SUJET DE STAGE – MASTER BIOCHIMIE-BIOTECHNOLOGIES UE « Initiation à la Recherche – 1er semestre 2008-2009 Titre du stage : Rôle de l’ADN polymérase Kappa dans la réplication du génome de mammifère Responsable de l’encadrement : Marie-Jeanne Pillaire - Tél. 05 61 17 58 61 [email protected] Nom de l’équipe d’accueil et responsables : Instabilité Génétique et Cancer – IPBS – 205 route de Narbonne - Toulouse Dr Jean-Sébastien Hoffmann – Pr Christophe Cazaux Sujet d’étude : La réplication de l’ADN permet la duplication fidèle du génome avant la division cellulaire. Cette étape du cycle cellulaire est critique dans la mesure où les fourches de réplication sont des structures fragiles pouvant être bloquées par de nombreux obstacles. Leur arrêt peut conduire à leur effondrement et engendrer des cassures au sein du génome. Les mécanismes de surveillance chargés de détecter et résoudre ces dysfonctionnements sont essentiels au maintien de la stabilité génomique. Des travaux réalisés ces derniers mois au sein de l’équipe mettent en évidence que l’ADN polymérase Kappa humaine jusque là décrite pour participer à la réplication ou la réparation de l’ADN endommagé, serait impliquée dans la mise en place des mécanismes de surveillance du génome. Nous cherchons maintenant à comprendre, sur le plan moléculaire, le rôle de l’ADN polymérase Kappa dans ce processus et le sujet que nous proposons y participe. L’objectif du stage sera de déterminer si l’absence de l’ADN polymérase Kappa perturbe la réplication du génome de mammifère spontanément ou en réponse à des traitements provoquant l’arrêt des fourches. L’étudiant utilisera des techniques de biologie cellulaire, biologie moléculaire et biochimie classiques (culture cellulaire, microscopie à fluorescence, extraction d’ADN génomique, digestion enzymatique, western blot) mais aussi et surtout une technique originale, le peignage moléculaire de l’ADN, permettant d’analyser à l’échelle de la molécule unique le programme de réplication des cellules (vitesse des fourches de réplication, distance entre origines). L’analyse des données acquises par peignage moléculaire nécessitera l’utilisation d’outils informatiques et statistiques. Parallèlement à une formation technique, une formation théorique sera assurée afin que l’étudiant(e) évolue vers plus d’autonomie dans la gestion des expériences.