Question 1 : La protéine OXA1
Schéma d'après la séquence de son ARNm et après analyse bio informatique
Transfection de cellules Hela avec un plasmide comportant la séquence nucléotidique de
OXA1 suivie de celle codant pour le tag (marqueur) HA (hémagglutinine) +/- insertion d'un
deuxième tag (T7).
Homogénéisation des cellules Hela, western blot (anticorps anti-HA).
Biosynthèse de OXA1 in vitro : lysat de réticulocytes (cytosol d'hématies immatures, lapin)
+ ARNm de OXA1.
Western blot (électrophorèse, transfert sur nitrocellulose, détection avec anticorps anti-
HA).
A. Le lysat de réticulocytes contient tout ce qui est nécessaire à la protéosynthèse
B. La protéine synthétisée par le lysat a un PM de 48 kDa
C. Les cellules Hela produisent OXA1 après transfection
D. Les cellules Hela synthétisent une protéine tronquée
E. OXA1 synthétisée par les cellules Hela a perdu son extrémité C-term
F. OXA1 synthétisée par les cellules Hela a perdu son extrémité N-term
G. OXA1 pourrait être une protéine membranaire
H. OXA1 pourrait être une protéine peroxysomale
I. OXA1 pourrait être une protéine mitochondriale
Réponses :
A. Vrai : ribosomes, ARNt, source d'énergie...
B. Faux : 49 kDa (OXA1 + tag HA)
C. Vrai : synthèse de OXA1 avec le tag HA, détectée par l'anticorps anti-HA