Fiche d`information pour Virus West Nile

Gestion de l'infection à virus West Nile
Test With Confidence™
Virus West Nile
Comme son nom l’indique, la fièvre à virus
West Nile est une maladie causée par le
virus West Nile (WNV), un virus à ARN
monocaténaire appartenant à la famille des
Flaviviridae. D’autres virus de cette famille sont
à l’origine de l’encéphalite japonaise, la fièvre
jaune ou l’encéphalite de Saint-Louis.
Le nom du virus provient de la région occidentale
du Nil, en Ouganda, où la maladie a été observée
pour la première fois en 1937 chez une femme qui
présentait une forte fièvre. En 1957, le WNV a été
reconnu comme responsable d’une épidémie de
méningite et d’encéphalite grave en Israël. En 1999,
la maladie s’est étendue à l’hémisphère occidental
où elle a été observée pour la première fois dans la
région de New York, avant de toucher le Canada,
le Mexique et l’Amérique latine.
Le test IDEXX IgM WNV Ab permet de détecter une exposition récente au virus West Nile
Environ 70 % des chevaux affectés ne présentent aucun
signe clinique, tandis que 20 % souffrent de symptômes
légers. Des formes neuro-invasives de la maladie, parmi
lesquelles la méningite, l’encéphalite, la parésie, une atteinte
du neurone moteur et la paralysie flasque sont constatées
chez environ 1 à 10 % des chevaux infectés. Chez le cheval,
le taux de mortalité en cas d’infection neuro-invasive est de
20 à 60 %. Il n’existe aucun traitement spécifique de la fièvre
à virus West Nile.
Ouganda - Origine de la fièvre à virus West Nile
Étant donné que les IgM peuvent uniquement être détectées pendant trois
mois après l’infection, l’obtention d’un résultat positif indique une exposition
récente au WNV et la présence du WNV circulant dans la région.
Le test IDEXX IgM WNV Ab est un test ELISA
de capture en deux étapes qui permet de
détecter avec précision les IgM dirigées
contre le virus West Nile (WNV) dans le
sérum de cheval.
Les autres tests ELISA de dépistage du WNV permettent de détecter les
IgG qui restent présentes dans le sérum du cheval plusieurs années après
l’infection. La présence d’IgG ne donne aucune information sur le moment
auquel l’infection a été contractée ni sur la présence actuelle du WNV dans
l’environnement.
Protocole du test IDEXX IgM WNV Ab
Conjugué HRP anti-WNV
Il existe deux lignées du virus. La première lignée
est surtout présente en Europe, en Afrique du
Nord, en Afrique centrale, en Israël, en Inde, en
Amérique centrale, en Amérique du Nord, en
Argentine et en Colombie. La deuxième lignée
est endémique en Afrique centrale, en Afrique
australe et à Madagascar.
Échantillon du cheval testé (IgM)
Ac anti-IgM équines
WNRA (ou NCA)
Lavage : 3 x 300 µl
Échantillon : sérum de
cheval
Volume : 50 µl
(pré-dilution au 1/100)
Incubation : 1 h à 37°C
Signes cliniques
Chez ce dernier, la période d’incubation est de
3 à 15 jours. Les chevaux malades présentent
habituellement une ataxie ; dans certains cas, une
faiblesse générale, des fasciculations musculaires
et des déficits des nerfs crâniens peuvent
également être observés.
DO (WNRA)
Épidémies de fièvre à virus West Nile
Lecture de la DO à 450 nm
WNRA : lignes A à D
Lavage : 3 x 300 µl
Conjugué : 50 µl
Volume : 50 µl
Lavage : 3 x 300 µl
Incubation : 1 h à 37°C
1
1937
1950–1975
1994–2006
Les oiseaux sauvages sont le réservoir du virus West Nile qui est transmis par
les moustiques. Les moustiques contractent l’infection lorsqu’ils piquent les
oiseaux infectés. Ils transmettent ensuite le virus à d’autres oiseaux et espèces,
NCA
Transmission du virus West Nile
2
3
...
A
–
3
B
+
4
C
1
5
D
2
6
E
–
3
F
+
4
G
1
5
H
2
6
La figure ci-dessous illustre la méthode de
capture des IgM en deux étapes utilisée dans le
test IDEXX IgM WNV Ab.
1. C
haque échantillon est déposé dans deux
puits de la microplaque. Si l’échantillon
contient des IgM, les anticorps se fixent sur les
parois des puits de la microplaque recouvertes
d’anticorps dirigés contre les IgM équines.
3. A
près lavage de la microplaque, le conjugué
HRP dirigé contre le virus West Nile est ajouté
dans tous les puits. Le conjugué se lie à
n’importe quel WNRA fixé aux IgM.
• ISR entre 2,00 et 3,00
(2,00 < ISR < 3,00) = échantillon douteux
(un test de confirmation est nécessaire).
• ISR ≥ 3,00 = échantillon positif (il contient des
IgM dirigées contre le virus West Nile, signe
d’une exposition récente au virus).
4. Après lavage de la microplaque, le substrat
enzymatique TMB est ajouté dans les puits.
En présence d’une liaison conjugué-WNRA
(lors de l’étape 3), le substrat enzymatique
TMB forme un composé bleu virant au jaune
après l’ajout de la solution d’arrêt.
5. La lecture de la microplaque se fait à 450 nm.
L’intensité de la couleur est proportionnelle à la
quantité d’anticorps présente dans l’échantillon.
Substrat : 75 µl
Solution d’arrêt : 50 µl
4
5
6
7
8
9
10
11
Exemple d'interprétation du résultat du test IDEXX IgM WNV Ab
12
Critères de validation (Les quatre critères doivent être remplis. Toutes les lectures se font à 450 nm.)
1
2
3
A
–
3
...
B
+
4
C
1
5
D
2
6
E
–
3
F
+
4
DO du contrôle positif > 0,40
G
1
5
Substrat : 75 µl
ISR du contrôle positif > 3
H
2
6
Incubation : 10 min à 21°C
(ISR du contrôle positif = DO (B1)/DO450 (F1))
DO du contrôle négatif < 0,15
...
ISR du contrôle négatif < 2
(ISR du contrôle négatif = DO (A1)/DO450 (E1))
pour qu’ils puissent transmettre le virus.
DO (NCA)
Lecture de la DO à 450 nm
Vecteurs (moustiques)
L’interprétation des résultats est la suivante :
• ISR ≤ 2,00 = échantillon négatif (il ne contient
pas d’IgM dirigées contre le virus West Nile).
hôtes finaux car la réplication du WNV dans leur organisme est insuffisante
Hôtes occasionnels
(homme, cheval et autres animaux)
Les résultats du test ELISA sont exprimés sous
forme d’une valeur ISR (Immune Status Ratio),
qui correspond au rapport entre la densité optique
du puits WNRA et celle du puits NCA pour chaque
échantillon.
2. A
près lavage de la microplaque, l’antigène
recombinant du virus West Nile (WNRA) est ajouté
dans le premier puits de chaque échantillon et
l’antigène normal (NCA) dans le second puits. Si
l’échantillon contient des IgM anti-WNV, le WNRA
se fixe aux IgM dans les puits.
dont l’homme et le cheval. L’homme et le cheval sont considérés comme les
Hôtes amplificateurs (oiseaux)
L’ISR (Immune Status Ratio) permet une
interprétation claire des résultats
Incubation : 10 min à 21°C
Incubation : 1 h à 37°C
ou durant toute la nuit à 5°C
WNRA
La fièvre à virus West Nile touche essentiellement
les oiseaux, l’homme et les chevaux. La maladie
est généralement asymptomatique mais des
symptômes pseudo-grippaux comme la fièvre,
les maux de tête, l’anorexie et les myalgies sont
rapportés dans environ 20 % des cas. La maladie
peut également entraîner une encéphalomyélite
chez l’homme et le cheval.
Méthode ELISA de capture en deux étapes
NCA : lignes E à H
Volume : 50 µl
Incubation : 1 h à 37°C ou
durant toute la nuit à 5°C
Lavage : 3 x 300 µl
Conjugué : 50 µl
Incubation : 1 h à 37°C
Lavage : 3 x 300 µl
Solution d’arrêt : 50 µl
4
5
6
7
8
9
10
11
12
...
DO (WNRA)
ISR (Immune Status Ratio) : ISR = --------------DO (NCA)
Détection des IgM et de l’infection à virus West Nile
Virémie
IgM Ac
Infection
IgG Ac
Apparition des signes cliniques
(seulement 20 à 30 % des chevaux
présentent des signes cliniques)
Diagnostic de la fièvre à virus West Nile
grâce à la détection des IgM
Les signes cliniques de la fièvre à virus West Nile
évoquent une infection par le WNV, mais étant
donné que certains cas d’infection par le WNV
peuvent être asymptomatiques, une évaluation
clinique et des analyses de laboratoire sont
nécessaires pour pouvoir poser le diagnostic.
La fièvre à virus West Nile peut être
diagnostiquée en détectant le virus par virologie
ou par PCR. La méthode la plus utile consiste
cependant à détecter les IgM anti-WNV.
Ce type d’anticorps peut être détecté jusqu’à
trois mois après l’infection. Par conséquent, la
présence d’IgM indique une infection récente
par le WNV, faisant de cette méthode de
détection une méthode utile pour les études
épidémiologiques ainsi que pour diagnostiquer
la maladie. Le manuel terrestre de l’OIE décrit
le test ELISA de capture des IgM comme
« particulièrement utile pour détecter les
expositions naturelles et récentes au virus West
Nile ainsi que les infections par ce virus. »1
L’obtention d’un résultat positif pour un
échantillon équin analysé avec un test ELISA
de capture des IgM indique que le cheval
a été en contact avec le virus au cours des
trois derniers mois. Cela révèle également la
présence récente de moustiques propageant
le virus West Nile dans la région et la possibilité
que ces moustiques subsistent toujours dans
l’environnement.
3 mois
> 1 an
Mesures de protection
Le contrôle de la population de moustiques
et la réduction de l’exposition aux moustiques
constituent les éléments clés de protection contre
le virus West Nile. Les moustiquaires et les répulsifs
s’avèrent utiles. Parmi les autres recommandations,
citons le fait d’isoler les chevaux des moustiques,
l’utilisation de ventilateurs pour éloigner ces
insectes et l’extinction des lumières pendant la nuit.
Virus West Nile
Le fait de pouvoir déterminer avec précision le moment de l’infection
permet une réponse appropriée
Étant donné qu’il est possible de détecter les IgM à partir du 7ème jour et
jusqu’à trois mois après l’exposition au WNV, l’obtention d’un résultat positif
au test ELISA de capture des IgM signifie que le cheval a été exposé au
virus West Nile au cours des trois derniers mois.
Une infection aussi récente indique que les moustiques sont probablement
en train de propager le WNV dans la région. Grâce à ces éléments, il vous
est possible de prendre les mesures adéquates en matière de protection
des animaux et de lutte contre les moustiques.
Études de sensibilité et de spécificité
Le test IDEXX IgM WNV Ab a montré une sensibilité de 99 % et une
spécificité de 100 % dans les populations testées.
Même s’il n’existe aucun sérum de référence à utiliser avec les tests ELISA
de détection du virus West Nile, le test IDEXX IgM WNV Ab a été testé à
l’aide d’un sérum positif provenant du Laboratoire National de Référence.
Le test IDEXX a détecté ce sérum positif à une dilution au 1/102400.
Caractéristiques du test IDEXX IgM WNV Ab
Kit de 2 plaques : réf. P00730-2
Kit de 5 plaques : réf. P00730-5
• Les IgM dirigées contre le virus West Nile sont détectables à partir du
7ème jour et jusqu’à 3 mois après l’infection.
• La présence d’IgM anti-WNV indique une infection récente par le WNV.
Référence
1. World Organization for Animal Health. West Nile fever. In: Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2008.
Paris, France : World Organization for Animal Health; 2008. Disponible à l'adresse :
www.oie.int/Eng/Normes/Mmanual/2008/pdf/2.01.20_WEST_NILE.pdf. Consulté le 31 juillet 2009.
Pour plus d'informations sur le virus West Nile, veuillez contacter votre représentant
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