TP TECHNOLOGIES CELLULAIRES DIALOGUE CELLULES

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TP TECHNOLOGIES CELLULAIRES
DIALOGUE CELLULES-MATRICE
ECTS
Cours (h)
T.D. (h)
T.P. (h)
Stage (semaines)
6
72
Mention du master transmettant la
fiche UE :
Composante de gestion de l’UE :
Master Infectiologie
Département de Biologie
Responsable de l’UE :
Christelle BIDAUD-BONOD
Statut du responsable :
PR
PROGRAMME DE L’UNITE D’ENSEIGNEMENT :
Thématique matrice extracellulaire : mécanismes de l’interaction cellules-fibronectine
L’objectif des expériences est d’une part d’identifier sur la molécule de fibronectine les sites responsables de l’interaction avec les
cellules et d’autre part d’analyser les effets de cette molécule matricielle sur la mise en place des structures d’adhérence.
1- Caractérisation de l’adhérence cellulaire sur fibronectine.
Production en système procaryote et purification de protéines correspondant au domaine central de la fibronectine,
ainsi que deux protéines mutées sur les séquences RGD ou PHSRN.
Quantification de l’adhérence des cellules sur la fibronectine naturelle et sur les protéines recombinantes.
Identification du récepteur intégrine impliqué.
2- Modifications du comportement cellulaire induites par la fibronectine.
Marquage de cellules au DiI et quantification de l’étalement cellulaire.
Remaniement du cytosquelette d’actine.
Etude des adhérences focales :
utilisation de cellules exprimant la vinculine-GFP (suivi de l’assemblage et du renouvellement par microscopie
confocale et FRAP),
mise en évidence du rôle de FAK (inhibiteurs et suivi de la phosphorylation).
Intervenants :
Claire Lethias, Caroline Cluzel-Grangeasse, Christelle Bonod-Bidaud.
Compétences acquises :
1- Méthodologiques :
Maîtrise de technologies utilisées en laboratoire de recherche.
Développement d’un raisonnement scientifique devant un problème biologique.
Analyse et synthèse d’articles scientifiques.
2- Techniques : Biologie Cellulaire et Biologie moléculaire
Culture cellulaire.
Culture et transformation bactériennes.
Production et purification de protéines recombinantes.
Transfection de cellules eucaryotes.
Immunomarquages.
Microscopie de fluorescence classique et confocale, FRAP.
Tests d’adhérence cellulaire.
Marquage des membranes cellulaires et quantification de l’étalement des cellules (utilisation du logiciel Image J).
Analyse des protéines par Western Blot et immunorévélation.
MUTUALISATION :
- UE mutualisée avec le Master Infectiologie