Autoanticorps antinucléaires : cibles et méthodes

90-30-0069-A
Autoanticorps antinucléaires : cibles
antigéniques
et méthodes d’identification
M. Fusaro, L. Musset
La recherche d’anticorps antinucléaires est un examen prescrit par le médecin généraliste ou le spécialiste
en
cas de suspicion de maladie auto-immune, principalement de connectivite (ou maladies auto-immunes
systémiques).
Ces anticorps sont une aide au diagnostic, mais leur présence est décrite dans de nom-
breuses
autres pathologies non auto-immunes et parfois chez les sujets sains. La détection des anticorps
antinucléaires
est un test de dépistage (le plus souvent réalisé par immunofluorescence indirecte) et en
cas
de positivité, il doit être complété par des tests d’identification. Les cibles des anticorps antinucléaires
regroupent
de nombreuses structures antigéniques localisées non seulement dans le noyau des cellules,
mais
également dans le cytoplasme, au niveau des membranes ou de structures transitoires liées au
cycle
cellulaire. Les aspects de fluorescence ne sont qu’indicatifs, mais ils permettent d’orienter le choix
des
tests secondaires d’identification. Les résultats fournis par le biologiste doivent être confrontés au
contexte
clinique ayant justifié la prescription des anticorps antinucléaires et interprétés en fonction des
techniques
utilisées, de leurs unités de mesure, et leur seuil de positivité, car il s’agit de tests pour lesquels
il
n’y a pas ou peu de standardisation.
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Mots-clés : Anticorps antinucléaires (AAN) ; Anti-ADN natif ; Antigènes nucléaires solubles (ENA) ; Connecti-
vite
; Ribonucléoprotéines (RNP)
Plan
■Introduction
1
■Quelles
sont les principales structures reconnues
par
les anticorps antinucléaires ? 2
Principales
structures reconnues au niveau du noyau 2
Principales
structures reconnues au niveau du cytoplasme 3
Autres
structures reconnues par les anticorps antinucléaires 3
■Quelles
sont les principales techniques utilisées au laboratoire
pour
l’identification des anticorps antinucléaires ? 3
Tests
unitaires 4
Tests
multiplexes 4
■Revue
et valeur diagnostique des principaux anticorps
antinucléaires
4
Acide
désoxyribonucléique et dérivés (histones, nucléosome) 4
Sm/RNP
5
SS-A/Ro
et SS-B/La 5
Scl70
5
Centromères
5
PM-Scl
5
Jo1
5
«
Proliferating cell nuclear antigen » 6
Ku
6
Ribosome
P 6
«
Dense fine speckles » (DFS70) 6
■Autres
anticorps pouvant être recherchés en fonction
du
contexte clinique et/ou l’aspect des antinucléaires
en
immunofluorescence indirecte 6
Autres
anticorps associés à la sclérodermie 6
Anticorps
des myosites 6
Anticorps
des maladies auto-immunes hépatiques 7
■Conclusion
7
Introduction
Les anticorps antinucléaires (AAN) sont des autoanticorps diri-
gés
contre divers constituants de nos cellules. Le terme d’AAN
englobe
des anticorps dirigés non seulement contre des cibles
antigéniques
localisées dans le noyau des cellules, mais plus lar-
gement
contre toute structure antigénique qu’elle soit nucléaire,
cytoplasmique
ou membranaire.
La
recherche de ces anticorps est prescrite en cas de sus-
picion
de maladie auto-immune, notamment de connectivite.
Au
laboratoire, la démarche diagnostique se fait habituellement
en
deux étapes : une recherche des AAN puis, en cas de posi-
tivité,
une identification de ces anticorps. Quelques situations
cliniques
évocatrices justifient parfois une identification, même
si
la recherche des AAN est négative, voire une identification
d’emblée
d’anticorps spécifiques. Pour le clinicien, il est important
de
connaître la ou les techniques mises en œuvre de fac¸on à inter-
préter
au mieux les résultats (en fonction des cibles antigéniques
EMC - Biologie médicale 1
Volume 11 > n◦3 > juillet 2016
http://dx.doi.org/10.1016/S2211-9698(16)71532-9
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90-30-0069-A Autoanticorps antinucléaires : cibles antigéniques et méthodes d’identification
Tableau 1.
Principales
cibles des anticorps antinucléaires recherchés en pratique courante.
Antigène Rôle Localisation Fluorescence associée Contexte clinique le plus
fréquent a
Sm Épissage, transport des ARNm Nucléoplasme Aspect finement moucheté
épargnant
le nucléole
LES
U1-RNP Syndrome de Sharp
(ou
LES, PR, sclérodermie)
SSA/Ro60 Régulation de la traduction des
ARNm
Nucléaire et cytoplasmique Moucheté finement granulaire
(aspect
caractéristique «SSA »
sur
cellules
HEp-2000TM)
SGS
primaire (prévalence plus
importante)
ou secondaire, LES,
lupus
néonatal
SSB/La Maturation ARN transcrits par
ARN
polymérase III
Nucléaire
parfois
cytoplasmique
Scl-70
Topo-isomérase I : relaxation de
l’ADN
Nucléaire et cytoplasmique Homogène, nucléoles cerclés avec
cytoplasme
ponctué
Sclérodermie
systémique
Jo1 Histidyltransférase : fixation de
l’histidine
sur son ARNt
Cytoplasmique
Cytoplasme ponctué avec
renforcement
périnucléaire
Myosites
(syndrome des
antisynthétases)
CENP-B
Protéines constituantes du
kinétochore
Nucléaire Moucheté (environ 46 points),
grains
réguliers alignés en
métaphase
Syndrome
CREST
Ribosome P Traduction des ARNm en
protéines
Cytoplasmique ± nucléolaire Cytoplasme diffus LES
PCNA
Protéine auxiliaire de l’ADN
polymérase
Nucléaire Moucheté hétérogène, parfois
marquage
ponctué des nucléoles
LES
Ku Kinase agissant lors de la
transcription,
la réplication et la
réparation
de l’ADN
Nucléaire
Homogène Syndrome de chevauchement
PM/sclérodermie
LES
Pm/Scl
Rôle probable dans la synthèse
des
ribosomes
Nucléole
Aspect homogène des nucléoles Syndrome de chevauchement
PM/sclérodermie
LES : lupus érythémateux systémique ; SGS : syndrome de Gougerot-Sjögren ; PM : polymyosite ; PR : polyarthrite rhumatoïde ; ARNm : acide ribonucléique messager ; ARNt :
ARN
de transfert ; ADN : acide désoxyribonucléique ; CREST : calcinose, phénomène de Raynaud, trouble de la motilité œsophagienne, sclérodactylie et télangiectasie.
aCes
anticorps ne sont pas spécifiques d’une pathologie. Il n’est rapporté dans ce tableau que le ou les principaux contextes cliniques dans lesquels ces anticorps sont
observés.
ayant été recherchées, des seuils de positivité de chaque tech-
nique)
et de pouvoir confronter ces résultats à ceux obtenus lors de
bilans
antérieurs. Pour le biologiste, il est important de connaître
les
différentes cibles des AAN, afin d’adopter une démarche diag-
nostique
rationnelle pour leur identification. Le biologiste peut
orienter
ses recherches en fonction de ses premières observations
(aspect
de la fluorescence des AAN, de leur titre par exemple) et
en
fonction du contexte clinique ayant justifié la prescription des
AAN.
Cet
article est consacré aux principaux AAN observés en pra-
tique
courante et aux tests disponibles pour leur identification.
Quelles sont les principales
structures
reconnues
par
les anticorps antinucléaires ?
Les AAN regroupent des anticorps reconnaissant des structures
exclusivement
nucléaires mais aussi des structures cytoplas-
miques,
membranaires (au niveau du noyau ou d’organites
comme
les mitochondries) ou de structures transitoires liées
au
cycle cellulaire comme le fuseau mitotique par exemple
(Tableau
1). Le terme d’anti-«
nucléaire » est devenu trop res-
trictif
dans son appellation, et pourrait être remplacé par
anti-«
cellulaire », mais cette dénomination n’a pas été retenue
par
les différentes sociétés savantes et leurs groupes de tra-
vail
pour l’harmonisation et la standardisation des pratiques
en
auto-immunité [1]. De la même fac¸on, les termes génériques
«
anti-antigènes nucléaires solubles » ou extractable nuclear anti-
gen
(ENA) ou « extrait de cellules thymiques » (ECT) ou extractable
calf
thymus sont inappropriés en pratique courante, mais toujours
d’usage.
Il faut savoir que le terme d’antigènes nucléaires solubles
fait
référence à des antigènes qui ne sont pas tous localisés dans le
noyau,
certains sont nucléaires et cytoplasmiques (SS-A), d’autres
exclusivement
cytoplasmiques (Jo1). Ce terme fait également
référence
à des antigènes « solubles » car initialement, les pré-
parations
antigéniques obtenues à partir de broyat de cellules
thymiques
ou de rate permettaient de séparer des antigènes
solubles
dans un tampon salin (SS-A, SS-B, Sm, U1- ribonucleo-
protein
[RNP] par exemple) et des antigènes non solubles dans
ces
mêmes tampons (acide désoxyribonucléique [ADN] natif ou
chromatine).
Cette notion n’a plus lieu d’être dans la mesure
où
les préparations antigéniques utilisées pour identifier les AAN
correspondent
à des protéines purifiées ou recombinantes. Toute-
fois
cette terminologie est toujours d’usage, et le terme d’ENA est
utilisé
dans cet article.
Principales structures reconnues au niveau
du
noyau
Membrane nucléaire
Cette membrane est constituée de deux feuillets en continuité
avec
le réticulum endoplasmique granuleux. Par endroit, ces deux
feuillets
fusionnent pour délimiter des pores dans cette membrane
nucléaire
et assurer la continuité entre le nucléoplasme et le cyto-
plasme
de la cellule. Deux catégories de cibles antigéniques sont
particulièrement
impliquées dans la recherche en pratique cou-
rante
des AAN : ce sont les anticorps anti-gp210, glycoprotéine de
210
kDa localisée au niveau des pores nucléaires et les anticorps
antilamines
(lamines A, B, C situés au niveau du feuillet interne
de
la membrane nucléaire).
Chromatine
Elle correspond à l’ADN natif double brin et aux protéines
qui
lui sont associées (histones et non-histones). In vivo, l’ADN
s’enroule
autour de quatre paires d’histones (H2A, H2B, H3 et
H4)
pour former une sorte de perle, l’ensemble étant stabilisé
par
l’histone H1 et appelé nucléosome. Ces nucléosomes sont
liés
entre eux par de l’ADN natif et chaque constituant (ADN,
histones,
nucléosomes) peut être la cible d’autoanticorps [2,
3].
Les
2EMC
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Autoanticorps antinucléaires : cibles antigéniques et méthodes d’identification 90-30-0069-A
Antinucléaire (AAN)
Immunofluorescence indirecte (HEp‐2)
Négatif
(< 1/160)
Si clinique
évocatrice
Négatif
Arrêt des
investigations Positif
Dépistage des ENA
– Elisa
– ou autre test
utilisant un mélange
d’antigènes connus
Identification des ENA
– Elisa
– Immunodot
– Multiplex™
– …
Soit
Soit
Positif *
(≥ 1/160e)
(quel que soit l’aspect)
Figure 1. Arbre décisionnel. Stratégie diagnostique pour la
recherche
et l’identification des anticorps antinucléaires (AAN).
La
positivité des AAN (≥ 1/160) nécessite l’identification de
ces
autoanticorps. Astérisque : la recherche des anticorps anti-
antigènes
nucléaires solubles (ENA) n’exclut pas la recherche
également
des anti-acides désoxyribonucléiques (ADN) natifs.
En
l’absence de fluorescence, le clinicien peut toutefois pres-
crire
la recherche spécifique de certains anticorps difficiles à
repérer
parfois en immunofluorescence indirecte et ce si le
contexte
clinique le justifie. Ce sont en particulier les anticorps
anti-SS-A
et anti-Jo1. Elisa : enzyme-linked immunosorbent assay.
protéines du centromère (site d’attache des chromatides entre
elles)
ou du kinétochore (site de fixation des chromatides aux
fibres
du fuseau mitotique, avant leur séparation et migration
vers
les deux pôles de la cellule) sont également la cible d’une
réponse
autoanticorps vis-à-vis de différentes protéines dont les
plus
couramment recherchées sont appelées CENP-A, CENP-B et
CENP-C.
Nucléole
Un à cinq nucléoles sont visibles par cellule. C’est une structure
très
riche en acide ribonucléique (ARN) et qui est le lieu de syn-
thèse
des ribosomes. Cette synthèse est régulée par de nombreuses
enzymes
et protéines, pouvant toutes être la cible d’autoanticorps
(ARN
polymérase I, topo-isomérase, fibrillarine, nucléoplasmine
par
exemple).
Nucléoplasme
Il correspond à la fraction soluble du noyau contenant la chro-
matine
et divers ARN de faible masse moléculaire et riches en
uridine.
Pour cette raison, ils sont appelés small nuclear RNA
(snRNA)
et numérotés de 1 à 10 avec le préfixe U pour uridine.
À
ces structures sont associées d’autres protéines pour former des
complexes
ribonucléoprotéiques dont les plus fréquemment iden-
tifiés
sont les antigènes Sm et U1-RNP.
Matrice protéique
Il s’agit d’un réseau de constituants granulofibreux localisés à
l’intérieur
du noyau, jouant le rôle de « nucléosquelette » et impli-
qué
dans l’organisation spatiale de l’ADN, sa réplication et sa
transcription.
Principales structures reconnues au niveau
du
cytoplasme
C’est un nombre considérable de structures antigéniques pou-
vant
potentiellement être la cible d’autoanticorps [4]. Dans le
cytoplasme
se trouvent divers organites tels que mitochondries,
ribosomes,
lysosomes, réticulum endoplasmique, appareil de
Golgi,
mais aussi de nombreuses protéines à activité enzymatique
ou
non, liées ou non à de l’ARN pour former des RNP appelées
human
cytoplasmique ribonucleoprotein (hYRNP). Certaines struc-
tures
cytoplasmiques sont issues du noyau comme les ARN de
transfert
(ARNt) et les enzymes qui leur sont associées (synthé-
tases).
L’histidyl-ARNt synthétase ou Jo1 est la plus connue et
recherchée.
Dans le cytoplasme se trouvent également divers
constituants
du cytosquelette de la cellule (actine, vimentine,
tubuline,
cytokératines, etc.).
Autres structures reconnues par les anticorps
antinucléaires
De nombreuses structures sont liées au cycle cellulaire et ne
deviennent
décelables qu’au cours de la mitose. C’est le cas par
exemple
du proliferating cell nuclear antigen (PCNA), qui est un
antigène
dont l’expression est corrélée à la synthèse d’ADN ; il
est
identifié comme une protéine auxiliaire de l’ADN polymérase
delta.
D’autres sont liées à l’appareil mitotique, principalement
constitué
de trois structures : les centrioles, les centromères et le
fuseau
mitotique. Parmi les antigènes liés au fuseau mitotique,
les
plus représentés sont les nuclear mitotic apparatus (NUMA),
d’autres
sont liés à la formation de la plaque équatoriale tels que
les
centromères et les mitotic spindle antigen (MSA). À noter que dès
la
prophase, la membrane nucléaire disparaît, pour ne se recons-
tituer
qu’en fin de télophase.
Quelles sont les principales
techniques
utilisées au laboratoire
pour
l’identification des anticorps
antinucléaires
?
Au laboratoire, la démarche diagnostique se fait généralement
en
deux étapes : une recherche des AAN puis, en cas de posi-
tivité,
une identification de ces anticorps. Un arbre décisionnel
est
proposé (Fig. 1) et peut être adapté selon l’équipement et/ou
le
recrutement du laboratoire [4–6]. Pour la pratique, le clinicien
ou
le biologiste doit compléter une recherche d’AAN positive
à
titre significatif par une recherche d’anti-ADN natif et une
recherche
d’anticorps anti-antigènes nucléaires solubles (ou ENA)
qui
regroupe habituellement les anticorps anti-Sm, anti-RNP, anti-
SS-A,
anti-SS-B, anti-Scl70, et anti-Jo1 (cf. infra). Il est important,
à
ce stade, de confronter ces premiers résultats au contexte cli-
nique
en sachant que les AAN peuvent être présents chez les sujets
sains,
qu’ils peuvent précéder parfois l’émergence d’une maladie
auto-immune
plusieurs années avant les premiers signes cliniques,
et
enfin, qu’ils sont parfois présents en dehors de toute mala-
die
auto-immune (autres maladies inflammatoires, infections
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90-30-0069-A Autoanticorps antinucléaires : cibles antigéniques et méthodes d’identification
virales, prise de médicaments inducteurs, etc.) [7–11]. Enfin,
l’identification
de certaines cibles antigéniques peut être justifiée
dans
un contexte clinique évocateur, à la demande du clinicien,
même
si les recherches des AAN et/ou des ENA classiques sont
négatives.
Il
existe de nombreuses techniques permettant d’identifier les
anticorps
présents dans le sérum d’un patient. Même dans les
situations
où les anticorps donnent un aspect de fluorescence
caractéristique
(anticorps anti-centromères, ou anti-SS-A par
exemple),
ces anticorps doivent être confirmés par une technique
d’identification.
Elles utilisent toutes des antigènes (protéines ou
peptides)
purifiés ou recombinants fixés sur différents supports.
Les
modes de révélation de la réaction antigène/anticorps dif-
fèrent
selon les techniques mises en œuvre. Quelle que soit la
technique,
il s’agit de tests pour lesquels il n’y a pas ou peu
de
standardisation, et les résultats sont exprimés généralement
en
unités arbitraires (UA), ce qui rend les résultats difficilement
comparables
pour le suivi d’un patient d’un laboratoire à l’autre,
mais
aussi pour l’analyse et la comparaison des données de la
littérature.
Tests unitaires
Techniques « enzyme linked immunosorbent
assay
»
Il s’agit de techniques en phase solide, où l’antigène d’intérêt
est
fixé au fond d’un puits (plaque de 96 puits) ; les sites de liai-
son
non spécifiques sur la plaque sont saturés par l’ajout d’une
protéine
inerte. Après des étapes d’incubations et de lavages
avec
successivement le sérum du malade et une antiglobuline
couplée
à une enzyme, la présence d’anticorps est révélée par
l’ajout
d’un substrat chromogénique et lecture par colorimétrie.
Afin
de préserver certains épitopes conformationnels, des tech-
niques
enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) par capture ont
été
développées. L’antigène d’intérêt est capturé par des anti-
corps
monoclonaux fixés sur la plaque, et présentés aux anticorps
éventuellement
présents dans le sérum. La suite de la technique
reste
identique à celle d’un Elisa classique. La coloration est
proportionnelle
à la quantité d’anticorps fixée ainsi qu’à leur
affinité.
Chimiluminescence
L’antigène est lié de manière covalente à des billes magnétiques
via
une protéine d’ancrage. Après incubation avec le sérum du
patient,
les billes sédimentées à l’aide d’un aimant sont lavées puis
mises
en présence d’anticorps anti-immunoglobulines G (IgG)
humains
couplés à de l’isoluminol. Après une nouvelle étape de
lavages,
des solutions de peroxyde d’hydrogène et d’hydroxyde
de
sodium sont ajoutées (activateurs), conduisant à l’oxydation
de
l’isoluminol et l’émission de photons. La luminescence, pro-
portionnelle
à la quantité d’anticorps fixée, est mesurée par
le
système optique de l’automate ; le résultat est généralement
exprimé
en UA ou relative light units (RLU). La grande sensi-
bilité
de cette technique de détection et sa gamme de mesure
étendue
permettent d’obtenir des résultats dans un délai très
court
(environ 30 min) et de s’affranchir plus souvent des redi-
lutions
pour certains sérums dont les taux d’anticorps sont
élevés.
Méthode «fluorescent
enzyme immunoassay »
Il s’agit d’une technique dérivée de l’Elisa qui se démarque par
une
réaction fluorescente pour la mise en évidence des anticorps.
Dans
certaines applications, l’antigène peut être fixé sur un sup-
port
non plan permettant une plus grande surface d’interaction
avec
les anticorps potentiels.
Méthode «radio-immunoassay »ou
test de Farr
Il s’agit d’une technique de dosage radio-immunologique
permettant
le dosage des anticorps anti-ADN natif (cf. article spé-
cifique [12]).
Tests multiplexes
Contrairement aux techniques précédentes, ces tests per-
mettent
la détection simultanée de plusieurs anticorps ou profils
d’anticorps
correspondant à des contextes cliniques particuliers
(connectivite,
maladie auto-immune du foie, ou myosite par
exemple).
Cependant, le laboratoire utilise des réactifs commer-
cialisés
dont les profils d’anticorps dans chaque panel sont définis
par
le fournisseur et ne peuvent être modifiés.
Immunodot
Les différents antigènes d’intérêts sont déposés sous forme de
spot
(dot) sur une membrane de nitrocellulose et mis en contact
avec
une dilution appropriée du sérum à étudier. La suite du test
repose
sur le même principe que la technique Elisa. Les antigènes
utilisés
par les fabricants sont le plus souvent des peptides ou pro-
téines
recombinantes. Cette technique est plus simple à mettre
en
œuvre et permet une analyse multiparamétrique. Dans la plu-
part
des immunodots commercialisés, un contrôle positif ainsi
qu’un
contrôle négatif, faisant office de seuil de positivité (cut-
off),
sont présents sur chaque bandelette. L’interprétation peut se
faire
à l’œil nu mais il est préférable d’utiliser un scanner per-
mettant
une plus grande objectivité et l’acquisition d’un résultat
quantitatif [13,
14].
Néanmoins, l’hétérogénéité des différents com-
plexes
antigènes/anticorps rend difficile le choix d’un seul seuil
de
positivité dans le cadre d’une analyse multiparamétrique.
Technologie multiplexe (LuminexTM)[15–17]
On désigne sous ce terme un système analytique multiplex. Le
support
est constitué de microbilles en polystyrène sur lesquelles
sont
fixés les antigènes d’intérêt. Ces microbilles peuvent être
magnétiques,
ce qui a pour but notamment de faciliter les étapes
de
lavages. Chaque antigène est couplé de manière covalente à
une
microbille de couleur différente (cette couleur résultant du
mélange
en proportions variables de deux fluorochromes). Les
billes
sont incubées avec le sérum du patient, elles sont ensuite
lavées
puis incubées avec un anticorps anti-IgG humain conju-
gué
à un fluorochrome différent de celui incorporé dans les billes.
Après
un second lavage, les billes sont analysées à l’aide d’un
cytomètre
de flux. Chaque bille passe devant deux lasers, l’un
permet
l’identification de la bille grâce à sa signature colorée et
donc
de l’antigène qu’elle porte, l’autre permet la quantification
de
l’anticorps fixé par mesure de l’intensité de la fluorescence.
Les
résultats sont exprimés en UA ou en LuminexTM Unit (LU).
Le
seuil de positivité est donné par le fabricant et varie selon le
système
et les réactifs utilisés. Cette technologie permet une ana-
lyse
multiparamétrique, mais elle ne permet pas d’adapter le profil
d’anticorps
car ceux-ci sont définis par le fournisseur (profil pour
les
anticorps des connectivites, des maladies auto-immunes du
foie,
des vascularites par exemple).
Revue et valeur diagnostique
des
principaux anticorps
antinucléaires
Acide désoxyribonucléique et dérivés
(histones,
nucléosome)
Les anticorps anti-ADN font partie des AAN et doivent être
recherchés
en cas de dépistage positif quel que soit l’aspect de
fluorescence [12].
Les
anticorps anti-histones sont présents chez la quasi-totalité
des
lupus induits par les médicaments. Toutefois, leur positivité
dans
de nombreux autres rhumatismes inflammatoires les rend
peu
spécifiques et donc peu utiles pour poser un diagnostic. Leur
utilité
pour le diagnostic différentiel entre lupus maladie et lupus
iatrogène
médicamenteux n’est plus reconnue [18]. Les autoanti-
corps
anti-nucléosome constituent une famille dans laquelle on
trouve
les anticorps anti-ADN natif, les anticorps anti-histones,
et
les anticorps anti-nucléosomes « restreints ». Ces derniers sont
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Autoanticorps antinucléaires : cibles antigéniques et méthodes d’identification 90-30-0069-A
dirigés contre des épitopes conformationnels et reconnaissent la
structure
native du nucléosome mais pas ses constituants pris
individuellement
(ADN, histones). Ils restent peu prescrits par les
médecins,
souvent en deuxième intention devant une clinique
évocatrice
et une immunofluorescence en discordance avec des
anticorps
anti-ADN négatifs [3,
18, 19].
Sm/RNP
Les autoanticorps anti-Sm et anti-RNP sont dirigés contre
des
éléments du splicéosome, nécessaire à l’élimination des
introns
ou épissage du pré-ARN messager (ARNm). Ce complexe
supramoléculaire
est composé de RNP nucléaires (small nuclear
ribonucleoprotein
[snRNP]) qui sont de petits ARN nucléaires asso-
ciés
à des protéines. Ces dernières sont les cibles des autoanticorps
et
varient selon la spécificité Sm (B/B’, D, E, F ou G) ou RNP
(peptides
A, C, 68 kDa).
Sm
Les anticorps anti-Sm sont spécifiques du lupus érythémateux
systémique
(LES) et font partie des critères de classification de la
maladie [20].
Cependant, ils ne sont présents que dans 10 à 30 % des
cas
de LES ; ce pourcentage varie selon la population étudiée (plus
important
chez les Afro-Américains que chez les Caucasiens) et
la
technique utilisée (prévalence multipliée par un facteur 2 avec
les
techniques immunoenzymatiques comparées aux techniques
d’immunodiffusion) [21].
L’anticorps Sm est presque toujours asso-
cié
à la présence concomitante d’un anti-RNP, celui-ci pouvant
apparaître
plus tard dans l’évolution de la maladie s’il n’est pas
détecté
au diagnostic [10,
22, 23].
RNP
Les anticorps dits «complets »
sont ceux qui réagissent avec
les
trois spécificités antigéniques citées ; ils sont spécifiques de la
connectivite
mixte ou syndrome de Sharp. Ils font partie des cri-
tères
de classification puisque présents chez la quasi-totalité des
patients
atteints de cette maladie [24]. Ils peuvent aussi être obser-
vés
dans d’autres connectivites (LES, sclérodermie systémique,
syndrome
de Gougerot-Sjögren) avec une sensibilité allant de 15
à
30 %, mais ils sont le plus souvent «incomplets
»et associés à
d’autres
anticorps anti-ENA [25].
SS-A/Ro et SS-B/La
SS-A : Ro52/Ro60
Les anticorps anti-Ro/SS-A sont dirigés contre deux protéines
différentes
(de masse moléculaire de 52 kDa et 60 kDa) codées par
des
gènes différents et situées dans un complexe macromolécu-
laire
différent.
L’antigène
Ro60 fait partie d’un complexe ribonucléique impli-
qué
dans la régulation de la traduction de l’ARNm alors que
l’antigène
Ro52 a été identifié comme étant la protéine TRIM21
et
joue un rôle important dans la défense immunitaire. Les anti-
SS-A
Ro60 ± Ro52 sont fréquemment détectés dans le syndrome
de
Gougerot-Sjögren primaire (60–95 % selon les auteurs), moins
souvent
s’il s’agit d’un syndrome de Gougerot-Sjögren secon-
daire
(30 %). Ils sont aussi rencontrés dans le LES (15–35 %) et
notamment
dans deux formes particulières : le lupus cutané sub-
aigu
(70 %) et le lupus néonatal. Cette dernière situation, due
au
passage transplacentaire des anti-SS-A, peut entraîner un bloc
auriculoventriculaire
chez le nouveau-né (1–2 % des cas) dont les
conséquences
se révèlent gravissimes. Enfin, leur présence est rare-
ment
signalée dans d’autres connectivites telles que la polyarthrite
rhumatoïde,
la sclérodermie ou les polymyosites. Les anti-
corps
anti-Ro52 sans réactivité pour Ro60 sont d’interprétation
plus
complexe, d’une très grande immunogénicité ; la protéine
TRIM21
est aussi connue pour interagir avec le fragment Fc des
IgG
humaines. La signification clinique de leur positivité isolée
est
assez controversée puisqu’ils sont associés à tout un panel de
maladies
(myopathie inflammatoire idiopathique, sclérodermie
systémique,
hépatite auto-immune, infections virales, néoplasies,
lupus
néonatal, syndrome de Gougerot-Sjögren) mais aucune de
manière
spécifique, et aussi détectés chez 3 % des sujets sains. Tou-
tefois,
plusieurs travaux ont montré que ces anticorps pouvaient
être
mis en évidence au cours de pneumopathies interstitielles
diffuses [26].
Au vue de ces discordances d’interprétation, il est pri-
mordial
pour le laboratoire d’effectuer une recherche séparée de
ces
deux anticorps et de l’indiquer dans son compte-rendu.
SS-B : La
L’antigène SS-B ou La est une protéine intervenant dans la matu-
ration
des ARN transcrits par l’ARN polymérase III.
La
présence d’un anticorps anti-SS-B seul est très rare, elle
doit
faire suspecter un faux positif puisque cet autoanticorps est
presque
toujours associé aux anti-SS-A. Sa détection est associée
à
deux principales pathologies : syndrome de Gougerot-Sjögren
primitif
où il est retrouvé dans la moitié des cas et le LES. À
noter
que la présence d’un anticorps anti-SS-B sans anti-SS-A
n’a
pas de valeur diagnostique pour le syndrome de Gougerot-
Sjögren [27].
Scl70
Cible de l’anticorps anti-Scl70, la topo-isomérase I joue un rôle
dans
la transcription et la réplication de l’ADN en permettant le
relâchement
de la forme superenroulée.
Détecté
dans 9 à 42 % des sclérodermies, cet anticorps est très
spécifique
de cette connectivite, en particulier dans sa forme
cutanée
diffuse [28–30]. Sa présence est associée à un mauvais pro-
nostic
avec des atteintes pulmonaires, musculosquelettiques et
cardiaques
plus fréquentes ainsi qu’un taux de mortalité plus
élevé.
L’association parfois de plusieurs techniques de détection
permet
d’augmenter la sensibilité [31].
Centromères
Les cibles antigéniques sont les protéines constituantes du kiné-
tochore,
assemblage protéique liant les régions centromériques
des
chromosomes au fuseau mitotique ; actuellement, neuf pep-
tides
sont décrits (CenP -A, -B, -C, -D, -E, -F, -G, -H, -O).
Les
anticorps dirigés contre les protéines A, B et C sont les
plus
fréquemment retrouvés lorsque l’aspect en immunofluores-
cence
est évocateur (concordance 90–95 %). Les anti-centromères
sont
associés à la sclérodermie avec une prévalence beaucoup
plus
importante chez les sujets caucasiens (30–40 %) que chez
les
Afro-Américains (5 %). Ils présentent une excellente corréla-
tion
avec le syndrome CREST (associant calcinose, phénomène
de
Raynaud, trouble de la motilité œsophagienne, sclérodac-
tylie,
et télangiectasie), forme particulière de la sclérodermie
limitée
avec 57 à 82 % des patients ayant des anticorps anti-
centromères [32].
PM-Scl
C’est un antigène multiprotéique constitué de 11 à 16 protéines.
Les
protéines de 75 et de 100 kDa sont les cibles principales utili-
sées
en routine pour la recherche de ces anticorps. Compte tenu
de
leur localisation nucléolaire, tout laisse penser que ces pro-
téines
interviendraient dans la synthèse des ribosomes. Comme
son
nom l’indique, il est retrouvé dans des syndromes de chevau-
chement
entre polymyosites et sclérodermies avec une corrélation
atteignant
les 80 %[33]. La présence de cet anticorps est générale-
ment
associée à un bon pronostic.
Jo1
Premier des anticorps anti-synthétases décrit, il fait par-
tie
des anticorps spécifiques des myosites. L’anti-Jo1 reconnaît
l’histidine-ARNt-synthétase,
enzyme cytoplasmique permettant
la
fixation de l’histidine sur son ARNt. Malgré les sept autres anti-
corps
anti-synthétases identifiés à ce jour, l’anti-Jo1 reste de loin
le
plus fréquent puisqu’il est retrouvé dans 20 % des myosites [34].
Les
anticorps anti-synthétases, rencontrés dans un contexte de
polymyosite,
sont associés à un phénotype clinique particulier
EMC - Biologie médicale 5
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