RECHERCHE D’AGGLUTININES IRRÉGULIÈRES Principes et interprétation Réalisé par Dr Kajeiou Zaïnab PLAN: INTRODUCTION PRINCIPE TECHNIQUE INTERPRÉTATION CONCLUSION INTRODUCTION INTRODUCTION • La recherche d’agglutinines irrégulières= recherche d’anticorps anti-érythrocytraire, est une analyse biologique essentielle pour la prévention et le diagnostic des accidents immunohémolytiques transfusionnels et le diagnostic des incompatibilités fœto-maternelles. • Il s’agit d’Ac qui ne sont pas toujours présents dans le plasma, d’où leur appellation: IRRÉGULIER • Anticorps: immunoglobuline capables de se fixer spécifiquement à l’antigène qui induit sa formation • 5 Classes : IgG igM IgE IgA IgD • 2 types d’Ac: ✔ Naturels ✔ Immuns • 2 types d’Ac: ✔ Réguliers: toujours présents en absence de l’Ag spécifique ✔ Irréguliers: pas toujours présents en absence de l’Ag spécifique → AC naturels peuvent être régulier et irrégulier →Ac immuns sont TOUJOURS irréguliers Différence entre ac naturels irréguliers et Ac immuns irréguliers Caractéristiques sérologiques Ac naturels Ac immuns Classe d’Ig Ig M Ig G Transfert placentaire Non Oui Apparition Sans pré-immunisation préalable Suite à une immunisation Optimum thermique Ac froid : peu actif à 37°C Ac chaud : actif à 37°C Présence Réguliers/ irréguliers TOUJOURS irréguliers PRINCIPE PRINCIPE • Il s’agit de détecter dans le plasma du patient, un ou plusieurs anticorps dirigés contre un ou plusieurs antigènes de la surface du globule rouge, autres que ceux du système ABO. • On fait réagir le plasma d’un patient avec une gamme d’hématies-tests de groupe O et de constitution phénotypique connue, appelée hématies détectrices ou PANEL. LA RAI se déroule en 2 ÉTAPES : 1. 2. Dépistage des agglutinines irrégulières Identification des agglutinines irrégulières 1. Dépistage • Le dépistage est basé sur l’utilisation d’un panel, dit de dépistage, de 3 hématies au minimum exprimant les antigènes réglementairement définis. • Dépistage positif : indique la présence dans le plasma du patient d’un ac anti-érythrocytaire ou plus • Le panel de dépistage doit associer plusieurs antigènes immunogènes : D, C, c, E, e, K, k, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, M, N, S, s, P1 au moins. Cw, Kpa, Lua si possible. 2. Identification Obligatoire en cas de dépistage positif, Elle consiste à déterminer la spécificité du ou des Ac présents, faisant appel à un panel de 10 hématies tests au minimum dit PANEL D’IDENTIFICATION. Cette phase doit permettre l’identification d’un Ac courant isolé, ainsi qu’une orientation dans l’identification des mélanges d’anticorps TECHNIQUE TECHNIQUE La technique utilisée dans notre laboratoire est la TECHNIQUE PAR FILTRATION: Cette technique nécessite l'utilisation d'une carte constituée d'une micro-cupule surmontant une colonne de filtration. Cette colonne de filtration contient du gel. Lors de la centrifugation, les globules rouges sont dirigés au fond de la colonne de filtration. Pendant cette phase de migration, les hématies possédant un complexe immun antigène-anticorps vont être bloquées par le gel. Elles ne vont donc pas atteindre le fond de la colonne. Les colonnes de filtration contiennent une antiglobuline humaine polyvalente (anti-IgG et anti-complément). L'antiglobuline utilisée est essentiellement de deux classes : un anti-IgG ou un anti-Complément. L'antiglobuline Anti-IgG est composée d'immunoglobulines dirigées contre le fragment Fc de l'IgG. Celle-ci peut donc mettre en évidence des anticorps de type IgG fixés sur les globules rouges testés. L'antiglobuline de type anti-complément est essentiellement composée d'anti-C3d. Celle-ci permet de mettre en évidence une sensibilisation (complexe immun anticorps-antigène) des globules rouges par un anticorps de classe IgM ou IgG ayant activé le complément. TECHNIQUE 1. Identifier chaque carte ou partie de carte (suivant le nombre de globules rouges test utilisés pour l’échantillon) par le nom ou le numéro d'échantillon correspondant; identifier pour chaque microtube le globule rouge test à distribuer. 2. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. 3. Remettre en suspension les globules rouges avant utilisation. 4. Déposer 50 μl de chaque suspension de globules rouges tests prêts à l'emploi dans la cupule des microtubes appropriés. 5. Ajouter immédiatement 25 μl de sérum ou de plasma dans la cupule des microtubes correspondant à l’échantillon testé. En aucun cas le délai entre la distribution des globules rouges et celle du plasma ou du sérum ne doit dépasser 10 minutes. 6. Incuber 15 minutes à +37°C dans ScanGel Incubator. 7. Centrifuger 10 minutes dans ScanGel Centrifuge. 8. Lire les réactions. 1. Identifier chaque carte ou partie de carte (suivant le nombre de globules rouges test utilisés pour l’échantillon) par le nom ou le numéro d'échantillon correspondant; identifier pour chaque microtube le globule rouge test à distribuer. 2. Retirer la totalité de la languette aluminium des cartes. 3. Remettre en suspension les globules rouges test avant utilisation. 4. Déposer 50 μl de chaque suspension de globules rouges tests prêts à l'emploi dans la cupule des microtubes appropriés. 5. Ajouter immédiatement 25 μl de plasma dans la cupule des microtubes correspondant à l’échantillon testé. 6. Incuber 15 minutes à +37°C dans un Incubateur. 7. Centrifuger 10 minutes dans une Centrifugeuse. Lire les réactions. INTERPRÉTATION INTERPRÉTATION Les globules rouges non agglutinés sont collectés au fond du microtube, tandis que les agglutinats sont retenus dans la hauteur de gel. INTERPRÉTATION Les globules rouges non agglutinés sont collectés au fond du microtube, tandis que les agglutinats sont retenus dans la hauteur de gel. Leur position dans le gel détermine l’intensité de la réaction. Le panel de dépistage doit associer plusieurs antigènes immunogènes : D, C, c, E, e, K, k, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, M, N, S, s, P1 au moins. Cw, Kpa, Lua si possible. CONCLUSION CONCLUSION Le résultat des RAI a un délai de validité : - Inférieur ou égal à 3 jours (72h) si: ATCD de transfusion, grossesse ou greffe dans les 6 mois précédents. - Inférieur ou égal à 21 jours en absence d'ATCD de transfusion, grossesse ou de greffe dans les 6 mois précédents. THANK YOU Références [1] « Agglutinines irrégulières - RAI - recherche/identification - sang total | Référentiel des examens », Eurofins Biomnis. https://www.eurofins-biomnis.com/en/english-news/. [2] « Polycopié TP IH 2017.pdf ». Faculté de pharmacie de Monastir [En ligne]. Disponible sur: http://www.fphm.rnu.tn/sites/default/files/Polycopi%C3%A9%20TP%20IH%202017.pdf [3] « Agglutinines irrégulières - Lab Cerba Home. .pdf ». [En ligne]. Disponible sur: https://www.labcerba.com/files/live/sites/Cerba/files/documents/FR/0082F.pdf [4] S. Web, « Tout sur la transfusion vous informe sur l’immuno-hématologie appliquée à la transfusion », Tout sur la transfusion. https://www.toutsurlatransfusion.com/immunohematologie/ih/definition.php [5] Livre hématologie et immunologie techniqués, collection Biologie technique CNDP Jean Figarella et Guy Leyral
