TECHNIQUES UTILISES EN IMMUNOLOGIE (1 ET 2) : 1) PURIFICATION DES ANTICORPS : 1) Chromatographie d’affinité : Principe : purification d’un anticorps spécifique d’un antigène à partir d’un mélange complexe d’anticorps Utilisation d’un tampon acide (pH 2.5-2.7) Anticorps rouge reste accroché aux billes et le marron descend Désolidarisation du complexe anticorps-gel à l’aide d’un tampon d’élution (pH 2.5-2.7) Les anticorps polyclonaux sont un mélange d'anticorps reconnaissant différents épitopes sur un antigène donné. Au cours de la réponse immunitaire, un organisme synthétise des anticorps dirigés contre plusieurs épitopes d'un antigène : réponse polyclonale. Les anticorps monoclonaux sont des anticorps ne reconnaissant qu'un seul type d’épitope sur un antigène donné. Les anticorps monoclonaux sont par définition tous identiques et produits in vitro par un seul clone de plasmocyte : l’hybridome. Un lymphocyte synthétise un seul type de plasmocytes un seul type d’anticorps produits. Par production in-vitro fabrication des hybridomes à partir de cellules cancéreuses. PRODUCTION D’HYBRIDOMES A PARTIR DE CELLULES CANCEREUSES Combinaison entre activités cancéreuses (dvpt à l’infini) et plasmocytes (synthèse d’anticorps) : Injection sur souris prélèvement sur la rate (lymphocytes B bcp stockés) On les mets dans des puits (une cellule d’hybridomes par puit) Stimulation par des épitopes antigéniques de l’antigène injecté synthèse d’anticorps amplification de la réaction en mettant dans un plus grand récipient Broyage obtention du filtrat Fusion entre plasmocytes et I.2.2 IMMORTALISATION DE CELLULES B A PARTIR DU VIRUS D’EPSTEIN BARR Utilisation de cellules quiescentes puis infection du virus d’Ep. Barr transformation en cellules « immortels ». Virus SB-40 PRODUCTION D’HYBRIDOMES A PARTIR DE CELLULES TRANSFORMEES PAR LE VIRUS SV40 Le génome du virus SV40 code pour l’antigène T (AgT), oncoprotéine impliquée dans l’immortalisation cellulaire et interagissant avec plusieurs protéines cellulaires (p53, pRb). 2) REACTIONS DE PRECIPITATION : 1) EN MILIEU LIQUIDE : Excès d’anticorps : peu de complexes peu de précipitations Equivalence : précipitations moyennes Excès d’antigène : beaucoup de précipitation EN MILIEU SOLIDE : IMMUNODIFFUSION DOUBLE EN GEL TECHNIQUE D’OUCHTERLONY : Dépôt de solution diffusion de la solution à travers Plus la diffusion se fait + la concentration diminue Ligne de précipitation anticorps reconnaît l’antigène Plusieurs Ag ou un antigène avec plusieurs épitopes Agéniques : chaque anticorps se précipitent pour former plusieurs lignes de précipitation. (Acorps polyclonaux) Ag avec un seul épitope Agénique : anticorps précipitent pour former une ligne de précipitation (Acorps monoclonaux). Pas d’arc de précipitation : pas de reconnaissance. Parenté : -2 Ag des puits adjacents ont des lignes qui se suivent : identité -2 Ag des puits adjacents n’ont pas de lignes qui se suivent : non-identité. -2 Ag des puits adjacents ont des lignes qui se suivent et qui ne se suivent pas (formation d’un éperon).
