Modulation de l`activité des lymphocytes B et T murins en
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13ème Édition des Journées CNES Jeunes Chercheurs Modulation de l’activité des lymphocytes B et T murins en micropesanteur simulée Fanny GAIGNIER SIMPA EA 7300 SIMP [email protected] fanny.gaignier@gma Radiations Choc thermique Impacts d’un vol spatial sur l’organisme Isolement social et confinement Depuis le premier pas sur la Lune en 1969, l’Homme n’a cessé dee voyager dans l’espace . nternational réalisant de Aujourd’hui, l’ISS est occupée en permanence par un équipage international nombreuses expériences. Perturbation du rythme circadien Hypergravité Micropesanteur Un des projets de demain est d’aller sur Mars : plus de 520 jours aller-retour. Pour étudier les impacts des vols spatiaux sur l’organisme des modèles terrestres sont utilisés. Perturbations physiologiques Modification des défenses immunitaires La suspension anti-orthostatique Quels sont les effets de la micropesanteur sur les Simulation de certains effets de la micropesanteur chez la souris : cellules de la réponse immunitaire spécifique ? Attache sur chariot mobile, angle de 25-30° Les souris A et S perdent du poids les 3 premiers jours 21 jours vol long chez l’Homme Les S ne récupèrent leur poids initial qu’à 21 jours 3 lots (n=5) : Contrôle (C) Attachée (A) A 21 jours la corticostérone sérique, Suspendue (S) marqueur de stress, est équivalente dans les 3 lots Phénotypage des lymphocytes de la rate Stress puis Adaptation Principe : chaque type cellulaire est identifié grâce à un fluorochrome fixé sur ses marqueurs de surface (CD) puis détecté par le cytomètre en flux. T : p < 0.1 * : p < 0.05 Contrôle Lymphocytes B : sécréteurs d’anticorps, marqueur CD19 Lymphocytes T : marqueur CD3, 2 sous-populations : ՜T helper : orientent la réponse immunitaire, marqueur CD4 ՜T cytotoxiques : tuent les cellules infectées, marqueur CD8 Suspendue La suspension inverse le ratio B/T dans la rate Ö 74 % Identification des populations de lymphocytes grâce au couplage fluorescent des marqueurs Etude de la réponse proliférative Contrôle Sélection des lymphocytes selon leurs taille et granulosité T : p < 0.1 * : p < 0.05 ** : p < 0.01 *** : p < 0.001 ø de 40 % des LB ö de 38 % des LT Stimulation in vitro des cellules pendant 72 h avec des mitogènes : - Lipopolysaccharide (LPS) spécifique des LB - Concanavaline A (ConA) spécifique des LT Sélection des lymphocytes vivants Comparaison des % de phénotypes après 72h Suspendue Principe : Marquage intracytoplasmique des cellules avec un fluorochrome (CFSE) se répartissant équitablement dans les deux cellules filles => la fluorescence diminue à chaque division Ö 44 % Contrôle % population stimulée - % population non stimulée % population non stimulée Profil de division après 72h ø de 40 % réponse LB Conclusion - Perspectives ø de 18 % réponse LT ø 14 % LTc et ø 23 % LTh Diminution de la réponse lymphoproliférative Suspendue Suspendue ** : p < 0.01 *** : p < 0.001 Contrôle Lymphocytes totaux Contrôle : LPS Ö 42 % ; ConA Ö 40 % Suspendue : LPS Ö 17 % ; ConA Ö 30 % Détermination du % de cellules divisées à partir de la génération 0 (È) La suspension anti-orthostatique entraîne chez la souris une augmentation des populations de lymphocytes T dans la rate et une diminution des lymphocytes B, en absence de stress à 21 jours. La réponse proliférative des lymphocytes T et B est diminuée in vitro, les lymphocytes B sont plus affectés que les T. L’étude de la transduction du signal par biologie moléculaire est nécessaire pour mettre en évidence les mécanismes impliqués. Gaignier F, Schenten V, Decarvalho Bittencourt M, Gauquelin-Koch G, Frippiat J-P and Legrand-Frossi C. 21 days of hindlimb unloading disrupts splenic lymphocytes ratios and differently reduces mitogenic responses without stress. (soumis)
