Fiche 2 Acteurs Réponse Immunitairer Sujet-élève LES ACTEURS DE LA REPONSE IMMUNITAIRE On cherche à identifier les cellules impliquées dans la réponse immunitaire en observant un frottis sanguin CAPACITES Barême ACTIVITES ET CONDITIONS DES ACTIVITES EXIGENCES On dispose du matériel suivant: - un flacon de sang d'un animal de boucherie - un agitateur - un flacon de colorant GIEMSA ou de bleu de méthylène - une pissette d'eau distillée - une boîte de Pétri avec un support pour lame - un flacon d'alcool absolu - lamelles et lames - un protocole de réalisation d'un frottis - une préparation microscopique de frottis du commerce - une planche de détermination des leucocytes - un microscope et une lampe - une paire de gants de latex Réaliser techniquement (suivre un protocole) 6 1- Réaliser un frottis sanguin en suivant le protocole fourni. Suivi du protocole (deux essais possibles). Employer des techniques d'observation 4 2 - Pendant le temps de fixation, rechercher un leucocyte (cellule nuclée) sur le frottis de la préparation du commerce. Mise au point correcte sur un leucocyte. 7 3 - Dessiner ce leucocyte entouré de quelques cellules présentes dans le champ d'observation. L'identifier à l'aide de la planche fournie. Justifier en une phrase votre identification. Légender votre dessin. Appeler l'examinateur Utiliser des modes de communication Employer des techniques d'observation Réaliser techniquement (suivre des consignes) 2 4 - Le frottis réalisé en 1 étant terminé, mettre au point sur quelques leucocytes visibles en bordure. Rechercher et identifier un type de leucocyte différent du premier. Justifier. Appeler l'examinateur 1 5 - Ranger la paillasse. Mettre le matériel utilisé dans l'eau de Javel. Dessin traduisant fidèlement l'observation. Légendes exactes. Frottis correct, mise au point réalisée. Identification et justification correctes de 2 leucocytes différents. Paillasse rangée. Matériel dans le désinfectant. 1 Fiche 2 Acteurs Réponse Immunitairer Sujet-élève LES ACTEURS DE LA REPONSE IMMUNITAIRE PROTOCOLE DE REALISATION D'UN FROTTIS SANGUIN REALISATION DU FROTTIS: Enfiler les gants de protection Déposer une goutte de sang à l'extrémité d'une lame à l'aide d'un agitateur. Incliner une lamelle à 45° sur la goutte de sang de façon à ce qu'elle s'étale le long de la lamelle par capillarité. La faire alors glisser vivement et sans à coup le long de la lame pour étaler le sang. Sécher la lame en l'agitant puis la placer dans la boîte de Pétri sur le support de lame. FIXATION DU FROTTIS: Recouvrir toute la surface de la lame d'une pellicule d'alcool absolu. Laisser l'alcool agir pendant 10 mn (rajouter de l'alcool si nécessaire de façon à ce que la lame reste humide). Sécher. COLORATION DU FROTTIS: Recouvrir entièrement la lame d'une pellicule de colorant (bleu de méthylène ou GIEMSA) Laisser agir 5 mn. Rincer à l'eau distillée, égoutter et laisser sécher. Une fois sèche, la lame est observée sans lamelle. NETTOYAGE DU POSTE DE TRAVAIL: Mettre les gants dans le récipient réservé à cet usage. Placer la lamelle utilisée pour le frottis et l'agitateur utilisé lors du prélèvement dans l'eau de Javel. Ranger la paillasse. 2 Fiche 2 Acteurs Réponse Immunitairer IDENTIFICATION DES PRINCIPAUX LEUCOCYTES GRANULOCYTES (polynucléaires) Plusieurs lobes Gros et arrondi, occupe presque toute la cellule Souvent irrégulier, en forme de fer à cheval. Nucléole souvent visible Irrégulier, lobé Peu coloré. Nombreuses granulations Très peu abondant Très nombreuses granulations fines. Très découpé, de nombreux pseudopodes. Nombreuses vacuoles. LYMPHOCYTE MONOCYTE MACROPHAGE NOYAU CYTOPLASME MONONUCLEAIRES ASPECT taille GRANULOCYTE 3 Fiche 2 Acteurs Réponse Immunitairer LES ACTEURS DE LA REPONSE IMMUNITAIRE : GRILLE D'EVALUATION 1. PENDANT LA SEANCE CAPACITES Barême 1. Suivre un protocole et réaliser techniquement: /2 - le sang est correctement étalé /2 - les leucocytes sont colorés /2 - la lame est sèche 1. Employer des techniques d'observation: Pour la préparation du commerce: - l'éclairage est correctement réglé - le choix de l'objectif est correct - la mise au point est correcte - un leucocyte est présent sous l'objectif /1 /1 /1 /1 Pour le frottis réalisé par l'élève: - la mise au point est correcte sur quelques leucocytes /1 4 Fiche 2 Acteurs Réponse Immunitairer 1. Utiliser des modes de communication: - le dessin correspond à l'observation /1 1. Utiliser une grille d'identification: /1 - l'identification des 2 leucocytes est correcte /1 - l'identification est justifiée • Suivre des consignes: /1 -la paillasse est correctement rangée APRES LA SEANCE (sur production - élève) CAPACITES Barême • Utiliser des modes de communication en sciences expérimentales : /1 Forme /1 - Présentation soignée /1 - Bonne utilisation de l'espace pour le dessin et les légendes /1 - Traits nets, fins et continus Contenu - Légendes scientifiquement correctes: Noyau Cytoplasme /1 Total 20 Granulations (ou autres) Membrane cellulaire - Titre et conditions d'observation Document à l'usage des professeurs LES ACTEURS DE LA REPONSE IMMUNITAIRE 5 Fiche 2 Acteurs Réponse Immunitairer FICHE TECHNIQUE A L'USAGE DU LABORATOIRE Prévoir: - sang d'animal de boucherie (de préférence sang de lapin, le sang de bovin, particulièrement, pouvant être contaminé par la brucellose), ou mieux sang de cheval (ou de mouton) défibriné (en vente chez Biomérieux, zone d'activité des Lilas, 5 rue des aqueducs, BP 10, 69290 CRAPONNE, tel 04-78-87-20-00, fax 04-78-87-20-90. Conditionnement: 100 ml, prix 100F, livraison le lundi. Commander à l'avance. - bleu de méthylène frais (à 0,1%) - lames de verre pour microscopie parfaitement dégraissées - lames de frottis sanguin du commerce (les vérifier) Matériel par poste: - petit flacon de sang - 2 agitateurs - un flacon de bleu de méthylène - une pissette d'eau distillée - une grande boîte de Pétri ou petit cristallisoir avec support pour lames - lamelles et 2 lames de verre propres - une préparation microscopique de frottis sanguin (vérifiée) du commerce - un microscope permettant une observation d'au moins x650 - une petite cuvette ou cristallisoir contenant une solution d'eau de Javel - une feuille de papier filtre - une paire de gants de latex - alcool absolu A L'ATTENTION DE L'EVALUATEUR L'évaluation peut être réalisée au cours du TP relatif à l'identification des cellules immunitaires. Elle ne demande aucune connaissance préalable. Le suivi du protocole sera évalué au niveau du résultat obtenu, en fin de séance. Plusieurs essais étant autorisés, le candidat présentera à l'examinateur celui qu'il estimera le meilleur et seulement celui-ci sera évalué. - Sur les microscopes à éclairage incorporé, on évaluera uniquement l'utilisation du diaphragme. La mise au point devra être présentée avec l'utilisation du plus fort grossissement du microscope à l'exception de l'objectif à immersion. - Elle sera considérée comme correcte lorsque l'examinateur obtiendra une mise au point adaptée à sa vue en utilisant seulement la vis micrométrique, cette dernière ne devant pas être bloquée. On s'attachera à vérifier l'adéquation entre l'observation et le dessin ainsi que le respect des proportions. La présentation soignée concerne l'aspect général (propreté, écriture, disposition des flèches,...) Les légendes exigées sont celles de la cytologie classique (cytoplasme, noyau, membrane cellulaire). 6