multiplication des vitroplants

BTSA 1
pluri/M55
TP 3
MULTIPLICATION DES VITROPLANTS
Biotechnologie végétale
Objectif de cette séance :
Préparer une paillasse. Travailler en zone stérile. Manipuler sous PSM. S’initier à une
technique de laboratoire.
Introduction
La culture in vitro (aussi appelé micropropagation) est une technique visant à régénérer une
plante entière à partir de cellules ou de tissus végétaux, en utilisant des techniques modernes
de culture cellulaires.
Elle permet de garder des plants stériles, exempts de virus et autres infections en plus de
pouvoir produire rapidement une large quantité de plantules. Elle est utilisée pour la création
de nouvelles plantes (par exemple des plants génétiquement modifiés) ; la multiplication de
plantes commerciales produisant peu ou pas de graines ; ou encore la conservation et
multiplication d’espèce rares.
Typiquement, les plantes (en fait seul une ou quelques cellules suffises) sont placées sur un
milieu de croissance stérile (qui comprend du saccharose comme source d’énergie, des
vitamines et des nutriments) et dans un environnement avec une température, humidité et
luminosité contrôlées.
La technique :
La multiplication végétative est un processus spécifique des plantes. Chaque cellule possède
en effet, les potentialités nécessaires et suffisantes pour se multiplier et surtout pour
s'organiser en tissus différents permettant de reconstruire une plante: c'est la totipotentialité
des cellules végétales.
La découverte des hormones végétales a permis la multiplication en conditions aseptiques,
c’est-à-dire in vitro, des plantes, mais sa complète maîtrise est encore loin d'être atteinte dans
la majorité des cas.
Trois méthodes de multiplication in vitro peuvent être envisagées:
-la culture de méristèmes ou d'apex de tige: elle demeure la plus généralisable et la
plus sûre pour assurer la reproduction de copies conformes. De plus elle peut associer la lutte
phytosanitaire à la multiplication
-la reconstitution de plantes par néoformation de bourgeons et de racines sur un
cal.
-l'embryogenèse somatique qui permet la régénération de plante à partir de cellules
séparées.
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Protocole :
MULTIPLICATION DES VITROPLANTS)
Allumer le PSM en suivant les consignes

Première étape : préparation du plan de travail.
Nettoyer le PSM en passant de l’alcool sur la zone de travail
Déposer tout le matériel nécessaire.
Lister le matériel :
- Choisir les explants.
Se laver les mains et les avant-bras au savon.

Deuxième étape : désinfection des explants.
Prélever une grande portion de tige (explant), la plonger 20 s dans l'alcool puis 3 min
dans de l'eau de Javel.
Rincer dans trois eaux stériles différentes (5 min chaque fois).

Troisième étape : préparation des explants.
Mettre la portion de tige dans une boîte de Pétri, la couper en tronçons portant chacun
un bourgeon axillaire en repérant bien la base et le sommet de chacun d'eux.
Choisir des explants verts. Laisser sécher les explants sur une feuille stérile au fond du
PSM.

Quatrième étape : mise en culture.
Introduire les tronçons préparés dans le flacon contenant le milieu de culture.
Veiller au sens de l’explant.
Placer le flacon de culture à 25 C environ dans la zone de culture.
Citer les difficultés rencontrées :
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