Modulation de l`activité des lymphocytes B et T murins en

Contrôle Suspendue
La suspension anti-orthostatique entraîne chez la souris une augmentation des populations de lymphocytes T dans la rate et une diminution des lymphocytes B, en absence de
stress à 21 jours. La réponse proliférative des lymphocytes T et B est diminuée in vitro, les lymphocytes B sont plus affectés que les T.
L’étude de la transduction du signal par biologie moléculaire est nécessaire pour mettre en évidence les mécanismes impliqués.
Contrôle Suspendue
Depuis le premier pas sur la Lune en 1969, l’Homme n’a cessé de voyager dans l’espace .
Aujourd’hui, l’ISS est occupée en permanence par un équipage international réalisant de
nombreuses expériences.
Un des projets de demain est d’aller sur Mars : plus de 520 jours aller-retour.
Pour étudier les impacts des vols spatiaux sur l’organisme des modèles terrestres
sont utilisés.
e voyager dans l’espace .
nternational réalisant de
aller
-
retour.
mo
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Modulation de l’activité des lymphocytes
B et T murins en micropesanteur simulée
13
ème
Édition des Journées CNES Jeunes Chercheurs
Fanny GAIGNIER
EA 7300 SIMPA
[e-mail]
Impacts d’un vol spatial sur l’organisme
Phénotypage des lymphocytes de la rate
EA 7300 SIMP
fanny.gaignier
@g
ma
Hypergravité Micropesanteur
Isolement social
et confinement
Choc thermique
Perturbation du
rythme circadien
Radiations
Perturbations physiologiques
Modification des défenses
immunitaires
La suspension anti-orthostatique
Simulation de certains effets de la micropesanteur chez la souris :
Attache sur chariot mobile, angle de 25-30°
21 jours ؄ vol long chez l’Homme
3 lots (n=5) : Contrôle (C)
Attachée (A)
Suspendue (S)
Quels sont les effets de la micropesanteur sur les
cellules de la réponse immunitaire spécifique ?
Les souris A et S perdent du poids les 3 premiers jours
Les S ne récupèrent leur poids initial qu’à 21 jours
Principe : chaque type cellulaire est identifié grâce à un fluorochrome fixé sur
ses marqueurs de surface (CD) puis détecté par le cytomètre en flux.
Lymphocytes B : sécréteurs d’anticorps, marqueur CD19
Lymphocytes T : marqueur CD3, 2 sous-populations :
՜T helper : orientent la réponse immunitaire, marqueur CD4
՜T cytotoxiques : tuent les cellules infectées, marqueur CD8
ø de 40 % des LB
ö de 38 % des LT
La suspension inverse le ratio B/T dans la rate
Principe : Marquage intracytoplasmique des cellules avec un fluorochrome (CFSE) se répartissant
équitablement dans les deux cellules filles => la fluorescence diminue à chaque division
Stimulation in vitro des cellules pendant 72 h avec des mitogènes :
- Lipopolysaccharide (LPS) spécifique des LB
- Concanavaline A (ConA) spécifique des LT
Etude de la réponse proliférative
Contrôle Suspendue
Gaignier F, Schenten V, Decarvalho Bittencourt M, Gauquelin-Koch G, Frippiat J-P and Legrand-Frossi C. 21 days of hindlimb unloading disrupts splenic lymphocytes ratios and differently reduces mitogenic responses without stress. (soumis)
Sélection des lymphocytes vivants
Comparaison des % de phénotypes après 72h
Lymphocytes totaux
Contrôle : LPS Ö 42 % ; ConA Ö 40 %
Suspendue : LPS Ö 17 % ; ConA Ö 30 %
Suspendue
Détermination du % de cellules divisées à partir de la génération 0 (È
)
T : p < 0.1
* : p < 0.05
** : p < 0.01
*** : p < 0.001
ø de 18 % réponse LT
ø 14 % LTc et ø 23 % LTh
Conclusion - Perspectives
ø de 40 %
réponse LB
T : p < 0.1
* : p < 0.05
A 21 jours la corticostérone sérique,
marqueur de stress, est équivalente
dans les 3 lots
** : p < 0.01
*** : p < 0.001
Sélection des lymphocytes selon
leurs taille et granulosité Identification des populations de lymphocytes grâce au couplage fluorescent des marqueurs
Stress puis Adaptation
Profil de division après 72h
Diminution de la réponse lymphoproliférative
Contrôle
Ö 74 %
Ö 44 %
% population stimulée - % population non stimulée
% population non stimulée