Tp3 specificite ac

TP 3 : Les anticorps, molécules de l’immunité adaptative
Objectifs : mettre en évidence la spécificité d’un anticorps vis-à-vis d’un antigène.
Activité 1 : Recherche d’un antigène par la technique d’immunodiffusion (méthode d’Ouchterlony).
Activités et déroulement des activités
Exigences
Étape 1 : Concevoir une stratégie pour résoudre une situation problème (durée maximale : 10 minutes)
La méthode d’Ouchterlony est utilisée pour détecter la présence d’anticorps spécifiques dans un sérum.
1) A l’aide de la fiche annexe, proposer, en complétant la fiche réponse, une démarche
d’investigation permettant de déterminer quel est l’antigène à l’origine de la réponse adaptative de
Mlle Grey.
Appeler l’examinateur pour vérifier votre proposition et obtenir la suite du sujet.
mise en relation des informations et des connaissances.
Étape 2 : Mettre en œuvre un protocole de résolution pour obtenir des résultats exploitables
2) Mettre en œuvre le protocole d'immunodiffusion sur gel, afin de déterminer l’antigène contre
lequel Léonor Grey a développé une réaction immunitaire adaptative.
Appeler l’examinateur pour vérifier le résultat et éventuellement obtenir une aide
(les résultats peuvent ne pas être directement exploitables)
Manipulation correcte.
Poste de travail rangé en fin d’ expérience.
Étape 3 : Présenter les résultats pour les communiquer
3) Indiquer le résultat obtenu sur le document 2 de la fiche réponse.
Appeler l'examinateur pour vérification de votre production
4) Dans chaque cas (formation de l’arc de précipitation ou absence d’arc), réaliser un schéma
d’interprétation à l’échelle moléculaire, en utilisant les symboles proposés dans la fiche réponse.
Lecture correcte des résultats
Schémas précis et rigoureux.
Étape 4 : Exploiter les résultats obtenus pour répondre au problème
5) A partir des résultats obtenus, déterminer quel est l’antigène pour lequel Léonor Grey a déclenché
une réponse immunitaire adaptative. Quel traitement lui proposer ?
Démarche explicative cohérente.
Matériel envisageable :
- de laboratoire (verrerie, instruments...)
- d'observation (microscope, loupe binoculaire...)
- de mesure et d'expérimentation (balance, chaîne ExAO...)
- informatique et d’acquisition numérique ( Rastop , Anagène…)

Fiche réponse du TP 3 (Activité 1) : Les anticorps, molécules de l’immunité adaptative
Document 1 : disposition des puits
Justifier le choix effectué :
Document 2 : résultat
Schéma d’interprétation de la formation d’un arc de
précipitation :
Schéma d’interprétation de l’absence d’arc de précipitation :
Symbolisation de l’anticorps
à utiliser dans les schémas
d’interprétation
Détermination de l’antigène à l’origine de la réponse adaptative de Léonor GREY :

Fiche Annexe : Principe de la méthode d’Ouchterlony :
C’est une méthode d’immunodiffusion sur gel : les solutions déposées dans les puits creusés dans le gel diffusent de façon homogène dans
toutes les directions autour des puits.
Deux auréoles de diffusion peuvent donc entrer en contact, lorsqu’elles ont suffisamment progressé. Cette zone de contact reste invisible
s’il n’y a pas de réaction entre les deux solutions.
Quand la réaction se produit, il se forme un arc de précipitation visible à l’œil nu.
Celui-ci est dû à l’interaction entre de nombreux anticorps et les antigènes spécifiques, entraînant la formation de complexes non solubles
dans le gel (complexes immuns).
Solution contenant le sérum du patient
Solution avec AG testé

Matériel disponible et protocole d'utilisation du matériel
* les produits utilisés (soude notamment) sont des produits de substitution permettant de modéliser les réactions entre sérum et AG, afin d'éviter les risques liés
à la manipulation de produits biologiques dangereux. Cependant, un risque chimique subsiste puisque la soude provoque des brûlures et lésions oculaires.
PROTOCOLE
1) Utiliser le gabarit de perçage ci-contre pour creuser à l’aide du tube emporte pièce les puits nécessaires dans le gel d’Agar. Ces
puits doivent être uniformément répartis et disposés à égale distance du puits central.
2) Eliminer les disques de gelose avec le cure-dent si nécessaire.
3) Marquer sous la boîte de Pétri la disposition des produits à déposer dans les puits permettant de révéler la réaction de
l’anticorps étudié avec les différents antigènes proposés (utiliser le même ordre que celui précédemment choisi)
4) Remplir les différents puits avec 3 gouttes si la micropipette est rouge (100µL) ou avec tout le contenu du cône si la
micropipette est bleue (50 µL) : Chaque produit devra être prélevé avec un cône propre et réservé à ce produit, puis être
déposé dans les puits sans débordement, ni bulles et sans endommager le gel d’agar.
5) Fermer la boîte.
6) Observer les résultats au bout de 20 minutes sur fond noir et en éclairage rasant.
Matériel à disposition :
- Une boite de Pétri (6 cm de diamètre) avec gélose - Un emporte pièce et un cure dent - Un marqueur indélébile
- Un récipient poubelle - 1 micropipette et 6 cônes - Papier noir
- Sérum de Léonor (noté SLG)
- 4 solutions correspondant aux antigènes * : Solution d’antigène Borrelia : AGB
Solution de divers antigènes de la gaine de myéline : EG1, EG2, EG3
- 1 solution témoin avec eau distillée : E
gabarit de perçage

Activité 2 : Etude de la relation structure-fonction des Anticorps
Activités et déroulement des activités
Exigences
Étape 1 : Concevoir une stratégie pour résoudre une situation problème
1. Proposer une démarche d’investigation visant à déterminer la structure d’un anticorps retrouvé
dans le sérum de Miss GREY.
2. Comment mettre en évidence sa spécificité vis-à-vis de la bactérie Borrelia ?
mise en relation des informations et des connaissances
Étape 2 : Mettre en œuvre un protocole de résolution pour obtenir des résultats exploitables
3. Mettre en œuvre le protocole proposé.
Appeler l’examinateur pour vérifier le résultat et éventuellement obtenir une aide .
Utilisation maîtisée des logiciels.
Protocole correctement réalisé.
Étape 3 : Présenter les résultats pour les communiquer
4. Présenter vos observations sous la forme de votre choix afin de les communiquer.
Rédaction des idées cohérente.
Schématisation pertinente.
Étape 4 : Exploiter les résultats obtenus pour répondre au problème
5. Expliquer l’origine de la spécificité d’un anticorps pour son antigène.
6. Compléter le schéma de l’anticorps afin d’obtenir un complexe antigène-anticorps.
Démarche explicative cohérente.