Maintenance appareils d`hématologie
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CHAPITRE 7 : LE COMPETUR D’HEMATOLOGIE CHAPITRE 7 LE COMPETUR D’HEMATOLOGIE Objectifs pédagogiques : - Décrire les principes de fonctionnement des automates d’hématologie - Décrire les principales parties d’un ’ compteur d’hématologie ’ - Décrire les bonnes pratiques d’utilisation d’un automate d hématologie d’hématologie - Décrire les procédures d’entretien courant des compteurs d’hématologie g I- Généralités Les compteurs d’hématologie ou automates d’hématologie sont des appareils plus ou moins complexes utilisés pour la réalisation de l hémogramme. l’hémogramme L’hémogramme est l'étude cytologique quantitative et qualitative du sang circulant. Il comprend : - la l dét détermination i ti d des nombres b absolus b l d de globules l b l rouges, d de globules l b l blancs et des plaquettes ; - Le e dosage de l’hémoglobine é og ob e ; - la mesure de l’hématocrite ; - le calcul des constantes érythrocytaires : VGM, TCMH et CCMH ; - l’établissement po pourr les glob globules les blancs de la form formule le le leucocytaire coc taire donnant les pourcentages des différents types de leucocytes : polynucléaires p y neutrophiles, p p polynucléaires, y éosinophiles, p basophiles, p lymphocytes. Il faut noter que la plupart des automates calcule l'hématocrite à partir de la numération des globules rouges et du volume globulaire moyen moyen. II‐ Principes de comptage et de mesure des compteurs d’hématologie • Il existe essentiellement deux principes de comptage utilisés par les automates d'hématologie utilisés par les laboratoires. 'hé l l é l l b II‐1‐ La variation d’impédance • A Appelé encore, principe Coulter du nom de son inventeur: Elle est la lé i i C l d d i Ell l méthode de référence. • LL'appareil appareil utilise les variations d utilise les variations d’une une résistance électrique afin de déterminer résistance électrique afin de déterminer la taille des cellules sanguines. • Les cellules en passant à travers une ouverture déplacent un volume égal de fluide conducteur. De plus un courant électrique est appliqué au niveau de cette ouverture. Chaque passage d'une cellule à travers l'ouverture provoque alors une augmentation de la résistance électrique Cette augmentation est alors une augmentation de la résistance électrique. Cette augmentation est traduite en impulsions électriques dont la hauteur est directement proportionnelle au volume cellulaire. La détermination de la taille de la cellule est donc basée sur le déplacement du liquide et on obtient par conséquent la mesure du volume cellulaire (c'est‐à‐dire le VGM) directement. • Le nombre de globules rouges est déterminé par le total d Le nombre de globules rouges est déterminé par le total d’impulsions impulsions enregistrées. Le taux d’hématocrite est alors déduit selon la formule : Ht = GRxVGM/10. PRINCIPE DE MESURE PAR LA VARIATION D’IMPEDANCE Légende 1 : Electrode Positive 2 : Electrode Négative 3 : Capillaire de mesure 4 : Globule 5 : Flux aspirant 6 : Sang entier dilué BGB BGR PRINCIPE DE MESURE PAR LA VARIATION D’IMPEDANCE La valeur de l’impulsion U est proportionnelle au volume cellulaire I= constante I= constante El t d iinterne Electrode t U= R I et R = l / s Vide régulé Bac de comptage Electrode externe Saphir percé d’un micro‐ orifice 1 impulsion U = 1 particule l U Fl de Flux d diluant dil t conducteur d t Micro‐orifice, surface s surface s Diamètre 4mm Impulsion Temps II-2: La mesure optique Elle associe la cytométrie en flux et la diffraction lumineuse. La source de lumière peut être un laser ou une lampe au tungstène La cytométrie en flux consiste globalement à faire défiler une à une des cellules devant un faisceau laser. Plus p précisément,, on utilise d'abord un système d'hydrofocalisation qui va permettre de canaliser les cellules et de les faire passer en file indienne. Lors d leur de l passage à travers t le l llaser, elles ll é émettent tt t d des signaux i lumineux qui sont analysés par l'ordinateur associé au cytomètre. Ces signaux peuvent être de plusieurs natures comme par exemple une diffraction de la lumière par la cellule qui est alors liée à sa taille ou un signal g de fluorescence émis spontanément p par la cellule ou parce qu'elle a été marquée par un antigène, une coloration... PRINCIPE DE MESURE PAR METHODE OPTIQUE Diluant Diluant SOURCE Cellule photoélectrique Diluant l Diluant Echantillon H d f Hydrofocalisation li ti Flux FOCALISATION de HYDRODYNAMIQUE gainage Flux de gainage Flux échantillon Flux d de gainage Flux échantillon Diffraction lumineuse Intensité de la lumière diffractée peut être corrélée à des caractéristiques morphologiques cellulaires: ‐ Intensité de la lumière diffractée par la cellule, recueillie dans l'axe de la lumière incidente dite "diffraction incidente, dite diffraction aux petits angles aux petits angles" (2 à 6°), (FALS Forward Angle Light (2 à 6°) (FALS Forward Angle Light Scatter, ou FSC Forward Scatter Channel), est en relation proportionnelle avec la taille cellulaire , la forme cellulaire, et l’indice de réfraction cellulaire ‐ Intensité de la lumière diffractée par la cellule, recueillie de 8° à 90° de l'axe de la lumière incidente, "diffraction aux grands angles", (RALS Right Angle Light Scatter, ou SSC Side Scatter Channel) est relation proportionnelle avec l'hétérogénéité SSC Side Scatter Channel), est relation proportionnelle avec l hétérogénéité du du contenu cellulaire, présence/absence et taille de granulation cytoplasmique, forme et taille du noyau, rapport N/C, densité chromatinienne du noyau, ce Paramètre est appelé « Granularité » appelé « Détection aux petits angles : p g Taille Détection aux grands angles: « Granularité » II‐3: Mesure de l’hémoglobine g • L’hémoglobine est dosée par méthode spectrophotométrique (525 à 550 nm) après la lyse h é i (525 à 550 ) è l l des hématies. Echantillon LED Optique Diluant + lyse Cellule de mesure Photodétecteur II-4: Principe de mesure de l’hématocrite La hauteur de l’impulsion l impulsion engendrée par le passage d’une d une cellule dans le micro orifice est directement proportionnelle au volume de la cellule analysée. L’hématocrite est mesurée en fonction de l’intégration numérique du volume globulaire moyen (VGM) (VGM). Total volume VT Centrifuge VT HCT (%) = V / VT x100 V III‐ PRESENTATION DE COMPTEURS D’HEMATOLOGIE ET DE QUELQUES PARTIES IMPORTANTES Figure 2 Figure 1 SYSMEX XP‐300 SYSMEX XT Figure 3 : Modèle de bacs de comptage de GR et GB a. Présenter verticalement le tube d’échantillon d échantillon et actionner en même temps l’aspiration Figure 4 : Aspiration automatique de l’échantillon b. Attendre la rentrée b de l’aiguille d’aspiration p et retirer verticalement le tube d’échantillon Figure 5 : Retrait du tube d’échantillon de l’aiguille d’aspiration Figure 6 : Modèles de systèmes d’aspiration 6-a- Assemblage de seringues sans cartouche de protection 6-b- Assemblage de seringues avec cartouche de protection à soufflets 6- c- Pompes péristaltiques Figure 7 : Modes de présentation des réactifs du compteur d’hématologie 7-a : Un compartiment de l’appareil peut contenir une solution de lyse et de nettoyage Le diluant étant a l’extérieur nettoyage. l extérieur 7-b 7 b : Un pack ou carton de réactifs peut contenir le diluant, la lyse et la solution de nettoyage IV‐ Les bonnes pratiques d’utilisation des compteurs d’hé t l i d’hématologie •Utiliser toujours un onduleur avec prise de terre pour ll’alimenter alimenter •Permettre une bonne circulation d’air autour de l’appareil (50 cm du mur) •Allumer l’appareil et attendre environ 10 minutes avant son emploi •Vérifier qu’il n’y a pas de bulles d’air dans les tuyauteries de réactifs •Vérifier toujours les fuites de réactifs dans le circuit hydraulique •Vérifier toujours les fuites d’air ou de vide dans le circuit •Eviter les allumages et extinctions intempestives •Eviter la pollution des réactifs par la poussière •Ne pas tirer sur le bec d’aspiration après aspiration •Mélangez Mélangez soigneusement ll’échantillon échantillon avant emploi •Passer de temps à autre le sang de contrôle •Observer toujours la procédure d’arrêt de l’appareil V‐ Procédures d’entretien d’un compteur d’hématologie Se conformer toujours aux recommandations du fabricant • • • • • • • • • • • • • • 5‐1‐ Entretien journalier j Nettoyer régulièrement le corps de l’appareil Nettoyer l’appareil avant et après l’analyse avec de l’eau distillée Nettoyer l’appareil avec la solution de nettoyage préconisée Essuyer toute trace de sang 5 2 Entretien hebdomadaire 5‐2‐ Entretien hebdomadaire Effectuer un rinçage avec une solution détergente ou fongicide Nettoyage et rinçage des bacs de mesure y g ç g 5‐3 ‐ Entretien semestriel Remplacer les cordons des pompes de l’appareil 5‐4 ‐ Entretien annuel Remplacer les tuyauteries hydrauliques Remplacer les cordons des pompes Remplacer les cordons des pompes Remplacer les joints des seringues VI PRATIQUE : VI•Présentation Pé t ti d’un d’ automate t t d’hématologie d’hé t l i •Instructions avant et après utilisation quotidienne •Instructions I t ti h bd hebdomadaires d i •Instructions mensuelles •Instructions I t ti t tous l six les i mois i •Changement de réactifs •Remplacement R l t de d tuyaux t •Nettoyage général
