Techniques utilisés en immunologie

TECHNIQUES UTILISES EN
IMMUNOLOGIE (1 ET 2) :
1) PURIFICATION DES ANTICORPS :
1) Chromatographie d’affinité :
 Principe : purification d’un anticorps spécifique d’un antigène à partir d’un mélange
complexe d’anticorps
 Utilisation d’un tampon acide (pH 2.5-2.7)
 Anticorps rouge reste accroché aux billes et le marron descend
 Désolidarisation du complexe anticorps-gel à l’aide d’un tampon d’élution (pH 2.5-2.7)
Les anticorps polyclonaux sont un mélange d'anticorps reconnaissant différents épitopes sur un antigène
donné. Au cours de la réponse immunitaire, un organisme synthétise des anticorps dirigés contre
plusieurs épitopes d'un antigène : réponse polyclonale.

Les anticorps monoclonaux sont des anticorps ne reconnaissant qu'un seul type
d’épitope sur un antigène donné. Les anticorps monoclonaux sont par définition tous
identiques et produits in vitro par un seul clone de plasmocyte : l’hybridome.
Un lymphocyte synthétise un seul type de plasmocytes  un seul type d’anticorps
produits.
Par production in-vitro  fabrication des hybridomes à partir de cellules cancéreuses.
PRODUCTION D’HYBRIDOMES A PARTIR DE CELLULES CANCEREUSES
I.2.2
IMMORTALISATION DE CELLULES B A PARTIR DU VIRUS D’EPSTEIN
BARR
 Utilisation de cellules quiescentes puis infection du virus d’Ep. Barr  transformation en
cellules « immortels ».
 Virus SB-40
Combinaison entre activités cancéreuses (dvpt à
l’infini) et plasmocytes (synthèse d’anticorps) :
Injection sur souris prélèvement sur la rate
(lymphocytes B bcp stockés)
On les mets dans des puits (une cellule d’hybridomes
par puit)
Stimulation par des épitopes antigéniques de
l’antigène injecté  synthèse d’anticorps 
amplification de la réaction en mettant dans un plus
grand récipient
Broyage  obtention du filtrat
Fusion entre plasmocytes et

PRODUCTION D’HYBRIDOMES A PARTIR DE CELLULES
TRANSFORMEES PAR LE VIRUS SV40
Le génome du virus SV40 code pour l’antigène T (AgT), oncoprotéine impliquée dans l’immortalisation
cellulaire et interagissant avec plusieurs protéines cellulaires (p53, pRb).
2) REACTIONS DE PRECIPITATION :
1) EN MILIEU LIQUIDE :
 Excès d’anticorps : peu de complexes  peu de précipitations
 Equivalence : précipitations moyennes
 Excès d’antigène : beaucoup de précipitation

EN MILIEU SOLIDE : IMMUNODIFFUSION DOUBLE EN GEL
TECHNIQUE D’OUCHTERLONY :
 Dépôt de solution  diffusion de la solution à travers
 Plus la diffusion se fait + la concentration diminue
 Ligne de précipitation  anticorps reconnaît l’antigène
 Plusieurs Ag ou un antigène avec plusieurs épitopes Agéniques : chaque anticorps se précipitent
pour former plusieurs lignes de précipitation. (Acorps polyclonaux)
 Ag avec un seul épitope Agénique : anticorps précipitent pour former une ligne de précipitation
(Acorps monoclonaux).
Pas d’arc de précipitation : pas de
reconnaissance.
Parenté :

-2 Ag des puits adjacents ont des lignes qui se suivent : identité
-2 Ag des puits adjacents n’ont pas de lignes qui se suivent : non-identité.
-2 Ag des puits adjacents ont des lignes qui se suivent et qui ne se suivent pas (formation d’un
éperon).