Equipe FA

Université Lille 1, Sciences et Technologies - Bâtiment C9
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Diversité des héparanes sulfates et
réponse inflammatoire
Thématiques :
- Spécificité des interactions héparanes sulfates / protéines inflammatoires
- Régulation de l’expression et de l’activité des enzymes de biosynthèse des
héparanes sulfates
- Rôle des héparanes sulfates dans les réponses inflammatoires et immunes
Unité de Glycobiologie Structurale et Fonctionnelle
UMR 8576 CNRS/Université de Lille

Réponses cellulaires
- signalisation
- migration, prolifération; apoptose …
- production de cytokines (Q-PCR, ELISA)
- cytotoxicité
Corrélation entre remodelage des HS
et réponses cellulaires
- inhibition par ARN interférence
- surexpression de formes actives
Régulation de l’expression des
enzymes de maturation des HS
- RT-qPCR, immuno-détection.
- régulation transcriptionnelle et post-
transcriptionnelle (signalisation,,
gène reporter, miRNA…)
3-OST2 3-OST3B
M1 M2 M1 M2
Remodelage structural des HS
- composition en disaccharides
- cytofluorimétrie en flux
- spectrométrie de masse
10 20 30 40
Elution (min)
100
0
20
40
60
80
10 102103104 1
HS4C3
Activation de p44/p42 MAPK (CyPB)
control
0155
si-3-OST3
0155(min)
Régulation de l’expression et de l’activité des héparanes sulfotransférases :
approches expérimentales
Diversité structurale des héparanes sulfates
Stimulus
Enzymes
Héparanes
sulfates Réponses
1
2 3

Polarisation des macrophages
Macrophages (M0)
Monocytes primaires
In vitro differentiation
(5-days)
IL-4 /
IL-13
LPS /
IFN-γ
Macrophages
M1 Macrophages M2
(2-days)
Expression de 11 HS sulfotransférases dans les macrophages
non polarisés
0,001
0,01
0,1
1
10
NDST1 NDST2 NDST3 NDST4
0,001
0,01
0,1
1
10
HS2ST
HS6ST1 HS6ST2 HS6ST3
0,001
0,01
0,1
1
10
100
HS3ST1 HS3ST2
HS3ST3A
HS3ST3B
HS3ST4 HS3ST5 HS3ST6
Expression of mRNA
(gene/HPRT)
NDST1
0
10
M1 M2
NDST2
0
200
M1 M2
3-OST2
0
5
M1 M2
3-OST3B
0
5
M1 M2
2-OST
L’expression des NDST1, NDST2, 2-OST, 3-OST2 and 3-OST3B
est modifiée en réponse à la polarisation des macrophages.
Remodelage des héparanes sulfates : l’exemple du macrophage

Fréquence (%)
0
5
10
15
20 M1
M2
Analyse disaccharidique des HS par RP-HPLC
50
70
90
Analyse disaccharidique des héparanes sulfates par RP-HPLC (dérivation AMAC)
6. ΔUA2S-GlcNAc
1. ΔUA2S-GlcNS6S
2. ΔUA-GlcNS6S
3. ΔUA2S-GlcNS
4. ΔUA-GlcNS
5. ΔUA-GlcNAc6S
7. ΔUA-GlcNAc
6. ΔUA2S-GlcNAc
1. ΔUA2S-GlcNS6S
2. ΔUA-GlcNS6S
3. ΔUA2S-GlcNS
4. ΔUA-GlcNS
5. ΔUA-GlcNAc6S
7. ΔUA-GlcNAc
Remodelage des héparanes sulfates : l’exemple du macrophage
Serum (10%)
FGF-2
Lyases
Fixed-M2
+
-
-
-
-
-
-
-
-
+
-
-
-
-
-
+
-
+
-
+
-
+
+
+
Proliferation Index
0
2
4
6
8
10
*
*
Les HS des macrophages M2 présentent le FGF-2 aux
cellules cancéreuses (MDA-MB-231)

Sept isoenzymes : 3-OST1, 2, 3A, 3B, 4, 5, 6
(HS3ST1, HS3ST2, HS3ST3A, HS3ST3B, HS3ST4, HS3ST5, HS3ST6)
Régulation et fonctions de la 3- O -sulfatation
Fixation de HSV-1 gD à la surface des macrophages Rôle de la 3-OST2 dans les réponses induites
par HSV-1 gD
1. Implication des héparanes 3-O-sulfatés dans les réponses des macrophages à la
protéine gD du virus HSV-1
- Importance de la 3-O-sulfatation des HS sur la signalisation des macrophages.
- Rôle des HS 3-sulfatés dans la susceptiblité des macrophages au HSV-1
Contrôle HSV-1 gD