4. Techniques genes
Techniques d’étude des
Gènes et de leur Régulation
A. Galmiche, 2013-2014
3. Modulation de l‘expression des gènes:
techniques de surexpression,
Interférence ARN
2. Détection des acides nucléiques et mesure de l‘expression
des gènes:
Hybridations
PCR
Séquençage
1. Introduction et techniques de base
3. Modulation de l‘expression des gènes:
techniques de surexpression,
Interférence ARN
2. Détection des acides nucléiques et mesure de l‘expression
des gènes:
Hybridations
PCR
Séquençage
1. Introduction et techniques de base
Purification de l’ADN
Extraction des acides nucléiques:
lyse des cellules, élimination des protéines et des lipides,
pour ADN: élimination des ARN par ribonucléase
précipitation / chromatographies d‘affinité (silice)
ADN dosé par spectrophotométrie: absorbance UV (λ 260 nm)
Electrophorèse des Acides Nucléiques
migration effectuée en champ électrique constant et à pH8 : acides
nucléiques sont chargés négativement dans ces conditions
ADNs linéaires migrent à travers gel agarose avec vitesse
proportionnelle à leur taille (circularité et superenroulement interfèrent
avec migration)
Les ARN tendent à former des structures secondaires / tertiaires
interférant avec la migration: inclusion formamide
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
1
/
72
100%
