fluorescence
• Le chromophore est constitué des 3 acides
aminés :
Ser65-Tyr66-Gly67
• La fluorescence ne nécessite ni substrat ni cofacteur
• Dans le chromophore le remplacement de Ser65
par Thr65 conduit au mutant GFP65T excitable a
490nm et 6 fois plus fluorescent
Mécanisme de la GFP
Utilisation en génie génétique :
Par génie génétique on peut fusionner son gène in vitro
au gène d'une protéine que l'on souhaite étudier.
Le gène recombinant est ensuite réintroduit dans des
cellules ou un embryon, qui va alors synthétiser la
protéine fluorescente. On pourra alors l'observer à
l'aide d'un microscope à fluorescence.
Cette méthode permet d'étudier les protéines dans leur
environnement naturel : la cellule vivante.
Autres sources de la
GFP
• Il existe maintenant différentes variantes de la GFP
qui on étés obtenus en modifiant celle-ci par
ingénierie génétique.
• Il existe également d'autre protéines fluorescentes
issues d'autre organismes que A.Victoria :
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CFP : fluorescence cyan (bleu-vert)
YFP : fluorescence jaune (Y pour yellow)
BFP : "Blue fluorescent protein"
DsRed : fluorescence rouge. C'est en réalité une
protéine différente, issue d'un corail.
Travail réalisé par :
Maïté KELLAL
Pauline VANDENBROCK
Elèves de BTS Bio Analyses et Contrôles
Octobre 2006