ADN recombinant

Injection d’ADN étranger dans une
cellule animale
Chapitre 10
L’isolement et la manipulation de gènes

Comment amplifier un gène d’intérêt?

Amplification in vivo à l’aide du clonage d’ADN
L’ensemble formé par un vecteur
et un ou des fragments insérés
est appelé ADN recombinant. Le
mélange d’ADN recombinant est
ensuite utilisé pour transformer
des cellules bactériennes. En
général, il pénètre une seule
molécule de vecteur recombinant
par cellule bactérienne. Ces
cellules sont étalées et se
multiplient en formant des
colonies. Par conséquent, une
colonie contient une population
très importante d’inserts
identiques d’ADN, et on appelle
cette population un clone d’ADN.

La construction de l’ADN recombinant
1- Les types d’ADN donneur:
a) ADN génomique
b) ADN complémentaire (ADNc)
c) ADN obtenu par synthèse chimique
2- Couper l’ADN donneur et le vecteur à l’aide d’enzymes de restrictions
3- Relier les molécules d’ADN (ADN donneur-vecteur)
4- Amplifier chaque ADN recombinant à l’aide de la machinerie bactérienne
C’est la découverte et la caractérisation des enzymes de restriction qui a
permis le développement de la technologie de l’ADN recombinant. Les
enzymes de restriction sont produites par des bactéries et agissent
comme des ciseaux en coupant l’ADN au niveau de séquences cibles
spécifiques.
Exemple de coupure à l’aide d’EcoRI:

Les enzymes de restriction
•Enzymes qui clivent l’ADN
•Reconnaissent des séquences nucléotidiques spécifiques
•1ère enzyme découverte chez Haemophilus influenzae en 1970
•Différentes enzymes sont disponibles commercialement
•Nomenclature: BamHI
–B première lettre du genre bactérien (Bacillus)
–am lettres de l’espèce bactérienne (amyloliquefaciens)
–H représente la souche
bactérienne (H)
–I première enzyme
découverte chez cette
bactérie