Séparation des cellules A partir de biopsie

Séparation des
cellules
Adhérence ou non
au support de
culture
A partir de biopsie
Chélateur de calcium
(collagénase, trypsine,
EDTA) +protéases
Pour des cellules
isolées
En fonction d’un
marqueur
membranaire
 Digestion des
protéines d’adhérence
Anticorps+bille magnétique
 Magnetic Activated Cell
Sorter (MACS)
Numération
Compte globule
Anticorps+ fluorochrome
Fluorescence Activated
Cell Sorter (FACS)
-nombre
-taille
Cytomètre de flux
Numération sanguine
Séparation des
composants cellulaires
Centrifugation
différentielle
(préparatrice
purification)
Lyse cellulaire
-mécanique: broyage, ultrason, cavitation
-osmotique
Ultracentrifugation
(gradient de densité)
-sédimentations
successives
-jusqu’au fond du
tube selon S
décroissant (sauf
surnageant)
-séparation
grossière
-nombre
-quantification de
marqueur par cellule
-tri des cellules
En vélocité
A l’équilibre = isopicnique
d particules > d max gradient
d particules < d max gradient
bandes successives +
possibilité de traverser
entièrement le gradient
bandes successives +
équilibre (=plus de
modification)