Lactobacillus gasseri THT 031301 LMG 26661

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Lactobacillus gasseri
THT 031301
LMG 26661
Dernière mise à jour : juillet 2012
Table des matières
1. Lieux de présence / Origine __________________________________________ 3
2. Classification ________________________________________________________ 3
3. Morphologie _________________________________________________________ 3
4. Identification ________________________________________________________ 4
a.
Identification génétique _____________________________________________________ 4
i.
Séquençage de l'ADNr 16S __________________________________________________ 4
ii.
Séquençage par la méthode AFLP ____________________________________________ 5
5. Résistance à l’acidité _________________________________________________ 6
6. Résistance aux sels biliaires (Oxgall) _________________________________ 7
7. Effets probiotiques ___________________________________________________ 8
8. Sécurité et tolérance _________________________________________________ 9
Lactobacillus gasseri THT 031301
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1. Lieux de présence / Origine
Le genre Lactobacillus représente le groupe des bactéries lactiques, le plus ubiquitaire. En
effet, ceux-ci colonisent tous les habitats contenant des glucides fermentescibles, des produits
d’hydrolyse des protéines, des vitamines, des facteurs de croissance et une basse teneur en
oxygène.
Plus particulièrement, l’espèce Lactobacillus gasseri est naturellement présente dans
l’appareil digestif de l’homme et des animaux.
La souche Lactobacillus gasseri THT 031301 a, quant à elle, été isolée d’un intestin humain.
2. Classification
Domaine :
Bacteria
Embranchement :
Firmicute
Classe :
Bacilli
Ordre :
Lactobacillales
Famille :
Lactobacillaceae
Genre :
Lactobacillus
Espèce :
gasseri
Souche :
THT 031301
3. Morphologie
Lactobacillus gasseri est une bactérie de type Gram positif. Elle se présente habituellement
sous forme de bâtonnets (0,6-0,8 µm x 3,0-5,0 µm). Ceux-ci peuvent être isolés ou réunis en
courtes chaînes.
Lactobacillus gasseri THT 031301
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4. Identification
a.
Identification génétique
i. Séquençage de l'ADNr 16S
La littérature considère que la détermination du pourcentage d'homologie entre les ADNr 16S
de plusieurs souches est une méthode suffisamment discriminante pour permettre
l'identification bactérienne.
Protocole
Les fragments de l’ADNr 16S de la souche THT 031301 (de 1148 paires de bases), obtenus
après amplification des ADN totaux, sont séquencés.
A partir de cette séquence, un pourcentage d'homologie est calculé par comparaison avec
d’autres séquences. Deux souches bactériennes sont considérées comme appartenant à la
même espèce si le pourcentage d'homologie entre les 2 ADNr 16S est supérieur ou égal à 97
%.
Résultats
Les taux d'homologie entre la séquence d’ADNr 16S de la souche Lb. gasseri THT 031301
avec d’autres séquences de souches appartenant au genre Lactobacillus sont repris dans le
Tableau 1.
Tableau 1. Pourcentage d'homologie obtenu par comparaison des séquences 16S de certaines souches de
Lactobacillus avec la séquence du gène codant pour l’ADNr 16S de la souche THT 031301.
Pourcentage d’homologie (%)
Lactobacillus gasseri LMG 9203
96,1
Lactobacillus johnsonii LMG 9436
95,6
Lactobacillus delbrueckii subsp delbrueckii LMG 6412
87,7
Lactobacillus acidophilus LMG 9433
89,0
Lactobacillus gasseri THT 031301
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La séquence d’ADNr 16S montre un pourcentage d’homologie le plus élevé pour la souche
type Lactobacillus gasseri LMG 9203. Ce taux étant toutefois en dessous de 97 %, ce test ne
permet pas possible de déterminer avec exactitude l’appartenance de cette souche à l’espèce
Lactobacillus gasseri.
ii. Séquençage par la méthode AFLP
La méthode AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) est une technique PCR
permettant l’obtention d’empreinte ADN du génome entier par une amplification sélective de
fragments de restriction. Cette empreinte ADN avec deux combinaisons de primer permet
l’identification de l’espèce et la caractérisation du niveau intra-espèce.
L’identification de la souche THT 031301 par cette technique a été réalisée par le laboratoire
BCCM/LMG (Bacteria Collection Laboratorium voor Microbiologie Universiteit Gent).
Résultats
L’analyse par segment des empreintes ADN AFLP de la souche THT 031301 avec les
empreintes ADN AFLP des taxa de bactéries lactiques (incluant les Bifidobacterium) identifie
la souche THT 031301 comme un Lactobacillus gasseri.
Lactobacillus gasseri THT 031301
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5. Résistance à l’acidité
Des tests de résistance à l’acidité ont été réalisés afin de confirmer l’utilisation de cette souche
comme nutraceutique. En effet, la survie de la souche lors de son passage au niveau stomacale
est un facteur important.
Protocole
Une culture de Lactobacillus gasseri est réalisée pendant 24 heures à 37 °C en aérobiose dans
du milieu MRS. La souche est ensuite inoculée dans différentes fioles dont le pH a été
diminué et dans une fiole témoin (aucune modification du pH). Après 3 heures d’incubation,
la résistance de la souche est calculée pour chaque pH.
Résultats
Taux de survie (%)
La résistance de la souche THT 031301 est présentée à la Figure 1.
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
94
3
0
0
2,5
2
pH
Figure 1. Résistance à l'acidité de la souche Lactobacillus gasseri THT 031301.
La souche THT 031301 est résistante à l'acidité lors d'un séjour de 3 heures à un pH de 3.
Lactobacillus gasseri THT 031301
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6. Résistance aux sels biliaires (Oxgall)
Des tests de résistance aux sels biliaires ont été réalisés afin de confirmer l’utilisation de cette
souche comme nutraceutique. En effet, la survie de la souche lors de son passage au niveau du
duodénum est un facteur important.
L'Oxgall est un mélange de sels biliaires d'origine bovine obtenu par évaporation de l’eau
contenue dans la bile fraîche. Il contient principalement les acides taurocholique et
glycocholique.
Protocole
Les tests sont réalisés sur des plaques de microtitration. Les sels biliaires (dont les
concentrations varient de 0,04 à 20 g/l) sont ajoutés dans les différents puits de même que la
suspension bactérienne et du milieu MRS frais complémenté de pourpre de bromocrésol, un
indicateur d’acidité. La plaque de microtitration est incubée à 37°C pendant 24h.
La concentration minimale inhibitrice (CMI) est comprise entre la concentration du dernier
puits où une croissance est observée (virement de l’indicateur d’acidité du pourpre au jaune)
et la concentration du puits où la concentration en sels biliaires est telle qu’aucune croissance
bactérienne n’est observée.
Résultats
La concentration minimale inhibitrice en sels biliaires est de 10 g/l pour la souche THT
031301. Cette souche est donc résistante aux sels biliaires puisqu’une concentration d’en
moyenne 4 g/l est généralement observée au niveau du duodénum.
Lactobacillus gasseri THT 031301
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7. Effets probiotiques
Depuis plusieurs années, les propriétés prophylactiques et thérapeutiques font l'objet de
nombreuses observations et études. Bien que certaines propriétés, dont l'augmentation de la
tolérance au lactose, sont aujourd'hui scientifiquement établies, il n'en est pas de même pour
d'autres caractères dont le pouvoir antitumoral. En effet, certaines propriétés n'ont pas encore
été démontrées chez l'homme, pour des raisons éthiques ou pratiques. Toutefois, l'ensemble
des travaux montre une impression globale positive sur leurs effets bénéfiques en santé
humaine et animale.
Cette souche appartient à une espèce dont les effets probiotiques sont largement documentés,
le nombre de publication les concernant étant de plus en plus nombreux et leur rythme de plus
en plus rapide, il est difficile de maintenir ce dossier à jour continuellement. La société THT
tient à votre disposition une série de publication concernant ces effets probiotiques. Il existe
aussi des sites Internet plus spécialisé dans ce domaine.
http://highwire.standford.edu
http://www.sciencedirect.com
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed
Lactobacillus gasseri THT 031301
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8. Sécurité et tolérance
Depuis des temps immémoriaux, l’Homme se sert de microorganismes pour la fabrication de
ces aliments fermentés (ex : fromage, pain, bière, vin, yaourt, ...). Toutefois, pour leur
commercialisation, des preuves plus matérielles de leur innocuité sont requises.
En Europe, l’EFSA (European Food Safety Authority) est chargée d’évaluer la sécurité
d’agents biologiques notifiés dans le cadre d’autorisation, avant commercialisation. Un large
éventail de micro-organisme a donc été soumis à son évaluation afin de garantir la
présomption d’innocuité reconnue ou QPS (Qualified Presumption of Safety). L’EFSA publie
depuis lors une liste, révisée annuellement, des agents biologiques possédant le statut QPS.
L’espèce Lactobacillus gasseri possède, depuis de nombreuses années, ce statut.
Lactobacillus gasseri THT 031301
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